人肺巨细胞癌蛋白质组的二维电泳和计算机图象分析

为优化用于蛋白质组研究的二维电泳技术和计算机图象分析技术 ,以及初步分析比较与肿瘤细胞转移相关的蛋白质 ,以人肺巨细胞癌 (PLA- 80 1 - D、C)高、低转移株作为研究对象 ,应用 IPG-phor进行第一向等电聚焦 ,随后 ,在 Protein IPG conversion Kit上进行垂直 SDS- PAGE的分离 .利用光密度仪对银染的凝胶扫描 ,通过 PDQuest软件进行蛋白斑点检测和配比 .结果表明 :(1 )应用 IPGphor,采用样品直接加入重泡胀溶液的形式 ,增大了溶解性 ,缩短聚焦时间、增大样品负荷量 (分析型 ) ,提高了分辨率 .(2 )比较宽 (p H=3～ 1 0 L)、窄 (p H=4～ 7L)范围 IPG胶条 ,窄 p H范围的 IPG胶条具有较高的分辨率 .(3)比较 PLA- 80 1 - C、D细胞蛋白图谱之间的差异 ,其相关系数为 0 .7339± 0 .0 2 91 ;仅在 PLA- 80 1 - C株出现的蛋白为 1 79个 .

人肺巨细胞癌高(95D)低(95C)转移株中细胞周期调控因子的表达水平与细胞增殖能力的关系

目的:探讨人肺巨细胞癌高(95D)低(95C)转移株中细胞周期调控因子的表达水平与细胞周期/细胞增殖的关系。方法:MTT法检测两株细胞的增殖能力,流式细胞仪检测两株细胞的细胞周期差异,Western印迹检测两株细胞的周期调控因子的表达情况。结果:95D的细胞增殖能力显著高于95C细胞,与此一致,处于S期的95D细胞数目明显高于95C细胞;在蛋白质水平,95D细胞p27的表达低于95C细胞,而CDK2,磷酸化Rb的表达不同程度的高于95C细胞。结论:p27表达的不同,以及下游CDK2,Rb及Rb磷酸化水平的差异,最终引起两株细胞在细胞周期和细胞增殖能力的差异。

人肺巨细胞癌高和低转移株中相关转录因子分析

目的 :为了阐明人肺巨细胞癌高转移株 (95D)细胞高表达uPA、低转移株 (95C)细胞低表达uPA的原因 ,分析两株细胞中有关的转录因子的差异。方法 :uPA基因启动子不同片段与Luciferase报告基因的融合基因真核表达质粒分别平行转染 95C、95D细胞 ,比较活性 ;用EMSA分析 95D、95C细胞中与寡核苷酸探针特异结合的转录因子差异 ;用RT PCR分析两株细胞中相应转录因子mRNA相对表达水平。结果 :三个不同长度的uPA基因启动子在 95D细胞中的活性均相应高于 95C细胞中的活性 ,分别是 95C细胞的 1 32、1 6 6和 1 6 1倍 ,EMSA表明95D细胞中与AP1、AP2、NFκB及SP1探针结合的转录因子量均高于 95C细胞中 ;RT PCR表明AP2、NKκB及SP1转录因子mRNA表达水平分别是 95C细胞的 1 5 7、1 77和 1 2 8倍。结论 :转录因子AP1、AP2、NKκB及SP1在95D细胞中含量高于 95C细胞可能是uPA在 95D与 95C细胞中表达差别的原因之一。

川芎嗪对高转移性人肺巨细胞癌PG-BE1干细胞样细胞黏附能力的影响

目的研究川芎嗪对高转移性人肺巨细胞癌PG-BE1干细胞样细胞黏附能力的影响及可能作用机制。方法采用无血清成球培养法分选PG-BE1细胞中的干细胞样细胞,并检测其表面OCT-4、SOX-2、Nanog蛋白表达及平板克隆形成实验进行验证。再采用人造基底膜黏附实验比较PG-BE1干细胞样细胞在不同环境(常氧和低氧环境)与其原代细胞黏附能力的差异,同时观察不同浓度川芎嗪(终浓度分别为100、300、500μg/ml)及顺铂(2μg/ml)干预后各组干细胞样细胞的黏附能力,以及干预后各组干细胞样细胞表面黏附分子β整合素、CD44V6的表达量。结果与原代细胞相比,PG-BE1干细胞样细胞克隆灶形成能力更强,干细胞样细胞表面的SOX-2、OCT-4及Nanog蛋白的表达相对光密度更强(P<0.05或P<0.01)。常氧干细胞样细胞和低氧干细胞样细胞黏附能力均明显高于原代细胞(P<0.05或P<0.01),川芎嗪中、高剂量组及顺铂组干细胞样细胞黏附能力低于对照组(P<0.01),川芎嗪高剂量组细胞黏附抑制率最高达42.2%。常氧干细胞样细胞和低氧干细胞样细胞β整合素、CD44V6表达量均高于原代细胞(P<0.01),川芎嗪低、中、高剂量组及顺铂组β整合素表达均较对照组下调(P<0.01),川芎嗪高剂量组CD44V6表达较对照组亦明显降低(P<0.01)。结论 PG-BE1干细胞样细胞对基底膜的黏附能力强于其原代细胞,川芎嗪可抑制其黏附能力,其机制可能与抑制细胞表面β整合素、CD44V6蛋白的表达有关。

血清诱导95D细胞中Nm23H1从细胞质转位至细胞膜板状伪足

目的 探索Nm2 3H1(肿瘤转移抑制因子之一)在细胞内的定位与其功能关系。方法 以人肺巨细胞癌95D细胞为模型,在血清饥饿2 4h后加入血清,观察细胞形态变化及Nm2 3H1在细胞内的分布变化。结果 血清刺激可以诱导95D细胞形成板状伪足,细胞免疫荧光实验发现Nm2 3H1主要分布于细胞质,但在血清诱导形成的细胞板状伪足部位出现显著的Nm2 3H1分布。亚细胞组分分离及免疫印迹的实验结果也证实Nm2 3H1在血清刺激下可以转位到细胞膜,并且这种诱导作用是迅速的,在30min左右达到高峰,8h后降至仍然略高于血清诱导前的水平。结论 Nm2 3H1这种特殊的定位可能涉及细胞的运动,为进一步研究Nm2 3H1的功能与作用机制提供了基础。

我国稀土化合物抑癌实验研究取得新进展

北京医科大学周爱儒教授指导的研究生李晓滨在稀土化合物抑癌实验研究取得新进展。研究表明,在经三氯化铈和柠檬酸镧处理后的人肺巨细胞癌PG细胞株上,均见到对PG细胞的增殖和PG细胞DNA的合成有抑制作用,但同样浓度的上述两种稀土化合物对人胚肺二倍体成纤维细胞株2BS细胞(属正常细胞)则无抑制作用。用流式细胞计观察对肿瘤细胞增殖周期的影响。