中药木回春对QGY—7703人肝癌细胞DNA合成的影响

目的 中药木回春全外抗肝癌作用研究。方法 采用^3H-TdR掺入法检测木回春对QGY-7703人肝癌细胞DNA合成的影响。结果 实验组QGY-7703细胞DNA合成量较对照组皆有明显减少。差异显著（P<0.001)。且DNA合成量随药物浓度增加呈减少趋势，ED50浓度为270.968ug/ml。结论 木回春可能成为治疗肝癌的理想药物。

半夏总生物碱对人肝癌细胞增殖的抑制作用研究

目的探讨半夏总生物碱(TATP)对人肝癌细胞株QJY-7703增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法及集落形成率实验,检测不同浓度的TATP对QJY-7703细胞株的生长抑制作用;应用单细胞凝胶电泳技术检测TATP导致QJY-7703细胞的DNA损伤情况。结果人肝癌细胞QJY-7703经TATP处理后,其体外增殖能力明显下降,且与药物的剂量、加药时间呈正相关,与对照组比较,差异均有统计学意义(24 h:对照组QJY-7703细胞增殖OD490=0.486±0.037,TATP组2.5、10.0、30.0、50.0 mg/L时的OD490分别为0.475±0.026、0.377±0.029、0.286±0.026、0.242±0.023;48 h:对照组OD490=0.793±0.046,TATP组2.5、10.0、30.0、50.0 mg/L时的OD490分别为0.747±0.028、0.497±0.025、0.287±0.021、0.207±0.020)(P<0.01或P<0.05)。单细胞凝胶电泳(SCGE)中,TATP组细胞尾DNA含量:对照组为(6.92±4.85)mg/L,TATP组10.0、40.0 mg/L时分别为(17.30±5.39)mg/L、(36.52±8.67)mg/L;尾长:对照组为(16.06±9.17)μm,TATP组10.0、40.0 mg/L时分别为(29.29±13.09)μm、(65.33±17.06)μm;尾动量:对照组为(0.97±0.34)μm,TATP组10.0、40.0mg/L时分别为(7.87±4.04)μm、(21.43±7.67)μm,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),且呈现浓度依赖性。结论在体外培养的条件下,一定剂量的TATP能明显抑制QJY-7703细胞增殖,其机制可能与DNA的损伤作用有关。

稳定表达RFX6基因肝癌细胞株的建立

目的:建立稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株。方法:构建人源RFX6基因的重组质粒(pLNCX2-RFX6),pVSV-G质粒分别与pLNCX2-RFX6和空载体pLNCX2共转染至GP2-293细胞中进行包装,并用包装的逆转录病毒感染人肝癌QGY-7703细胞株,G418筛选出阳性克隆。RT-PCR和蛋白质印迹法验证稳定细胞株RFX6基因表达情况。采用Image J软件进行灰度值分析比较两株细胞系的差异。结果:在QGY-7703-pLNCX2-RFX6和QGY-7703-pLNCX2细胞中,RFX6/18SmRNA电泳条带灰度比值分别为5.044 0±1.384 0和0.357 2±0.407 9,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/18S是QGY-7703-pLNCX2细胞的14.1倍,差异有统计学意义,t=4.143,P<0.05;而在两细胞株中,RFX6/GAPDH的蛋白质印迹条带灰度值分别为1.391 4±0.141 3和0.127 8±0.037 3,QGY-7703-pLNCX2-RFX6细胞RFX6/GAPDH是QGY-7703-pLNCX2细胞的10.9倍,差异有统计学意义,t=14.966,P<0.05。结论:成功构建稳定表达RFX6基因的肝癌细胞株,为研究RFX6基因在肝癌细胞中的功能奠定了基础。