人肝脏胶原样凝集素1在肝癌细胞株HepG2内的定位及其功能探讨

目的观察人肝脏胶原样凝集素l(CL-L1)在肝癌细胞株HepG2内的定位及其功能。方法利用pcDNA3.1/myc-his和pEGFP-N1载体将CL-L1基因转染HepG2细胞,通过免疫荧光标记技术及激光共聚焦显微镜观察CL-L1在HepG2细胞内的定位及HepG2细胞的克隆形成能力。结果 CL-L1主要定位于HepG2细胞的细胞质基质中,高尔基体、内质网和细胞核中不存在CL-L1。CL-L1基因过表达可引起HepG2细胞克隆形成能力的明显下降。结论 CL-L1定位于HepG2细胞的细胞质基质,可能是肝癌相关抑癌基因。

重组人肝脏胶原样凝集素1在中国仓鼠卵巢细胞内定位

目的:使用已构建的真核表达载体pEGFP-CLL1转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,探讨CL-L1在CHO细胞内的定位。方法:使用免疫荧光标记技术和Western blot检测EGFP-CLL1融合蛋白在细胞内的表达部位。结果:融合蛋白主要存在于细胞质基质中,不存在于内质网、高尔基体和细胞核等部位。结论:CL-L1为已发现惟一存在于细胞质基质中的胶原样凝集素成员。

胎盘胶原样凝集素1研究进展

胎盘胶原样凝集素1(collectin placenta-1)即C型凝集素样清道夫受体,是一种Ⅱ型膜蛋白,其蛋白结构域融合胶原样凝集素和A型清道夫受体的结构特征,包括螺旋卷曲区、胶原样区、糖识别区(C型凝集素糖识别区)、颈区、胞浆区和跨膜区。胎盘胶原样凝集素1不仅能通过糖识别区和胶原样区的负电荷位点与病原微生物的糖类抗原结合直接发挥宿主防御功能,还能激活旁路补体途径间接参与机体固有免疫。此外,胎盘胶原样凝集素1通过摄取ox-LDL和清除β-淀粉样蛋白分别参与动脉粥样硬化和阿尔茨海默病的病理过程。

半乳糖凝集素1在退变椎间盘中的差异表达

背景:半乳糖凝集素1调控诸多组织、器官的生理病理过程,其与椎间盘退变的关系尚不明确。目的:分析半乳糖凝集素1在不同退变程度椎间盘中的差异性表达,并探讨其对大鼠椎间盘退变的影响。方法:收集新疆医科大学第一附属医院15例患者的椎间盘标本,采用Pfirrmann分级后检测半乳糖凝集素1在不同退变程度椎间盘中的差异性表达。建立SD大鼠腰椎退变模型,随机分为3组,造模后隔日进行干预,对照组、模型组分别尾静脉注射生理盐水,半乳糖凝集素1干预组尾静脉注射半乳糖凝集素1重组蛋白,1次/d,各组均干预7 d;造模术后8周使用Bruker Pharmascan 7.0T核磁共振仪进行Pfirrmann分级后观察椎间盘的病理变化,并检测椎间盘中半乳糖凝集素1、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达。结果与结论:①qRT-PCR、免疫组织化学染色及Western Blot结果提示随着椎间盘退变的加重,半乳糖凝集素1表达逐渐减少,3组之间比较差异有显著性意义(P<0.05);②术后8周,大鼠腰椎MRI提示半乳糖凝集素1干预可降低改良Pfirrmann分级;苏木精-伊红染色提示半乳糖凝集素1干预减少椎间盘退变的病理改变;免疫组化及Western blot结果提示半乳糖凝集素1干预在增加椎间盘中半乳糖凝集素1表达的同时减少Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的降解,3组之间相比差异有显著性意义(P<0.05);③结果提示随着椎间盘退变程度的加重半乳糖凝集素1表达逐渐减少;半乳糖凝集素1干预可以延缓大鼠椎间盘针刺退变模型的进展。

泡型棘球蚴病患者肝脏组织中LLT1表达观察

目的观察泡型棘球蚴病(AE)患者肝脏组织中凝集素样转录物1(LLT1)的表达变化,并分析其与AE临床病理参数的关系。方法收集30例AE患者的病灶肝脏组织样本,其中病灶近端肝脏组织(CLT,距离病灶中心<2 cm)30例、远端肝脏组织(DLT,距离病灶中心>2 cm)28例。采用免疫组化法观察LLT1的表达和定位。分析不同临床病理参数AE患者肝脏组织中LLT1的表达变化。从GEO数据库获取AE患者数据集GSE124362(包含6例CTL和6例匹配的DLT样本)分析LLT1编码基因CLEC2D与免疫细胞表达的相关性。结果LLT1主要表达于肝实质细胞和病灶周围的炎症细胞。CLT、DLT中LLT表达评分分别为3(2,4)、6(4,8)分,CLT中LLT1表达水平高于DLT(P<0.05)。LLT1表达与AE患者的P分期、ALT、AST和γ-谷氨酰转移酶水平相关(P均<0.05)。CLEC2D表达与浆细胞、M2型巨噬细胞和激活的树突状细胞呈正相关(r分别为0.83、0.87、0.74,P均<0.01),与激活的NK细胞、M1型巨噬细胞和肥大细胞呈负相关(r分别为-0.73、-0.60、-0.74,P均<0.01)。进一步分析发现,CLEC2D表达与M1型巨噬细胞标志CD1B和IL-6呈负相关(r分别为-0.65、-0.89,P均<0.05),与M2型巨噬细胞标志CD163、CLEC7A和IL-10呈正相关(r分别为0.90、0.71、0.74,P均<0.01)。结论LLT1在AE患者CLT中高表达,与患者的P分期和肝功能指标水平相关,与多种免疫细胞表达有关,LLT1可能参与AE病灶的浸润过程。

新型胶原样凝集素的研究进展

胶原样凝集素作为脊椎动物C-型凝集素超家族内的成员,以含有胶原样结构域及糖识别结构域为其显著特征。胶原样凝集素除了"经典"成员甘露聚糖结合凝集素(MBL)、表面活性蛋白A(SP-A)和SP-D外,还发现肝胶原样凝集素1(CL-L1)、肾胶原样凝集素1(CL-K1)和胎盘胶原样凝集素1(CL-P1)。在机体固有免疫系统中,这些"新"型胶原样凝集素除了同"经典"胶原样凝集素一样发挥着十分重要的作用外,它们还具有其独特的生理功能。本文综述了这些新发现的胶原样凝集素的分子结构、组织分布以及生物学功能等方面的研究进展。

前列腺素E_1促进血吸虫病家兔肝脏内源性干扰素γ表达及其意义

目的 :探讨前列腺素 (PG )E1对血吸虫病家兔肝脏纤维化形成过程中内源性干扰素 (IFN)γ表达的影响及其意义。方法 :血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染 14只家兔构建肝纤维化模型。其中 7只家兔于感染后 60d开始静脉应用PGE12 5 μg·kg-1·d-1至 12 0d。观察虫卵肉芽肿数量和面积 ,原位杂交方法检测IFN γ表达 ,苦味酸天狼星红检测胶原纤维总量。结果 :血吸虫病家兔肝纤维化形成过程中胶原纤维含量增加 ( 71 66± 13 5 9) ;外源性PGE1可以明显降低肝脏胶原水平 ( 13 3 8± 4 2 4) ,与模型组比较 ,P <0 0 1。IFN γ积分光密度由模型组 0 10 5±0 0 2 4升高到治疗组 0 43 8± 0 0 76(P <0 0 1)。结论 :PGE1可以通过上调IFN γ表达 ,有效地降低血吸虫病家兔肝脏胶原纤维生成。

血清Galectin-9和PD-L1对慢性乙型肝炎肝脏炎症程度的诊断价值

目的探讨血清半乳糖凝集素-9(Galectin-9)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)对慢性乙型肝炎(CHB)肝脏炎症程度的诊断价值。方法选取2020年1月至2021年7月周口市疾控中心专科病医院CHB患者126例为观察组,同期选取45名健康体检者为对照组。比较两组临床特征及血清Galectin-9、PD-L1水平,CHB患者血清Galectin-9、PD-L1水平与临床特征相关性,Logistic回归分析CHB患者显著肝脏炎症影响因素,受试者工作特征(ROC)分析血清Galectin-9、PD-L1对CHB患者肝脏炎症程度的诊断价值。结果观察组血清Galectin-9、PD-L1水平高于对照组,差异有统计学意义(t=19.108,21.523,P<0.05);CHB患者血清Galectin-9、PD-L1水平与HBV-DNA、炎症分级、纤维化分期均呈正相关(P<0.05);Logistic回归模型分析显示,HBV-DNA及血清Galectin-9、PDL1水平升高均为CHB患者显著肝脏炎症独立危险因素(P<0.05);ROC显示,Galectin-9、PD-L1联合诊断肝脏炎症程度的AUC值0.850最大,对应敏感度为85.96%,特异度为72.46%,优于单一诊断(P<0.05)。结论CHB患者血清Galectin-9、PD-L1异常高表达,且可较准确地诊断肝脏炎症程度,利于监测CHB疾病进展。

人CL-L1基因片段的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的获取重组人CL-L1颈区-糖识别区纯化蛋白,制备多克隆抗体。方法采用PCR方法扩增人CL-L1颈区-糖识别区目的基因片段,构建原核表达载体,进行原核表达与蛋白纯化,然后免疫家兔,制备多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价,免疫印迹法检测蛋白纯度和抗体的特异性。结果成功构建了人CL-L1颈区-糖识别区原核表达载体pRSET-C/NECK-CRD△K,在E.coliBL21中表达,镍亲和层析柱纯化,得到相对分子质量19 200的融合蛋白,免疫家兔后收获抗血清,ELISA显示抗体效价为1/20 000,具有高度特异性,免疫印迹结果显示制备的多抗可以与重组人CL-L1颈区-糖识别区蛋白特异性结合。结论本研究获得了人CL-L1颈区-糖识别区纯化蛋白,制备了人CL-L1颈区-糖识别区多克隆抗体,为CL-L1的结构、组织表达谱和功能的研究奠定了基础。

人MBL-CLR表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的:在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)胶原样区(CLR)蛋白。方法:应用PCR技术,从含中国人野生型MBLcDNA的质粒pGEM-MBL中扩增CLR基因片段,将其克隆至pET32a原核表达载体后,转化E.coliBL21(DE3)感受态菌株诱导表达CLR蛋白。通过Ni2+-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白,以SDS-PAGE、Westernblot和ELISA法进行鉴定。结果:从重组质粒pGEM-MBL中扩增到长约180bp的DNA片段。构建的重组表达载体经BamHI和HindⅢ酶切后出现约5900bp和180bp的片段,测序结果同预期的结果完全一致。重组质料在大肠杆菌中诱导表达后,纯化的蛋白经SDS-PAGE电泳出现Mr约为30000、60000和120000的3条带。Westernblot分析表明,3条蛋白带均可与抗His抗体起反应,3条蛋白带对应于融合蛋白的单体和寡聚体。ELISA检测证实,纯化的蛋白能与鼠抗重组人MBL蛋白抗体结合。结论:获得可表达人MBL-CLR的大肠杆菌菌株和重组的人MBL-CLR-Trx融合蛋白,为MBL分子结构、功能关系的进一步研究提供了条件。