苦参碱衍生物ZS10基于PI3K/AKT信号通路诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡

目的探讨新型苦参碱衍生物ZS10抑制BEL-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡的信号通路。方法采用有机合成的方法,合成ZS10;采用MTT法,分析在作用时间分别为24、48、72 h时,ZS10对BEL-7402细胞增殖的抑制作用,计算IC 50;采用DAPI染色法,观察BEL-7402细胞状态;采用克隆形成法,观察BEL-7402细胞集落形成情况;采用流式细胞仪观察BEL-7402细胞周期阻滞情况和凋亡情况;采用Western blot法检测PI3K-AKT通路及相关蛋白表达水平。结果获得新型苦参碱衍生物ZS10,并进行了结构表征;MTT结果表明,ZS10作用于BEL-7402细胞48 h,IC 50为(6.62±1.11)μmol·L^(-1);DAPI染色结果表明,给药浓度升高,细胞核发生明显改变;克隆形成结果表明,ZS10明显抑制BEL-7402细胞的集落形成;流式细胞术结果表明,ZS10诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞S期。Western blot结果显示,ZS10在浓度为0~8μmol·L^(-1)时,对PI3K/AKT通路及其相关蛋白具有调节作用,并呈剂量依赖性。与对照组比较,给药组PI3K、AKT、p-AKT和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平均明显降低,促凋亡蛋白Bax表达水平均明显升高,周期蛋白Cyclin D1和CDK2表达水平均明显降低,迁移蛋白EGFR、N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达升高。结论ZS10对肝癌细胞BEL-7402的生长、增殖具有抑制作用。

姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中HIF-1α表达的影响

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α表达的影响以及蛋白酶体在其中的作用。方法以0、2.5、5、10、15、20μmol.L-1的姜黄素处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,W ST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和W estern B lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的表达;以0、10μmol.L-1姜黄素、10μmol.L-1MG-132、10μmol.L-1姜黄素+10μmol.L-1MG-132处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,采用W esternB lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的蛋白表达。结果①不同剂量的姜黄素对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性;②随着姜黄素浓度的增加,H IF-1α蛋白表达逐渐降低;③不同剂量的姜黄素对H IF-1αmRNA表达的影响与对照组相比差异无显著性;④MG-132能够逆转姜黄素对H IF-1α蛋白的减少。结论姜黄素抑制人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α蛋白表达是通过转录后机制和蛋白酶体途径。

枸杞多糖诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡及其周期的实验研究

目的:探讨枸杞多糖对人肝癌细胞Bel-7402凋亡及其周期的影响。方法:利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测枸杞多糖对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人肝癌细胞Bel-7402凋亡率、细胞周期变化。结果:经枸杞多糖作用后的人肝癌细胞Bel-7402出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量LBP组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,1000μg/ml LBP处理组的抑制率达96.02%。药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达21.3%。结论:枸杞多糖可明显抑制人肝癌细胞Bel-7402的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期。

蛇毒复合酶对人肝癌细胞BEL-7402的抑瘤研究

观察蛇毒复合酶对人肝癌细胞 BEL - 74 0 2体外生长的抑制作用。经体外细胞培养 ,采用台盼兰染法、细胞形态观察和流式细胞术 ,检测人肝癌细胞的生长抑制率 ,以及细胞形态和细胞周期的变化。结果 ,蛇毒复合酶对人肝癌细胞有极强的抑瘤作用 ,8h和 12 0 h抑瘤率分别达 79.5%和 94 .5%。镜检及涂片染色发现癌细胞胞膜破裂、胞质外溢。流式细胞术分析显示蛇毒复合酶主要杀伤 G0 / G1期人肝癌细胞 ,同时 ,阻滞 S期细胞进入 G2 / M期。说明 :蛇毒复合酶对人肝癌细胞具有一定体外抑瘤作用 ,其作用机理与破坏细胞胞膜和干扰细胞生长周期有关。

半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用

目的观察并比较半夏蛋白对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法应用流式细胞技术,检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用,并观察了其诱导凋亡作用的量-效关系。结果60%硫酸铵沉淀蛋白没有明显诱导Bel-7402细胞凋亡的作用,而30%硫酸铵沉淀蛋白有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。30%沉淀进一步分离结果显示,只有0.1 mol/L NaCl洗脱峰有一定诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白有一定的诱导Bel-7402细胞凋亡作用,其主要成分可能存在于总有机酸部位。

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。

柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度和细胞内VCR蓄积的影响

目的:测定中药柴胡(BupleurumChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和长春新碱(Vincristine,VCR)浓度的影响,探索柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法:以Fura2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL7402细胞内[Ca2+]i。高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化。结果:柴胡提取物可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001),可使细胞内VCR浓度升高(P<0.01)。结论:柴胡提取物可以增加VCR在BEL7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL7402细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)。钙离子通道阻滞作用可能为柴胡提取物逆转BEL7402细胞多药耐药的机制之一。

半夏类药材不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的研究

目的:观察并比较半夏类药材的不同提取物对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法:应用MTT技术,检测半夏类药材不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用。并观察了不同提取物抑制作用的量效关系。结果:所有乙酸乙酯提取的部位都有比较好地抑制Bel-7402细胞增殖的作用(P<0.01);乙醇提取部位有一定抑制作用(P<0.05);而所有石油醚提取部位都无明显作用。此外,乙酸乙酯和乙醇提取部分对肝癌Bel-7402细胞生长抑制作用,存在着显著的量效关系,其中以亳州掌叶半夏最为明显。结论:半夏乙酸乙酯和乙醇提取物有抑制体外培养肝癌细胞增殖的作用,呈现出显著的量效关系。

重组人生长激素对人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响

背景与目的:在原发性肝癌患者围手术期应用重组人生长激素(recombinanthumangrowthhormone,rhGH),于改善患者状况同时是否会促进原有肿瘤生长、转移与复发,鲜见相关的研究报道。大多数原发性肝癌能表达生长激素受体(growthhormonereceptor,GHR),本研究拟探讨rhGH对表达GHR的人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响。方法:放射配体分析法证实肝癌细胞Bel-7402表达GHR后行裸鼠肝内移植,将32只肝内移植人肝癌细胞Bel-7402的裸小鼠随机分为4组:1组为对照组,实验组则根据rhGH剂量不同分为3组[即0.5u·(kg·d)-1、1.0u·(kg·d)-1、2.0u·(kg·d)-1]。在肝脏肿瘤移植术后2周开始动物皮下注射rhGH2周,实验结束处死动物,检查肿瘤情况;用抗增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)单克隆抗体免疫组化染色检测瘤组织PCNA表达情况。结果:移植瘤组织的重量与体积在rhGH1.0u·(kg·d)-1、2.0u·(kg·d)-1组与对照组之间比较有显著性差异(P<0.05),但0.5u·(kg·d)-1组与对照组无显著性差异(P>0.05)。各实验组肿瘤PCNA标记指数(labelingindex,LI)均高于对照组(P<0.05),各实验组之间相互比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。rhGH用药剂量与LI显著相关(r=0.779,P<0.001)。结论:rhGH能促进裸小鼠肝脏人肝癌细胞Bel-7402移植瘤的生长,其作用有随用药量增加而增强的趋势,两者之间存在一定相关性。

胡桃醌不同给药途径对人肝癌细胞BEL-7402裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的采用裸鼠皮下移植瘤模型,通过不同给药途径对胡桃醌抗肿瘤活性和毒性进行评价。方法建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射和局部注射两个给药途径观察胡桃醌抑制肿瘤生长的效果。结果①以600、300和150μg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,发现该剂量胡桃醌对肿瘤生长没有明显的影响;NK细胞活性检测发现,600、300μg/kg胡桃醌对裸鼠免疫功能有影响(P均<0.01),150μg/kg胡桃醌则没有影响(P>0.05);与阳性对照组(5-Fu)相比,600μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异无显著性(P>0.05),300和150μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异有显著性(P<0.05,P<0.01),结果提示胡桃醌对小鼠免疫系统有一定的损伤作用。②以4.5、3和1.5 mg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,抑瘤率分别为为78.24%、66.57%、48.94%;4.5、3 mg/kg胡桃醌的抑瘤作用可与阳性对照组比拟(P均>0.05)。但4.5 mg/kg胡桃醌组裸鼠出现明显的皮下脂肪减少、消瘦,并有死亡现象。③以pH 7.4和pH 4.0的600、300和150μg/kg胡桃醌人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型局部给药,结果发现不同pH(pH 7.4或4.0)600、300μg/kg的胡桃醌局部注射抑瘤作用与阳性对照组(5-Fu)组差异无显著性(P>0.05),而不同pH的150μg/kg胡桃醌抑瘤作用不明显。同一浓度不同pH药物的抑瘤作用差异无显著性(P均>0.05),但pH 4.0的胡桃醌组肿瘤细胞肝转移较少。结论胡桃醌不同给药途径均可抑制人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,但有一定的毒副作用,药物安全范围较小。

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内VCR蓄积的影响

目的测定中药柴胡(Bupleurun Chinese DC，BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内VCR蓄积的影响，以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制．方法高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化、结果柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内VCR浓度升高(P<0．01)．结论柴胡可以增加VCR在BEL-7402细胞内的积聚浓度，部分逆转BEL-7402细胞的MDR．

MR1 siRNA抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖

目的研究MR1基因对肝癌细胞增殖的影响及机制。方法化学合成MR1 siRNA,用脂质体lipofectamine2000转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,RT-PCR检测MR1 siRNA基因沉默效果。用SRB法、集落形成法和生长曲线法检测MR1 siRNA对BEL-7402细胞增殖的影响。流式细胞术检测BEL-7402细胞周期,用细胞同步化的方法,即与G2期阻滞药物噻氨酯哒唑(nocodazole)联合应用,以间接反映MR1 siRNA对肿瘤细胞周期的影响。Western blot法检测Cyclin D1蛋白。结果(1)300 nmol/LMR1 siRNA处理BEL-7402细胞24 h后,MR1基因的mRNA水平明显降低。(2)经siRNA处理后,BEL-7402细胞存活细胞数明显下降,细胞生长速度明显减慢,集落形成率显著下降,Cyclin D1表达水平明显降低。(3)MR1 siRNA与nocodazole联合处理BEL-7402细胞后,G2期细胞比例显著减少,而G1期细胞明显增多。结论MR1基因与人肝癌BEL-7402细胞增殖相关,抑制MR1表达,能够引起细胞的增殖抑制,其作用机制与诱导细胞的G1期阻滞有关。

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度的影响

目的测定中药柴胡(Bupleurun Chinese DC, BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,以探索柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制.方法以Fura-2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL-7402细胞内[Ca2+]i.结果柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001).结论柴胡可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降,为一种钙离子通道阻滞剂(Calcium channel blocker, CCB),提示钙离子通道阻滞作用为柴胡逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制之一.

布洛芬抑制人肝癌细胞BEL-7402生长及机制的初步研究

背景与目的:近来发现,临床上常用的非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)可以降低多种癌症的发病率。布洛芬(ibuprofen)作为一种常用的NSAIDs,对肝癌是否具有抑制作用,国内外鲜有报道。本研究初步探讨布洛芬抑制肝癌细胞BEL-7402的作用,并研究其相关机制。方法:肝癌细胞BEL-7402分为对照组和不同浓度布洛芬处理组,药物处理0、24、48和72 h后用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞的周期分布;细胞分析仪检测各组细胞活力及细胞凋亡;蛋白[质]印迹(Western blot)检测各组细胞增殖性核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中前列腺素E2(PGE2)蛋白表达水平。结果:布洛芬组中BEL-7402细胞增殖受到抑制,且抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。2.0 mmol/L布洛芬组48 h细胞活力明显低于对照组[(47.87±5.23)%vs(88.93±5.49)%],G0/G1期细胞比例明显高于对照组[(80.04±3.61)%vs(62.36±8.33)%],细胞早期凋亡率明显高于对照组[(36.65±10.07)%vs(9.81±6.80)%],差异有统计学意义(P<0.05)。布洛芬作用于细胞48 h后,PCNA、Cyclin D1、Bcl-2以及COX-2蛋白表达与对照组相比显著减少(P<0.05);细胞培养上清液中PGE2蛋白表达量与对照组[(23.98±4.89)ng/L vs(68.70±9.43)ng/L]相比,显著降低(P<0.01)。结论:布洛芬能够抑制肝癌细胞BEL-7402增殖与活力,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2及PGE2表达有关。

内毒素联合精氨酸对人肝癌细胞Bel-7402增生及凋亡的影响

目的:通过内毒素联合精氨酸诱导自分泌的一氧化氮(No)及其限速酶的表达,观察人肝癌细胞Bel-7402自分泌的一氧化氮的改变对其增生及凋亡的影响. 方法:Bel-7402细胞中NO产生的限速酶为诱生型合酶(iNOS),其底物为精氨酸(L-Arg).采用MTT法观察不同浓度的L-Arg及内毒素(LPS)对细胞增生的影响.采用细胞免疫组化的方法对iNOS在细胞中的表达进行观察.Tunel 法观察NO对细胞凋亡的影响. 结果:在iNOS的表达不受影响的情况下,0.625 mmol/L的L-Arg产生低浓度的NO,对细胞的增生有促进作用(对照组0.86±0.01,处理组0.87±0.02 P>0.05),2.5 mmol/L- Arg产生高浓度的NO,对细胞的增生有抑制作用(对照组0.86±0.01,0.83±0.01 P<0.05).100 ng/L LPS使iNOS的表达增强,使单位时间内NO的生成增多,细胞增生受抑.与L-Arg有协同作用.高浓度的NO能够促进细胞的凋亡. 结论:LPS可能通过促进iNOS的产生,在精氨酸的协同作用下,促进细胞凋亡,抑制细胞增生.

鳖甲煎丸对人肝癌细胞Bel-7402MAPK信号通路的影响（英文）

目的:观察鳖甲煎丸含药血清对人肝癌细胞Bel-7402的影响,探讨其抑瘤作用与MAPK信号通路之间的关系。方法:制备各浓度鳖甲煎丸大鼠含药血清,采用MTT法检测鳖甲煎丸含药血清对Bel-7402细胞增殖的影响,Western blot方法检测细胞中ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白表达情况。结果:MTT结果表明鳖甲煎丸可有效抑制肝癌细胞Bel-7402的增值;Western blot结果显示鳖甲煎丸能抑制ERK磷酸化,促进JNK磷酸化。结论:鳖甲煎丸可通过抑制p-ERK生成,促进JNK磷酸化,调节MAPK信号通路,进而发挥抑瘤作用。

华蟾素对人肝癌细胞Bel-7402细胞增殖及周期的影响

目的:观察华蟾素注射液对人肝癌Bel-7402细胞增殖及周期的影响。方法:将不同浓度的华蟾素注射液作用于Bel-7402细胞,应用噻唑蓝还原法(MTT比色法)检测华蟾素注射液对Bel-7402细胞增殖的影响;应用流式细胞术(FCM)检测Bel-7402细胞周期分布。结果:华蟾素注射液可以抑制Bel-7402细胞增殖,其抑制作用与作用时间和剂量呈正相关,并可使细胞阻滞于G2/M期。结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌细胞Bel-7402的增殖,并可使细胞阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡。

鳖甲煎丸对人肝癌细胞Bel-7402VEGF/Dll4-Notch信号通路的影响

目的:观察鳖甲煎丸含药血清促进人肝癌细胞Bel-7402的凋亡作用,探讨其抑瘤作用与VEGF/Dll4-Notch信号通路之间的关系。方法:制备各浓度鳖甲煎丸大鼠含药血清,采用AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测鳖甲煎丸对Bel-7402细胞凋亡的影响,Western blot方法检测细胞中VEGF、Dll4、NICD蛋白表达情况。结果:AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术结果表明鳖甲煎丸可有效促进肝癌细胞Bel-7402的凋亡;Western blot结果显示鳖甲煎丸能降低VEGF、Dll4、NICD蛋白表达。结论:鳖甲煎丸可通过降低VEGF、Dll4、NICD蛋白表达,阻断VEGF/Dll4-Notch信号转导,抑制肿瘤血管生成,减少肿瘤血液供应,最终控制肿瘤生长。

敬钊缨毛蛛蛛毒对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖、细胞周期和C-myc蛋白的影响

通过MTT方法可知敬钊缨毛蛛蛛毒对BEL 7402细胞增殖有较强的抑制作用(p<0.05),时效和量效关系良好.IC50为18mg/L.敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制BEL 7402细胞DNA的合成.流式细胞仪检测发现经过蛛毒作用的BEL 7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期.WesternBlot方法进一步检测到蛛毒作用BEL 7402细胞72h后,C myc蛋白表达减弱.实验结果表明,敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制人肝癌细胞BEL 7402的增殖和DNA的合成,其药理作用机理可能除了诱导凋亡外主要是使BEL 7402细胞周期相关蛋白C myc表达减弱,导致细胞周期的变化.

硼酸钠对人肝癌细胞Bel-7402基因表达的影响

目的:探讨硼酸钠对人肝癌Bel-7402细胞基因表达的影响。方法:用4 mmol/L硼酸钠处理Bel-7402细胞2 h和24 h。提取细胞总RNA,使用基因芯片进行基因表达分析,然后进行基因GO分析和Kegg信号通路分析。结果:与对照组相比,硼酸钠作用2 h和24 h后,Bel-7402细胞多个基因发生改变。2 h组有462个差异表达基因(270个上调、192个下调);24 h组有1917个差异表达基因(980个上调、937个下调)。GO分析显示硼酸钠引起Bel-7402细胞的差异基因,涉及到分子功能、生物学过程多个层级。Kegg通路富集分析显示,硼酸钠作用2 h后差异表达基因参与多条信号通路(NF-κB、MAPK等),作用24 h后差异表达基因主要参与NF-κB信号通路、细胞凋亡等。结论:硼酸钠处理Bel-7402细胞后,导致多种基因表达上调或下调,从而发挥多种生物学作用。