载脂蛋白C1表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨载脂蛋白C1 (APOC1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步阐明其相关分子机制。方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平及其与患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测不同肝癌细胞中APOC1mRNA表达水平,筛选APOC1低表达的人肝癌HepG2细胞作为研究对象。将pcDNA3.1-APOC1质粒转染至HepG2细胞过表达APOC1 (APOC1过表达组),以转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞为对照组,采用MTS法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测2组细胞增殖活性和增殖率,Transwell小室实验检测2组细胞中迁移细胞数,流式细胞术和TUNEL法检测2组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测2组细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、蛋白激酶B (AKT)、磷酸化AKT (p-AKT)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)蛋白表达水平。结果:TCGA数据库分析,肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平低于正常肝组织(P<0.05),并且APOC1 mRNA低表达组肝癌患者预后较差。RT-qPCR法检测,HepG2细胞中APOC1 mRNA表达水平最低,选取该细胞作为后续研究对象。与对照组比较,APOC1过表达组细胞增殖活性和增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.01), S期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。与对照组比较,APOC1过表达组细胞中p-ERK、 p-AKT和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:APOC1高表达能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制p-ERK、p-AKT、Bcl-2蛋白表达和促进cleaved caspase-3蛋白表达有关。

circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的 探讨circRNA CCND1对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH)实验及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA CCND1在HepG2细胞及L02细胞中的表达情况;进一步干扰及过表达circRNA CCND1后,通过qRT-PCR检测circRNA CCND1在HepG2细胞中的表达情况,CCK-8法和EDU法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况。结果 HepG2细胞circRNA CCND1相对表达量较LO2细胞高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组circRNA CCND1相对表达量较Control组和Si-NC组下降(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组和Oe-NC组升高(P <0.05)。各组细胞培养0、24、48、72和96 h后细胞增殖活性比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组细胞增殖活性比较,差异有统计学意义(P <0.05);(3)各组细胞增殖活性变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Control组及Si-NC组比较,Si-circRNA CCND1组细胞凋亡率升高(P <0.05),G_(0)/G_(1)期比值升高(P <0.05),S及G_(2)/M期比值下降(P <0.05);与Control组及Oe-NC组比较,OecircRNA CCND1组细胞凋亡率下降(P <0.05),G_(0)/G_(1)期比值下降(P <0.05),S及G_(2)/M期比值升高(P <0.05)。Si-circRNA CCND1组细胞侵袭数、细胞迁移数较Control组、Si-NC组少(P <0.05),Oe-circRNA CCND1组较Control组及Oe-NC组多(P <0.05)。结论 circRNA CCND1能够促进人肝癌细胞HepG2细胞增殖、侵袭和迁移,抑制细胞凋亡。

香蕉皮抗氧化和抑制人肝癌HepG2细胞活性研究

对香蕉皮提取物(banana peel extraction,BPE)的体外抗氧化作用和抗肿瘤活性进行了研究。使用福林酚和硝酸铝法测定BPE中总多酚和总黄酮含量;通过检测DPPH和O2-自由基清除能力测定BPE的体外抗氧化活性;采用Alamar Blue法检测BPE对HepG2细胞活性的影响;荧光染色及流式技术检测HepG2细胞凋亡;免疫印迹技术检测凋亡蛋白的变化;Caspase活性检测试剂盒测定Caspase-3和Caspase-9的活性;Caspase-9和Caspase-3抑制剂验证BPE抗肿瘤相关的信号转导通路。结果表明,BPE中总多酚和总黄酮含量分别为39.23±2.35 mg·L^(-1)和26.53±1.97 mg·L^(-1);BPE显示出一定的DPPH和O2-自由基清除能力(65.31%±3.82%和51.29%±4.23%),可明显抑制HepG2细胞的增殖(IC50=54.32 mL·L^(-1));BPE通过上调Caspase-3、Bax、Bid、Apaf-1、Bak、p53、Caspase-9的表达,下调Bcl-2、Bcl-xl的表达诱导HepG2细胞凋亡;Caspase-9和Caspase-3抑制剂(Z-LEHD-FMK、Ac-DEVD-CHO)在一定程度上逆转了BPE的增殖抑制活性。BPE具有一定的自由基清除能力,对HepG2细胞具有明显增殖抑制作用,这些结果为香蕉皮的进一步开发利用提供了数据支撑。

葡萄籽原花青素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及自噬性死亡

目的:探讨原花青素对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:改良MTT法(WST-8法)及克隆形成抑制实验观察原花青素对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察和Western blotting检测细胞自噬发生。结果:原花青素作用HepG2细胞后,不同质量浓度的原花青素对肝癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.01),原花青素作用于人肝癌HepG2细胞48 h的IC50为1.304×10-1g/L;与对照组相比随着原花青素作用于HepG2细胞的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;随着原花青素浓度的增加,人肝癌HepG2细胞出现明显G1期阻滞,且高浓度原花青素组出现明显的亚二倍体峰,当原花青质量素浓度达到1.6×10-1g/L时,亚二倍体百分率为81%;不同质量浓度原花青素作用后,出现明显的凋亡细胞及坏死细胞、自噬性死亡和非特异性死亡细胞群;经原花青素处理转染GFP-LC3质粒的HepG2细胞胞浆内,LC3呈现明显的点状聚集;细胞自噬标志蛋白LC3-II的蛋白表达水平随着原花青素浓度增加逐渐增多。结论:原花青素通过诱导细胞凋亡及自噬性死亡的方式抑制人肝癌细胞的生长。

氧化苦参碱对人肝癌HepG2细胞增殖及能量代谢的影响

目的研究氧化苦参碱对人肝癌HepG2细胞增殖及能量代谢影响,探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用MTT、生长曲线、苏木素—伊红(HE)染色、透射电镜检测氧化苦参碱对HepG2细胞増殖抑制和形态学影响,分光光度试剂盒检测能量代谢有关酶活力及代谢产物含有量,用人脐静脉内皮ECV304细胞作对比。结果与对照组相比,氧化苦参碱作用HepG2细胞48 h后,细胞数量减少、体积缩小,出现凋亡小体等形态学改变;细胞中己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性明显下降,乳酸(LD)含有量降低;氧化苦参碱对ECV304细胞增殖抑制和能量代谢的影响不明显。结论氧化苦参碱可通过干扰HepG2细胞能量代谢来抑制细胞増殖、促进细胞凋亡,其对肿瘤细胞具有一定特异性。

灵芝肽诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的细胞学观察

目的:研究灵芝肽(Ganoderma lucidumpe ptides,GLP)在体外对人肝癌HepG2细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:HepG2细胞用含不同浓度GLP培养基培养12、24、36、48、60h,GLP分为5个浓度梯度,分别为0.25、0.5、1、2、4mg/ml,采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察细胞生长抑制作用,用可见光显微镜、荧光显微镜观察细胞形态学变化、激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)观察细胞内钙离子浓度的变化。结果:MTT法显示灵芝肽能显著抑制人肝癌HepG2细胞的生长,且存在浓度及时间依赖性。镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变:细胞染色质浓缩,细胞体积缩小、核固缩深染、细胞膜出泡、凋亡小体形成;LSCM观察到胞内钙离子浓度明显增加。结论:0.25～4.0mg/ml的GLP体外可显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,存在量效关系和时效关系,能诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并且提示细胞内钙离子浓度的升高可能是细胞凋亡的机制之一。

猫爪草总皂苷对人肝癌HepG2细胞活性的影响

目的观察猫爪草总皂苷体外对人肝癌HepG2细胞活性的影响。方法采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖的影响。结果猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖和集落形成均有显著性的抑制作用,呈现较好的量效关系。结论猫爪草总皂苷能较好地抑制HepG2细胞增殖。

雷公藤红素对体外人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的:研究雷公藤红素对体外人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用CCK-8法测定2、5、10μmol/L雷公藤红素分别作用24、48、72 h后的细胞活性,并计算增殖抑制率和半数抑制浓度(IC_(50));采用流式细胞术检测2、5、10μmol/L雷公藤红素分别作用24 h后细胞的凋亡率及周期变化,并以二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照;采用罗丹明123染色法测定2、5、10μmol/L雷公藤红素分别作用48 h后的细胞线粒体膜电位,并以DMSO为阴性对照;采用Western blot法检测5μmol/L雷公藤红素作用0、12、24、36 h后细胞中促凋亡相关基因Bax和B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)的蛋白表达。结果:2、5、10μmol/L雷公藤红素均可抑制细胞的增殖,IC_(50)为5.834μmol/L。2、5、10μmol/L雷公藤红素均可诱导细胞凋亡。5、10μmol/L雷公藤红素可阻滞细胞于G_0/G_1、S期,并可降低线粒体膜电位,较阴性对照差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且以上作用均具有浓度依赖性。5μmol/L雷公藤红素作用12、24、36 h后可上调细胞中Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达,并呈现一定的时间依赖性,较0 h时差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:雷公藤红素可明显抑制体外人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与增强线粒体通透性、促使凋亡诱导因子释放有关。

槲皮素对人肝癌HepG2细胞的作用与机制

目的:探讨槲皮素(Qu)对人肝癌HepG2细胞的作用及其对人肝癌HepG2细胞化疗效果的影响。方法:体外培养传代人肝癌细胞系HepG2细胞,以甲基噻唑基四唑(MTT)法和荧光染色法检测不同浓度Qu及联合阿霉素(ADM)对HepG2细胞抑制率和细胞凋亡率的影响,并进行比较。结果:Qu能抑制人肝癌HepG2细胞生长,诱发细胞凋亡,能提高抗HepG2细胞化疗效果。结论:Qn具有抗肝癌HepG2细胞和化疗增敏作用。

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞p53和Bcl-2表达影响的实验研究

目的:研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞p53和bcl-2表达的影响。方法:将实验大鼠随机分为4组,生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。无菌条件下从大鼠后腔静脉采血,分离血清。将同组大鼠血清混匀,冷藏备用。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。对标本进行含药血清作用的Western-blot蛋白表达分析即p53蛋白表达和Bcl-2蛋白的表达。结果:鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组p53蛋白表达增强,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组p53蛋白表达增强,三者无明显差异(P>0.05)。从数据上看,含药大鼠血清对p53蛋白表达增强的作用,中西药结合用药组最好,鳖甲煎丸灌胃组次之,最后是西药组。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组Bcl-2蛋白表达减弱,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组Bcl-2蛋白表达减弱,三者无明显差异(P>0.05)。从数据上看,含药大鼠血清对Bcl-2蛋白表达减弱的作用,中西药结合用药组最好,鳖甲煎丸灌胃组次之,最后是西药组。结论:鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞p53蛋白表达有增强作用,对Bcl-2蛋白表达有减弱作用。

桔皮素对人肝癌HepG2细胞体外增殖和侵袭的影响及机制研究

目的：考察桔皮素对人肝癌Hep G2细胞体外增殖和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法：以0（空白对照组）、10、20、40、60、80μmol/L桔皮素分别作用于细胞24、48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖率,并计算其半数抑制浓度（IC50）。以0、20、30μmol/L桔皮素作用细胞48 h后,采用Transwell侵袭实验考察其对细胞侵袭的影响;并分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应法和Western blot法考察其对细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Notch-1、免疫细胞表面抗原44（CD44）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）m RNA及其蛋白表达的影响;采用Western blot法考察蛋白激酶B（Akt）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的磷酸化水平。结果：1080μmol/L桔皮素对人肝癌Hep G2细胞的体外增殖均具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,增殖率较空白对照组显著降低（P〈0.05）,作用24、48 h后的IC50分别为55.7、23.4μmol/L。20、30μmol/L桔皮素作用48 h后,细胞侵袭能力明显受到抑制;细胞中N-cadherin、Vimentin、Notch-1、CD44和MMP-9 m RNA及其蛋白水平表达明显降低,E-cadherin m RNA及其蛋白表达水平明显升高,且Akt、GSK-3β磷酸化水平升高,较空白对照组差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：桔皮素可抑制人肝癌Hep G2细胞的体外增殖和侵袭;其机制可能与下调细胞中Notch-1表达、抑制细胞的上皮-间质转化而抑制CD44和MMP-9的表达,以及抑制其上游Akt-GSK-3β信号途径有关。

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨扶正解毒通络方对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖能力; RT-PCR检测细胞内Bax和Bcl-2 mRNA水平;免疫印迹(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、SIRT3、P53及Fas蛋白水平。结果:扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2细胞内Bcl-2基因转录,增加Bax基因转录;扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2胞内Bcl-2蛋白表达,增加Bax、活化的caspase-3、SIRT3、P53及Fas蛋白表达。结论:与正常对照组比较,正常血清组人肝癌细胞HepG2细胞内Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、基因及蛋白表达水平无明显改变;与正常血清组比较,扶正解毒通络方低、中和高剂量含药血清和阳性对照组HepG2细胞内Bcl-2基因转录减少,蛋白表达减少; Bax基因转录增加,蛋白表达增加,活化的caspase-3蛋白表达增加。

人肝癌HepG2细胞超微弱发光的观察

目的:探讨人肝癌HepG2细胞系超微弱发光的特征。方法:用IFFM-D型流动式化学发光仪检测人肝细胞株QZG及人肝癌HepG2细胞系超微弱发光的强度以及不同浓度鲁米诺(Lum inol)和双氧水(H2O2)对其超微弱发光的影响。结果:在10-4mol/L鲁米诺及0.3%双氧水条件下,人肝癌HepG2细胞超微弱发光强度明显高于人肝细胞株QZG(P<0.05),并随细胞浓度增高其超微弱发光强度呈线性增高,其差异显著(P<0.05);提高鲁米诺浓度为10-3mol/L时,人肝癌HepG2细胞发光强度明显增加(P<0.05);提高双氧水浓度为3%时,其超微弱发光强度的变化无显著差异(P>0.05)。结论:人肝癌HepG2细胞的超微弱发光强度明显高于人肝细胞株QZG,细胞浓度及鲁米诺、双氧水浓度变化能影响细胞超微弱发光强度。超微弱发光反映了肿瘤细胞的功能状态,检测肿瘤细胞超微弱发光强度可作为一项敏感的肿瘤细胞生理及代谢指标。

甲壳胺诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的:通过体外实验探讨甲壳胺是否对人肝癌细胞HepG2具有生长抑制及诱导凋亡作用。方法:在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的甲壳胺,培养48 h,于倒置相差显微镜下观察甲壳胺处理组及对照组细胞形态学变化;用流式细胞术(FCM)检测HepG2细胞的凋亡率,Western印迹检测甲壳胺处理组及对照组Bcl-2和p53蛋白的表达变化。结果:HepG2细胞对照组的凋亡率为1.66%,经过0.5和2.0 mg/mL甲壳胺处理后的凋亡率分别增加4.4和8.7倍;Western印迹结果显示甲壳胺处理后,p53蛋白表达水平显著增强,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论:甲壳胺对体外培养的HepG2细胞生长有抑制作用和诱导凋亡作用。

生长抑素对人肝癌HepG2细胞增殖及cyclinD1、cyclinE蛋白表达的影响

目的探讨生长抑素治疗肝癌的作用机制。方法取对数生长期HepG2细胞以不含血清的培养液使其周期同步化，以含血清培养液继续培养24h后随机分为观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组，前三组分别加入质量浓度为100、200、400μg／（kg·d）的生长抑素，对照组加入等体积RPMll640培养液24—72h。MTT比色法观察各组细胞增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞周期分布，免疫组化法检测周期素D1（cyclinD1）、周期素E（cyclinE）蛋白表达。结果观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组不同时间点细胞增殖抑制率均显著高于对照组，且同一时间点观察Ⅲ组〉观察Ⅱ组〉观察I组，同组中72h〉48h〉24h（P〈0．05、0．01）；观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组G，期细胞比例均显著高于对照组，观察Ⅱ、Ⅲ组S期细胞比例均显著低于对照组（P〈0．05、0．01）；观察Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组cyclinD1、cyclinE蛋白水平均显著低于对照组，且观察Ⅲ组〈观察Ⅱ组〈观察Ⅰ组（P〈0．05、0．01）。结论生长抑素可通过下调cyclinD1、cyclinE表达抑制HepG2细胞增殖，此可能为其治疗肝癌的作用机制之一。

莪术醇通过调控PI3K/AKT通路促进人肝癌HepG2细胞凋亡

目的探讨莪术醇促进人肝癌HepG2细胞凋亡的作用是否与PI3K/AKT通路有关。方法采用MTT法检测不同浓度(0、10、25、50、100μmol·L^(-1))莪术醇干预HepG2细胞24、48 h的增殖抑制率,Hoechst 33258染色法观察细胞核凋亡形态,Western blot法检测不同浓度莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对HepG2细胞p-PI3K、p-AKT、Caspase-3蛋白表达的影响。结果莪术醇对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性,但干预48 h对比24 h差异无统计学意义;Hoechst 33258染色发现,莪术醇干预后,同一视野下细胞数目明显减少,细胞透亮,部分细胞核碎裂,核固缩,呈现典型的凋亡形态学特征;Western blot结果显示,莪术醇能显著降低细胞p-PI3K、p-AKT蛋白的表达,上调凋亡执行蛋白Caspase-3的表达,与LY294002联用后表现出良好的协同作用,对各蛋白表达的调控较单独用药更加明显。结论莪术醇能通过抑制PI3K/AKT通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。

人肝癌HepG2细胞培养的体会

通过对人肝癌HepG2细胞培养过程进行思考，提出人肝癌HepG2细胞的培养方法和培养条件，获得大量贴壁培养的人肝癌HepG2细胞，并将其广泛地应用于临床毒理性试验研究、抗肿瘤机制研究及多种肝炎病毒感染机制的研究等方面。

大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的研究

目的研究大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法用不同浓度的大蒜素作用于体外培养的HepG2细胞,采用MTT法检测大蒜素对HepG2细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察HepG2细胞的形态学变化,流式细胞术检测大蒜素对HepG2细胞周期和凋亡率的影响。结果大蒜素可抑制人肝癌HepG2细胞增殖,且具有明显剂量和时间依赖性,24h、48h和72h大蒜素抑制HepG2细胞的IC50分别为(48.26±1.66)μg/mL、(31.89±1.51)μg/mL和(23.79±1.32)μg/mL。32μg/mL大蒜素作用HepG2细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征。流式细胞术检测表明大蒜素作用HepG2细胞后,可将细胞阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用,可能与诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。

薯蓣丸不同组分提取物对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究经方薯蓣丸不同组分提取物对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其治疗肝癌恶液质可能的影响机制。方法:采用四甲基氮噻唑蓝(MTT)法比较不同浓度的薯蓣丸不同组分提取物在不同作用时间对体外培养HepG2细胞增殖的影响,同时采用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率。结果:薯蓣丸不同组分提取物对HepG2细胞增殖有抑制作用,在一定范围内,薯蓣丸不同组分提取物的浓度越大、作用时间越长,对HepG2细胞的抑制作用越强;在薯蓣丸的水提取物中,以石油醚组分和乙酸乙酯组分抑制增殖作用最强(P<0.05);在薯蓣丸的醇提取物中,以石油醚组分、乙酸乙酯组分和氯仿组分抑制增殖作用最强(P<0.05)。不同浓度的薯蓣丸不同组分提取物均具有一定程度诱导HepG2细胞凋亡的作用,在薯蓣丸的水提取物和醇提取物中,均以石油醚组分和乙酸乙酯萃取组分诱导凋亡最强(P<0.05),其中以薯蓣丸醇提取物的凋亡作用更加明显(P<0.05)。结论:薯蓣丸水提物和醇提物均有一定的抑制HepG2细胞增殖和诱导其凋亡的作用,以石油醚萃取组分和乙酸乙酯萃取组分最为明显,可能是其治疗肝癌恶液质的机制之一。

麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制研究

目的:研究麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制。为临床抗肿瘤治疗提供理论依据。方法:MTT比色法检测人肝癌HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测HepG2细胞的凋亡及细胞周期变化;吖啶橙、Lyso-Tracker Red(溶酶体红色荧光探针)染色、HepG2-GFP-LC3转染细胞等检测细胞自噬;Western blotting(蛋白质印迹法)检测人肝癌HepG2细胞自噬信号通路中关键蛋白的变化。结果:人肝癌HepG2细胞的增殖被麦冬皂苷B抑制,而且麦冬皂苷B可诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬,但不诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可导致LC3I转变为LC3II和Beclin-1(自噬标志性蛋白)表达增加,自噬抑制剂3-MA几乎完全逆转其抗增殖作用。Western blotting检测结果表明,AKT、mTOR和p70S6K的磷酸化及PTEN上调是被麦冬皂苷B抑制的结果。结论:麦冬皂苷B通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬。