二十碳五烯酸对人肝胆管癌细胞株FRH-0201增殖的影响

目的:评价二十碳五烯酸体外对人肝胆管癌细胞株FRH-0201增殖的影响。方法:在处于指数生长期的FRH-0201细胞株培养剂中添加二十碳五烯酸(EPA),通过采用MTT法检测EPA体外对FRH-0201细胞的增殖抑制率及IC50,绘制细胞生长曲线以及流式细胞术检测细胞周期来观察EPA对FRH-0201细胞增殖的影响;吖啶橙荧光染色、电镜技术观察FRH-0201细胞凋亡时的形态学特征及超微结构的改变,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率。结果:经EPA处理后,FRH-0201细胞增殖受到明显抑制,并且呈明显的量效关系和时效关系。同样条件下正常小鼠成纤维细胞L-929无明显影响。细胞阻滞在G0/G1期。吖啶橙染色细胞内有明显的黄绿色浓染,电镜观察细胞染色质浓缩,EPA 50、70μg/mL作用48h的细胞凋亡率分别为37.3%和62.2%,明显高于正常对照组。结论:EPA体外能通过诱导FRH-0201细胞发生凋亡抑制其增殖。

lncRNA MALAT1调控人肝胆管癌细胞侵袭及凋亡影响胆管癌发生发展临床研究

目的:探究肺腺癌转移相关转录物1(metastasis associated in lung denocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)体外细胞侵袭、迁移及凋亡和体内细胞增殖,并参与ICC的发生发展的机制。方法:利用GeneCards和LncExpDB数据库发现MALAT1基本信息;qRT-PCR和原位杂交FISH检测MALAT1在27例ICC患者组织中的表达情况;Tranwell、细胞划痕及Tunel细胞凋亡检测MALAT1对人肝胆管癌细胞系(RBE细胞系)侵袭、迁移及凋亡情况;原位杂交FISH和PCNA免疫组织化学及Ki67免疫荧光实验检测MALAT1在皮下肿瘤组织中荧光探针信号与体内细胞增殖情况。结果:MALAT1定位于11p13.1,转录本长8708bp,在各类肿瘤和疾病中有不同程度的表达差异;MALAT1在27例ICC患者组织中均上调;MALAT1促进RBE侵袭、迁移及抑制凋亡,而敲低MALAT1则促进凋亡;MALAT1在皮下肿瘤组织中的阳性表达显著增加;过表达MALAT1促进体内细胞增殖,敲低MALAT1则抑制体内细胞增殖。结论:MALAT1作为ICC一种潜在标志物,通过调控干扰MALAT1的表达可能为ICC的诊断和治疗提供新的研究方向。

TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制

目的探讨TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制。方法为研究TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中如何调节自噬的表达,选用人肝胆管癌细胞RBE来进行研究。并用疏水性胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸(GCDC)处理人肝胆管癌细胞RBE分为3组:control组、500μmol/L组和1000μmol/L组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞克隆、细胞划痕和Hoechst染色实验检测细胞活力、增殖、伤口愈合率和凋亡。qPCR检测细胞中TMEM39A mRNA表达量;Western blot检测TMEM39A和LC3的蛋白表达量。结果与control组相比较,1000μmol/L组的细胞活力、增殖和伤口愈合率降低,细胞凋亡现象最明显。在构建的原发性胆汁性胆管炎的模型中,过表达TMEM39A会促进LC3的表达。结论TMEM39A的表达增高引起胆管细胞自噬增强使胆管受损,可能是引起原发性胆汁性胆管炎的机制之一。