荧光定量PCR方法快速检测人肠道病毒埃可30的研究

目的建立特异、快速、灵敏的人肠道病毒埃可30(ECHO30)核酸检测的荧光定量PCR方法。方法应用Clustal W软件分析ECHO30基因序列,设计特异性引物和Taq Man探针,研制ECHO30病毒实时荧光定量PCR方法。与巢式PCR方法比较,确定方法的灵敏性,并利用数字PCR定量该方法的检测下限。同时通过对广东省内主要流行的其他肠道病毒株的检验,确定方法的特异性。结果本研究建立的方法能特异性扩增ECHO30核酸,与巢式PCR方法比较,灵敏度高,检测下限低至27.7 copies/μL;且与广东省内主要流行的其他肠道病毒株(肠道病毒71型和柯萨奇病毒A6、A10、A16)均无交叉反应。该方法无论对高浓度还是低浓度样本偏差均很小,具有很好的重复性。结论本研究建立的荧光定量PCR是一种能快速、灵敏、特异检测ECHO30的方法,适用于临床早期诊断。