芦荟大黄素对肺炎链球菌侵袭A549细胞的抑制作用

目的通过体外实验,研究芦荟大黄素(aloe-emdion,AE)是否能阻断肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,S.pn)触发人肺Ⅱ型上皮细胞A549微丝肌动蛋白(filamentousactin,F-actin)细胞骨架重排。方法采用F-actin特异性荧光染料观察S.pn作用A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况并用AE预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排关系。结果用AE预处理A549后S.pn侵袭数为(22±4)CFU/孔,而没有用AE预处理的A549S.pn侵袭数为(138±21)CFU/孔,经两样本均数t检验,有显著差异(P<0.01)。结论AE对S.pn侵袭人肺Ⅱ型上皮细胞A549F-actin细胞骨架的重排有抑制作用。

右美托咪定对机械拉伸A549细胞IL-8和PAI-1表达及细胞凋亡率的影响

目的本研究模拟机械通气诱发肺损伤,探讨不同浓度右美托咪定对机械拉伸损伤A549细胞PAI-1、IL-8表达及细胞凋亡率的影响。方法①将体外培养的肺Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)随机分为非机械拉伸组和机械拉伸组,每组按拉伸时间分为4个亚组:0 h组、4 h组、12 h组和24 h组。机械拉伸组与体外细胞应力加载装置拉伸相连接,机械拉伸加载装置拉伸幅度为20%,频率为0.3 Hz的正弦波,非机械拉伸组不与拉伸装置连接。采用MTT比色法和ELISA测定细胞存活率和PAI-1、IL-8的表达水平,筛选A549细胞损伤最明显的时间。②将A549细胞接种于包被胶原基底膜(胶原基底蛋白Ⅰ)的BioFlex6孔培养板,分为预处理对照组和预处理拉伸组,每组分为4个亚组,并在机械拉伸前20 min滴加不同浓度右美托咪定(0,0.01,0.1,1μmol/L)进行预处理。预处理拉伸组与体外细胞应力加载装置拉伸相连接,机械拉伸加载装置拉伸幅度为20%,频率为0.3 Hz的正弦波,持续拉伸24 h;预处理对照组不与拉伸装置连接,不拉伸。采用流式细胞术测定细胞凋亡率,ELISA法测定PAI-1和IL-8的表达。结果与各自非机械拉伸组相比,机械拉伸4,12,24 h细胞存活率明显降低(P<0.05),IL-8表达水平上调(P<0.05),而PAI-1表达仅机械拉伸24 h差异有统计学意义(P<0.05),表达上升近一倍。随着拉伸时间延长,非机械拉伸组和机械拉伸组A549细胞存活率逐渐减低(P<0.05),IL-8表达水平逐渐升高(P<0.05),以24 h为著;非机械拉伸组PAI-1表达没有明显差异(P>0.05),机械拉伸4 h组和12 h组PAI-1表达差异无统计学意义(P>0.05),但24 h组PAI-1表达水平显著上调(P<0.05)。右美托咪定处理后,预处理拉伸组细胞凋亡率、PAI-1和IL-8表达水平较各自预处理对照组均升高(P<0.05);随着右美托咪定浓度增加,预处理拉伸组细胞凋亡率、PAI-1和IL-8表达水平逐渐减低,与0μmol/L比较,差异均有统计学意义(P<0.05),以1μmol/L最为明显;预处理对照组细胞凋亡率和PAI-1表达水平逐渐减低,与0μmol/L比较,差异也有统计学意义(P<0.05),但IL-8变化无统计学意义(P>0.05)。结论机械拉伸能下调A549细胞存活率,上调PAI-1和IL-8表达。右美托咪定预处理可下调PAI-1和IL-8表达,降低机械拉伸后A549细胞的凋亡率,提示右美托咪定预处理可能减轻机械拉伸肺上皮细胞损伤。