苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的探讨苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制。方法体外培养人肝癌细胞MHCC97-H,采用CCK-8法检测细胞活性,计算苍术酮的半数抑制浓度(IC50)。将MHCC97-H细胞分为对照组和苍术酮5、10、20μmol·L^(-1)浓度组,分别干预24 h。采用克隆形成实验(培养2周)检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western Blot法检测细胞上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白的表达情况。结果苍术酮干预MHCC97-H细胞24 h的IC50为24.97μmol·L^(-1)。与对照组比较,苍术酮10、20μmol·L^(-1)组的MHCC97-H细胞集落数显著减少(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),MHCC97-H细胞E-钙黏蛋白(E-cad)表达显著上调(P<0.01);苍术酮5、10、20μmol·L^(-1)组的MHCC97-H细胞迁移数及侵袭数均显著减少(P<0.05,P<0.01),MHCC97-H细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cad)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达显著下调(P<0.01),金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论苍术酮能够抑制人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡,可能与调控细胞EMT及凋亡相关蛋白表达有关。

荷包牡丹碱对人肝癌MHCC97-H细胞转移、侵袭的影响及机制研究

目的探讨荷包牡丹碱对人肝癌MHCC97-H细胞转移、侵袭的影响及潜在机制。方法体外培养MHCC97-H细胞至对数生长期,分别经5、10、25、50、100μmol/L荷包牡丹碱处理24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖能力。5、10、25μmol/L荷包牡丹碱处理MHCC97-H细胞24 h,MTT法检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞转移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测VEGF、MMP-2及MMP-9基因表达水平,蛋白免疫印迹实验检测p-JAK2及p-STAT3蛋白表达水平。结果25μmol/L荷包牡丹碱处理MHCC97-H细胞48、72 h及50、100μmol/L荷包牡丹碱处理24、48、72 h后的细胞活力下降明显,与对照组比较,差异显著(P<0.05、0.01);5、10、25μmol/L荷包牡丹碱处理MHCC97-H细胞24 h,细胞黏附能力、伤口愈合能力、穿膜数均明显下降(P<0.05、0.01),VEGF、MMP-2、MMP-9基因表达及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均明显下降(P<0.05、0.01)。结论荷包牡丹碱可以抑制人肝癌MHCC97-H细胞的转移及侵袭,该作用与下调VEGF、MMP-2、MMP-9基因表达及抑制JAK2/STAT3信号通路的活化有关。

舒芬太尼调控miR-1抑制肝癌细胞MHCC97-H增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的探讨舒芬太尼调控微小RNA-1(miR-1)表达对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法本研究起止时间为2018年3月至2019年9月,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同浓度的舒芬太尼对人肝癌MHCC97-H细胞活力的影响,q RT-PCR检测舒芬太尼对MHCC97-H细胞中miR-1表达的影响;通过脂质体转染法将miR-1抑制剂(inhibitor)及阴性对照转染至MHCC97-H细胞,实验分为Control组、舒芬太尼(Sufentanil)组、转染对照(Sufentanil+NC)组和转染(Sufentanil+miR-1)组。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组MHCC97-H细胞增殖能力,Transwell实验检测各组MHCC97-H细胞侵袭能力,划痕实验检测各组MHCC97-H细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组MHCC97-H细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果不同浓度的舒芬太尼对肝癌MHCC97-H细胞活力具有不同程度的抑制作用;与Control组比,Sufentanil组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(1.00±0.09)比(2.25±0.24)]明显升高(P<0.05),细胞增殖[(0.54±0.05)比(0.34±0.03)]、侵袭[(106.24±8.25)个比(51.34±5.02)个]和迁移能力[(37.36±4.01)%比(16.34±1.72)%]降低(P<0.05),MMP-2[(0.33±0.04)比(0.15±0.02)]和MMP-9[(0.24±0.02)比(0.11±0.01)]的表达下调(P<0.05);与Sufentanil+NC组比,Sufentanil+miR-1组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(2.20±0.21)比(1.42±0.15)]明显降低(P<0.05),细胞增殖[(0.32±0.03)比(0.46±0.04)]、侵袭[(52.36±5.14)个比(91.16±6.06)个]和迁移能力[(17.11±1.71)%比(29.85±3.10)%]升高(P<0.05),MMP-2[(0.15±0.02)比(0.27±0.02)]和MMP-9[(0.13±0.01)比(0.19±0.02)]的表达上调(P<0.05)。结论舒芬太尼可通过调控miR-1的表达抑制人肝癌MHCC97-H细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调控MMP-2和MMP-9表达有关。

益气化瘀解毒方对人肝癌细胞MHCC97-H迁移能力及趋化因子CXCL12、CXCR4、CXCR7表达的影响

目的观察益气化瘀解毒方对人肝癌细胞MHCC97-H迁移能力及趋化因子CXCL12、CXCR4、CXCR7表达的影响,探讨其相关作用机制。方法以索拉非尼为阳性对照,CCK-8法测定益气化瘀解毒方及索拉非尼对MHCC97-H细胞增殖的作用及最佳作用浓度,划痕实验观察MHCC97-H细胞迁移能力;Western blot检测药物干预24 h后CXCL12、CXCR4、CXCR7的蛋白表达。结果益气化瘀解毒方及索拉非尼均能抑制MHCC97-H细胞生长,24 h半数抑制浓度分别为0.095 g/m L、10μmol/m L;益气化瘀解毒方及索拉非尼均有抑制MHCC97-H迁移的能力;经益气化瘀解毒方干预后,MHCC9-H细胞CXCL12、CXCR4、CXCR7蛋白表达量均下降。结论益气化瘀解毒方能抑制MHCC97-H细胞增殖及迁移,其机制可能是通过下调CXCL12/CXCR4/CXCR7趋化因子轴发挥作用。

KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响

目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响,从而推测KAI1基因影响MHCC97-H肝癌细胞侵袭转移的机制。方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘附力。结果在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)裱衬表面,利用微管吸吮系统测得的各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组(678·4±101·8),MHCC97-H-AS组(1083·6±113·8),MHCC97-H-pCI组(853·0±105·4)及MHCC97-H亲本细胞组(834·6±130·5)(单位为10-10N,细胞数为25)。与MHCC97-H亲本细胞组比较,MHCC97-H-S组细胞对FN的粘附力显著下降(P<0·01),MHCC97-H-AS组细胞对FN的粘附力显著增加(P<0·01),而MHCC97-H-pCI组细胞对FN的粘附力无明显变化(P>0·05)。结论KAI1基因可能降低肝癌细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移。

白花蛇舌草总黄酮对TGF-β1诱导的肝癌MHCC97-H细胞EMT的逆转作用及其机制

目的探讨白花蛇舌草总黄酮(FOD)对TGF-β1诱导肝癌细胞MHCC97-H上皮细胞间质转化(EMT)的逆转作用及其相关机制。方法用TGF-β1诱导MHCC97-H细胞建立EMT模型,再将其分为5组:正常对照组、TGF-β1组、TGF-β1+FOD组、TGF-β1+5-FU组及TGF-β1+FOD+5-FU组,分别干预48h,Transwell侵袭小室法检测细胞体外侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中E-cadherin、vimentin蛋白的表达。结果与正常细胞形态相比,TGF-β1诱导后细胞呈现明显的长梭形,且侵袭能力增强(P=0.02);给予药物处理后,TGF-β1+FOD组、TGF-β1+5-FU组细胞的穿透能力较TGF-β1组减弱(P=0.03、P=0.02),且联合用药组减弱程度更加明显(P=0.01);Western blot结果显示,TGF-β1组细胞中E-cadherin蛋白表达显著降低(P=0.01),vimentin蛋白的表达显著增加(P=0.01),TGF-β1+FOD组、TGF-β1+5-FU组E-cadherin蛋白表达有所上调(P=0.03、P=0.02),vimentin蛋白的表达有所下调(P=0.04、P=0.03),且联合组变化更为显著(P=0.01)。结论 FOD能够逆转TGF-β1诱导的肝癌MHCC97-H细胞的上皮间质转化,其机制可能与其抑制TGF-β1诱导的E-cadherin蛋白下调及上皮细胞间质转化相关。

臭牡丹含药血清抑制人肝癌MHCC97-H细胞侵袭与迁移的作用及其机制研究

目的探讨臭牡丹含药血清对人肝癌细胞(MHCC97-H细胞)迁移与侵袭能力的影响及其机制。方法按照体重将SD大鼠随机分成4组:模型组和低、中、高3个剂量实验组,每组5只。低、中、高3个剂量实验组给予臭牡丹提取物0.55,1.09,2.18 g·kg^-1;模型组给予0.9%Na Cl,每日灌胃2次,连续3 d。腹主动脉取血后分离血清,制备各组含药血清,体外培养MHCC97-H细胞。Transwell实验检测细胞的迁移能力;免疫印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路中的磷酸Akt(p-Akt)和PI3K相关蛋白表达的影响。结果模型组和低、中、高3个剂量实验组的迁移细胞数分别为(256.0±28.6),(181.0±15.7),(118.0±14.7)和(66.0±12.4)个,3个实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型组和低、中、高3个剂量实验组的PI3K蛋白相对表达量(灰度值)分别为0.68±0.03,0.65±0.02,0.48±0.01和0.15±0.01;上述这4组的p-Akt蛋白相对表达量(灰度值)分别为0.37±0.04,0.33±0.02,0.25±0.01和0.09±0.01,中、高2个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论臭牡丹含药血清具有抑制肝癌MHCC97-H细胞迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路相关。

猫爪草皂苷对高转移肝癌细胞株HCCLM3及MHCC97-H增殖的影响

目的观察猫爪草皂苷(RRTS)对人高转移肝癌细胞株HCCLM3、MHCC97-H增殖的影响。方法将对数生长期HCCLM3、MHCC97-H细胞分为两组。RRTS组分别采用50、100、200、400μg/m L浓度的RRTS干预,每浓度5个复孔;5-FU组采用50μg/m L的5-FU干预,作用后72 h采用MTT法测定两组细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果 RRTS组各浓度对HCCLM3、MHCC97-H肿瘤细胞株的生长均有不同程度的抑制作用,随RRTS浓度增加,抑制作用明显增强,呈量—效依赖关系(P均<0.05);400μg/m L对两种细胞的生长抑制率与5-FU组比较差异无统计学意义。倒置显微镜下观察,两种细胞株经RRTS处理后,细胞密度降低,细胞相互分离,贴壁脱落,出现片状无细胞生长区,并见细胞碎片,细胞变圆,体积减小,核固缩,核颜色加深,折光性增强,随着RRTS剂量增加,这种变化更加明显。400μg/m L浓度的RRTS对肿瘤细胞的生长抑制作用与5-FU组相似。结论RRTS对HCCLM3、MHCC97-H细胞生长均有抑制作用。

KHI1正反义基因对MHCC97-H肝癌细胞KAI1蛋白表达的影响

目的:构建KAI1基因正、反义真核表达质粒,了解其对高转移潜能的MHCC97—H肝癌细胞KAI1蛋白表达的影响.方法:利用亚克隆技术构建KAI1基因正、反义真核表达质粒,并用脂质体法将其分别转入高转移潜能的MHCC97-H肝癌细胞系,通过免疫细胞化学SP法检测KAI1蛋白表达情况。结果:限制性内切酶分析证明两个重组子的结构均与KAI1正、反义基因表达质粒的预期结构一致。免疫细胞化学SP法检测显示,转入正义KAI1基因后的肝癌细胞KAI1蛋白染色加深,(细胞积分光密度 integra oculus dehter,IOD20.127 ± 5.099 vs 12.675±1.921,P<0.01);而转入反义KAI1基因的肝癌细胞则KAI1蛋白染色变浅,(IOD 8.681±2.472 vs 12.675 ± 1.921,P<0.01).结论:成功构建了KAIl基因正、反义真核表达质粒.KAI1正义基因能上调肝癌细胞KAI1蛋白的表达,相反,KAI1反义基因则能下调肝癌细胞KAI1蛋白的表达.

IGF-1R阻断剂抑制人肝癌细胞MHCC97-H增殖转移的研究

目的:探讨IGF-1R阻断剂在人肝癌细胞MHCC97-H增殖转移中的作用。方法:培养人肝癌细胞株MHCC97-H,预先给予IGF-1R阻断剂鬼臼苦素(picropodophyllin,PPP)10μmol/L干预1h,然后给予IGF-II 50ng/ml作用48h,观察各组细胞形态变化,噻唑兰(MTT)法分析细胞生长情况,Brdu法检测细胞增殖潜能,平板克隆实验观察并计算细胞克隆形成率,Real-time PCR及Western blot法观察细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9、-2(MMP-9、MMP-2)mRNA及蛋白表达情况,进一步分析细胞增殖转移情况。结果:IGF-1R阻断剂PPP可使MHCC97-H细胞形态发生明显改变;IGF-1R阻断剂PPP显著抑制MHCC97-H细胞存活率、细胞增殖及克隆形成(P<0.05);与对照组相比,IGF-II组MHCC97-H细胞中PCNA、MMP-9及MMP-2的mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05),而与IGF-II组相比,IGF-1R阻断剂PPP可明显抑制MHCC97-H细胞中PCNA、MMP-9及MMP-2的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:IGF-1R阻断剂通过抑制人肝癌细胞MHCC97-H生长增殖,下调PCNA、MMP-9及MMP-2的表达,发挥阻碍人肝癌细胞MHCC97-H增殖转移的功效。

KAI1基因对人肝癌细胞MHCC97-H粘附作用的影响

背景与目的:研究表明,KAI1基因对多种恶性肿瘤细胞具有转移抑制作用。本研究旨在通过探讨KAI1基因对具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H粘附作用的影响,揭示其转移抑制的分子生物学机制。方法:将载有KAI1基因的质粒转染入具有高转移潜能的MHCC97-H细胞,观察细胞的生长状态,运用ELISA、Western blot等方法测定细胞产生的可溶性细胞间粘附因子-1(sICAM-1)和E-钙粘连蛋白的变化,并通过集落形成实验、细胞粘附实验判定细胞的粘附特点。结果:转染KAI1基因的MHCC97-H细胞形态与转染前无明显差别,但胞浆内黑染颗粒增加;同时细胞分泌的sICAM-1以及细胞内E-钙粘连蛋白较转染前减少,在传代后第4天分别减少24.28%和26.02%。3h及4h的细胞粘附率分别下降11.34%和24.00%,克隆形成率则没有明显变化。结论:KAI1基因改变了MHCC97-H细胞的生长方式和细胞增殖情况,使细胞分泌的sICAM-1以及细胞内E-钙粘连蛋白的量明显减少,使细胞粘附率降低。

联苯双酯抗人高转移肝癌细胞株MHCC97-H侵袭转移的作用及其机制研究

背景与目的:侵袭转移是肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)预后差,死亡率高的重要原因之一。抑制肝癌细胞的侵袭转移是降低HCC发展和死亡率的重要策略。联苯双酯(dimethyldicarboxylatebiphenyl,DDB)是临床用于治疗肝炎的老药,本研究旨在观察DDB对人肝癌细胞的粘附和侵袭是否具有抑制潜力,并分析其可能的作用机制。方法:以人高转移肝癌细胞株MHCC97-H细胞为研究对象,MTT法检测DDB对MHCC97-H细胞的细胞毒作用及其对细胞与层粘连蛋白(laminin,LN)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)粘附的影响;Transwell细胞培养小室观察DDB对细胞侵袭能力的影响;逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)分析DDB对血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-typeplasminogenactivatorreceptor,uPAR)、nm23-H1mRNA表达的影响;ELISA法分析DDB对甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)分泌的影响;流式细胞仪观察DDB对AFP表达的影响。结果:DDB在对细胞无明显毒性的浓度下(10、50和100μmol/L),能够明显抑制高转移人肝癌细胞MHCC97-H与FN、LN的粘附;50和100μmol/LDDB能够抑制MHCC97-H细胞穿透人工基底膜的侵袭能力,抑制率分别为25.8%和32.3%,并能降低MHCC97-H细胞VEGF、nm23-H1及uPARmRNA的表达,50、100和200μmol/LDDB对MHCC97-H细胞AFP的分泌有明显抑制作用,抑制率分别为16.5%、17.5%和48.5%,DDB亦能降低AFP的表达。结论:DDB在无毒浓度下,对人高转移肝癌细胞株MHCC97-H细胞的侵袭转移有明显的抑制作用,该作用可能与其抑制VEGF和uPAR基因表达有关。

肿瘤转移抑制基因KAI1对MHCC97-H肝癌细胞粘弹性的影响

目的:探讨肿瘤转移抑制基因KAI1对高转移潜能肝癌细胞MHCC97-H粘弹性的影响. 方法:采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正或反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘弹特性. 结果:MHCC97-H肝癌细胞的粘弹性系数K1,K2,μ在转染KAI1正义基因后明显增加(P=0.007),在转染KAI1 反义基因后明显降低(P=0.000),而转染空载体后则无明显变化(P=0.444). 结论:KAl1基因对肝癌细胞的粘弹性有明显影响,这为肝癌侵袭和转移机制的研究提供了重要线索.

IGF-Ⅱ促进人肝癌细胞MHCC97-H生长增殖作用的研究

目的:探讨IGF-Ⅱ在人肝癌细胞MHCC97-H生长增殖中的作用。方法:培养人肝癌细胞株MHCC97-H,IGF-Ⅱ(25,50,100ng/ml)作用于不同时间点(24、48、72h),观察各组细胞形态变化,噻唑兰(MTT)法分析细胞生长情况,Brdu法检测细胞增殖潜能,平板克隆实验观察并计算细胞克隆形成率,细胞免疫荧光及Western blot法观察细胞增殖核抗原(PCNA)表达,进一步分析细胞增殖情况。结果:IGF-Ⅱ可使MHCC97-H细胞形态发生一定改变;IGF-Ⅱ时间依赖性地增加MHCC9 7-H细胞存活率,但与对照组比较无显著差异(P>0.05);IGF-Ⅱ可促进MHCC97-H细胞增殖,但与对照组比较无显著差异(P>0.05);IGF-Ⅱ(50ng/ml)对MHCC97-H细胞的克隆形成有一定的促进作用,但与对照组比较无显著差异(P>0.05);与对照组相比,IGF-Ⅱ(50ng/ml)组,MHCC97-H细胞中PCNA荧光表达和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:IGF-Ⅱ有诱导人肝癌细胞MHCC97-H生长增殖的趋势,亦可促进PCNA表达上调。

紫花牡荆素通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移和侵袭

目的用紫花牡荆素(casticin,CAS)处理MHCC97H细胞,观察其迁移和侵袭能力的变化,并初步探讨CAS的分子作用机制。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度CAS对MHCC97H细胞活力的影响;分组开展细胞迁移和侵袭实验,评估MHCC97H细胞的迁移和侵袭能力;逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CAS处理后,MHCC97H细胞的miR-148a-3p和Wnt1 mRNA表达变化;迁移侵袭相关蛋白(MMP2、MMP9)和Wnt1蛋白表达量采用Western blot检测;Dual-Luciferase报告基因检测miR-148a-3p与Wnt13′-UTR的结合情况。结果CAS明显抑制MHCC97H细胞的生存活力,其对这种细胞的IC_(50)约为10.0μmol·L^(-1),亚细胞毒浓度的CAS(3.0μmol·L^(-1))可减弱这种细胞的迁移和侵袭能力;miR-148a-3p mimic或CAS均能抑制MHCC97H细胞迁移和侵袭能力,且两者联合处理后的抑制作用强于单独使用;过表达Wnt1能有效减弱CAS的抑制作用;CAS能明显上调MHCC97H细胞miR-148a-3p表达,同时Wnt1、MMP2和MMP9的表达呈现下降;Dual-Luciferase报告基因发现,miR-148a-3p可以直接靶向Wnt13′-UTR。结论CAS可通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路减弱肝癌细胞的迁移和侵袭。

骨髓间充质干细胞对肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97-L侵袭能力和增殖能力的影响

目的研究骨髓间充质干细胞对肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97-L侵袭能力和增殖能力的影响。方法培养肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97-L株,分为两组,对照组用不含FBS的DMEM培养基处理,处理组用骨髓间充质干细胞处理,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力,采用划痕试验检测细胞侵袭能力,采用实时荧光PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)的mRNA含量。结果 1增殖能力:处理组MHCC97-H、MHCC97-L细胞MTt值明显高于对照组(219.5±23.4 vs.100±15.2,224.4±32.2 vs.100±16.8);2侵袭能力:处理组MHCC97-H、MHCC97-L细胞(A0-A24)/A0明显低于对照组(33.48±4.95 vs.100±16.82,27.62±3.45 vs.100±16.20);3VEGF、MMP的mRNA含量:处理组VEGF的mRNA含量明显高于对照组(232.5±24.5 vs.100±14.5,234.8±31.9 vs.100±15.5)pg/ml,MMP2、MMP9的mRNA含量明显低于对照(29.1±3.3 vs.100±15.8,32.7±3.8 vs.100±16.8;34.4±4.1 vs.100±16.4,28.4±4.1 vs.100±16.0)ng/ml。结论骨髓间充质干细胞能够增强肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97-L的增殖能力、上调VEGF的表达,但是却能降低细胞的侵袭能力、下调MMP2和MMP9的表达。

骨髓间充质干细胞对经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默肝癌细胞MHCC97-H的影响

背景:骨髓间充质干细胞对肝癌增殖能力和转移能力的影响是研究的热点,可通过基因工程技术对肝癌细胞进行改造,使其降低生物活性因子的表达,从而寻找合适的干预靶点,提高骨髓间充质干细胞的干预效能。目的:经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默的高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)与骨髓间充质干细胞共培养,观察MHCC97-H细胞侵袭能力的变化,并通过动物模型荧光成像观察骨髓间充质干细胞对MHCC97-H肝癌组织动物模型的干预作用。方法:(1)将MHCC97-H细胞细胞分为4组,MHCC97-H设为空白对照组,MHCC97-H基因沉默转染阴性对照为阴性对照组,MHCC97-H-转化生长因子β1为转化生长因子β1基因沉默组,MHCC97-H-骨桥蛋白为骨桥蛋白基因沉默组;(2)Transwells法进行各组细胞与骨髓间充质干细胞共培养实验,48 h后结晶紫染色,随机取3个视野,计数;(3)结合有红色荧光蛋白基因的各组MHCC97-H细胞株,分别自裸鼠右侧腋下接种复制皮下移植瘤模型。肿瘤体积到50 mm3开始瘤内注射骨髓间充质干细胞,4周后进行荧光强度分析;肝癌组织冰冻切片二脒基苯基吲哚细胞核染色后行荧光显微镜观察。结果与结论:(1)细胞计数结果表明,骨髓间充质干细胞使经基因沉默后的MHCC97-H细胞迁移数量明显减少;结晶紫染色病理图片显示,经基因修饰的MHCC97-H细胞迁移能力明显降低;(2)体内荧光成像结果显示,骨桥蛋白基因沉默组肿瘤体积明显缩小,荧光亮度低于其他组别,定量结果显示骨桥蛋白基因沉默组吸光度值明显降低,表明骨髓间充质干细胞对经骨桥蛋白干扰的MHCC97-H高转移潜能肝癌动物模型干预效能最佳;(3)病理切片荧光观察结果显示,骨髓间充质干细胞主要分布在肿瘤坏死区附近,骨桥蛋白基因沉默组荧光表达较转化生长因子β1基因沉默组和空白对照组多,表明MHCC97-H细胞经骨桥蛋白基因沉默后骨髓间充质干细胞在肿瘤中的分布增多;(4)结果提示,通过抑制骨桥蛋白和转化生长因子β1两种因子的表达可以降低肝癌细胞侵袭能力,经骨桥蛋白沉默可能更有利于基于骨髓间充质干细胞的生物治疗。

生长抑素类似物对人肝癌细胞株MHCC97-H的影响

目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽对人高转移潜能肝癌细胞株MHCC97-H的影响及可能机制.方法:MHCC97-H肿瘤组织种植于裸鼠肝脏建立肝癌动物模型27只,随机分为3组:阴性对照组和小、大剂量干预组,同等条件下饲养35d,记录动物模型生存期,死亡时质量;观察肝脏,肺脏病理改变;免疫组化方法检测肝脏肿瘤组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达变化.结果:奥曲肽干预组动物模型较阴性对照组动物模型死亡时平均体重增加,肝癌转移率下降(P<0.05);干预组间对比未见统计学差异(P>0.05);免疫组化显示干预组肝脏肿瘤细胞MMP-2表达较阴性对照组下调(P<0.05);干预组组间比较未见统计学差异(P>0.05).结论:奥曲肽可改善荷MHCC97-H细胞裸鼠肝癌模型生存质量,抑制MHCC97-H细胞肺转移,下调肿瘤组织MMP-2的表达是奥曲肽抑制MHCC97-H细胞侵袭转移的可能机制之一.

菌株HYR-08色素提取物对肝癌细胞株MHCC97-H的影响

目的探讨不同浓度的菌株HYR-08的色素提取物对人肝癌细胞株MHCC97-H生长繁殖的影响。方法取对数生长其的肝癌细胞MHCC97-H,用不同浓度的色素干预培养物,用显微计数法计数,观察其生长曲线的变化。用MTT比色分析法检测不同浓度的色素提取物对MHCC97-H细胞的增殖抑制作用。结果不同浓度的色素干预后对肝癌细胞MHCC97-H的生长均表现出一定程度的抑制或促凋亡效果。这种效应存在剂量依赖性(P<0.05)。肝癌MHCC97-H细胞的抑制率与色素浓度相关(r=0.928,P<0.001)。结论在一定剂量范围内。菌株HYR-08的色素提取物对肝癌细胞株MHCC97-H存在抑制和促凋亡或死亡的作用,且这种效应随培养时间的延长和色素浓度的增加而增强。

紫杉醇对高转移性肝癌细胞株MHCC97-H中ezrin表达的影响

目的研究紫杉醇对体外培养的高转移性肝癌细胞株MHCC97-H中ezrin的表达的影响。方法将体外培养的MHCC97-H分为4组,分别与不同浓度的紫杉醇共培养,然后用免疫组化、Western blot法、RT-PCR检测各组中ezrin的表达水平,Transwell穿膜实验检测肝癌细胞侵袭能力的变化。结果正常培养的MHCC97-H中有ezrin的高表达,紫杉醇可以抑制MHCC97-H中的ezrin表达,经紫杉醇处理的肝癌细胞穿透人工膜的能力下降。结论紫杉醇可以抑制体外培养的MHCC97-H中ezrin的表达,从而抑制肝癌细胞的侵袭能力。