17β-雌二醇对人肠系膜动脉的舒张作用及其机制

目的研究17β-雌二醇（E2）对人肠系膜动脉的舒张作用及其机制。方法采用离体血管环灌流的方法，观察E2对内皮完整和去内皮人肠系膜动脉的舒张作用，以及一氧化氮合酶（eNOS）选择性抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L—NAME）、L-NAME＋前列环素（PGs）抑制剂吲哚美辛（INDO）、格列本脲（GLY）对这一过程的影响。结果E2（0．5～20．0μmol／L）均可剂量依赖性地舒张人肠系膜动脉；该作用在低水平时内皮完整组明显大于无内皮组（P〈0．01），且在内皮完整组E2的舒张作用可分别被L-NAME、L-NAME＋INDO、GLY减弱（P均〈0．01）；高水平时去内皮组与内皮完整组E2的舒张比例差异无统计学意义（P〉0．05），在内皮完整组各阻滞剂孵育20min后E2的舒张作用不能被阻断（P均〉0．05）。结论E2对人肠系膜动脉的舒张作用在低水平时具有内皮依赖性，与内皮NO和内皮源性超极化因子（EDHF）的释放、KATP的激活有关，且EDHF比NO更重要；而高水平时的E2舒张人肠系膜动脉是非内皮依赖的，为E2的临床应用提供了重要的实验依据.

前列腺素E_1对人肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道活动的影响

目的 :探讨前列腺素E1 (PGE1 )对人肠系膜动脉平滑肌细胞钙激活钾通道 (KCa)活动的影响。方法 :选择因消化道疾病手术而无血管病变的患者的肠系膜动脉小分支 ,用酶消化法获得单个平滑肌细胞 (SMC) ,应用膜片钳技术观察PGE1 对KCa的影响。结果 :在内面向外膜片下 ,PGE1 可使KCa开放概率 (Po)增加 ,平均开放时间 (To)延长 ,平均关闭时间 (Tc)缩短 ,并增大单通道电流幅值。结论 :PGE1 激活KCa,增加K+ 外流 ,引起细胞膜超极化从而舒张血管。

人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平检测方法的建立

目的:建立实时荧光定量PCR检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平的检测方法,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础。方法:提取人肠系膜动脉组织总RNA,采用RT-PCR方法获取sGCα、sGCβ、GAPDH基因片段,与pMD-18T vector连接,并转化到大肠杆菌DH5α细胞,通过PCR和测序鉴定重组质粒。提取含目的基因的质粒作为标准品,采用SYBR GreenⅠ法检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达和构建标准曲线。结果:人肠系膜动脉平滑肌存在sGCα和sGCβ基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与数据库公布的序列完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2>0.99。结论:建立了稳定的定量检测方法,并成功用于检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达,构建质粒标准品能用于后续实验。

血管紧张素II对人肠系膜动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活效应

本文旨在研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channels,BKCa)的影响,探讨AngⅡ在分子水平扩张血管的作用机制。采用单通道膜片钳及全细胞穿孔膜片钳技术观察人肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa对AngⅡ的反应性;采用RT-PCR技术确定人肠系膜动脉上AngⅡ受体基因的表达情况。在细胞贴附式膜片下(Vm=+40mV),直接加入AngⅡ(100nmol/L),人肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa的活性无明显变化;经AngⅡ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)特异性阻断剂缬沙坦(10μmol/L)预处理后,再分别加入25、100和250nmol/L的AngⅡ,BKCa的开放概率明显增加,呈现出浓度依赖性。缬沙坦预处理后,当加入100nmol/LAngⅡ时,BKCa的开放概率由0.010±0.003增至0.039±0.015,平均关闭时间由(2729.5±808.6)ms减至(487.7±182.5)ms(n=11,P<0.05),但平均开放时间和电流幅值在给药前后无明显变化。BKCa被AngⅡ(100nmol/L)激活后,再加入AngⅡ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R)特异性阻断剂PD123,319,BKCa的活性受到抑制,开放概率由0.016±0.003减至0.004±0.001(n=5,P<0.05),而通道平均开放时间、平均关闭时间和电流幅值在给药前后均无明显变化。另外,将人肠系膜动脉平滑肌细胞经缬沙坦和PD123,319共同处理后再加入AngⅡ(100nmol/L),BKCa的活性无明显变化。在全细胞穿孔膜片钳下,平滑肌细胞经缬沙坦(10μmol/L)预处理后,在测试的电压范围内,AngⅡ(100nmol/L)对膜电位从60mV到+30mV时BKCa电流密度均无明显影响,而在+40、+50和+60mV时,BKCa电流密度分别从(9.03±2.23)pA/pF、(12.88±2.55)pA/pF和(17.26±2.84)pA/pF增加到(12.47±2.22)pA/pF、(18.71±2.51)pA/pF和(27.21±3.12)pA/pF(n=6,P<0.05)。经RT-PCR证实人肠系膜动脉上有AT1R和AT2R这两种AngⅡ受体基因的表达。上述结果提示,AngⅡ对经缬沙坦预处理的人肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa有激活作用,且这种作用由AT2R所介导。

丹参素异丙酯对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜钙激活钾通道影响的研究

目的研究丹参素异丙酯[β-(3,4-二羟基苯基)-α-羟基丙酸异丙酯]对单个人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜上钙激活钾通道的影响。方法取急性酶分离的人肠系膜动脉平滑肌细胞,用膜片钳技术记录其全细胞电流,在全细胞记录模式下,观察不同浓度丹参素异丙酯对全细胞钙激活钾电流的影响。结果①比较含三种不同钙浓度电极内液所记录到的外向电流,发现电流密度随钙浓度增加而增加;②丹参素异丙酯采用两种浓度:5mol/L、10mol/L;用药后5min两组IKCa增幅改变值分别为(13±3)和(36±7);③丹参素异丙酯使IKCaI-V曲线(I-V Curve)上移,用药后5min两组IKCa峰值电流密度增幅最大值分别为(19±2)和(40±3)。结论丹参素异丙酯具有激活钙激活通道,促进K+外流的作用,且有浓度依赖性,浓度高者作用更为明显。其促进K+外流的作用可能是其血管舒张的离子基础。

异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响

目的 :研究异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响。方法 :用酶消化法获得急性分离的人肠系膜小动脉平滑肌细胞 ,采用全细胞膜片钳技术记录外向钾通道电流。结果 :在刺激电压 (Vt)- 70mV～ +70mV条件下 ,引发一外向钾电流 ,该电流可被 3mmol/LTEA阻滞 6 1%± 5 % ,异丙酚 (4 3μmol/L、86 μmol/L)分别增加外向钾通道电流幅值达 (13± 3) %和 (36± 7) %。 结论 :异丙酚增强人肠系膜小动脉平滑肌细胞外向钾通道电流 ,提示钾通道开放增加可能介导异丙酚引发的血管扩张。

β-雌二醇对绝经后妇女肠系膜动脉平滑肌细胞BK_(Ca)的激活作用

本文旨在研究雌激素对动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance Ca2+-activated potassium channels,BKCa)的作用。取绝经后女性患者手术切除物中的肠系膜动脉,应用急性酶分离法分离出肠系膜动脉平滑肌细胞,按动脉平滑肌细胞的来源分为非高血压(non-hypertension,NH)组及原发性高血压病(essential hypertension,EH)组,采用单通道膜片钳技术研究β-雌二醇(β-estradiol,β-E2)及其受体(ER)抑制剂ICI182780对BKCa的作用。结果显示,肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道的开放具有电压依赖性和钙依赖性,可被IbTX所阻断。100μmol/Lβ-E2能够显著增加NH和EH组BKCa的通道开放概率(open probability,Po),且β-E2处理后NH组BKCa的通道Po显著大于EH组。ICI182780可显著抑制β-E2对BKCa通道的增强作用。以上结果提示,β-E2能够通过激活ER显著增强绝经后妇女肠系膜动脉平滑肌细胞的BKCa功能,而高血压可以削弱β-E2对动脉平滑肌细胞BKCa功能的增强作用。