反义hTERT对人肺巨细胞癌细胞系端粒酶活性的抑制作用

背景与目的:近几年的研究表明,端粒酶在肿瘤的发生中扮演着重要角色。人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetrascriptase,hTERT)是端粒酶活化的惟一限制性组分。本研究探讨hTERT全长cDNA反义序列转染对人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D恶性表型的逆转作用。方法:应用基因重组技术构建包含hTERTcDNA全长序列的反义hTERT真核表达载体pcDNA3.1(-)-hTERT,用脂质体转染人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D,通过生长曲线比较转染反义hTERT后PLA-801D细胞的增殖能力,应用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERTmRNA的表达水平,并应用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法检测端粒酶活性。结果:成功地构建了pcDNA3.1(-)-hTERT的反义真核表达载体,并转入到PLA-801D细胞中。转染反义hTERT的细胞较未转染及转染空质粒细胞的生长增殖能力显著降低(P<0.05);转染组细胞中野生型hTERTmRNA的表达被抑制,其相对表达量仅为对照组细胞的15.7%,转染组细胞中端粒酶活性较对照细胞下降了约82.4%。结论:hTERTcDNA的全长反义序列可以抑制PLA-801D细胞hTERTmRNA的表达水平和端粒酶活性,限制PLA-801D细胞的生长。

几种肺癌细胞系中FHIT基因和蛋白表达的研究

目的研究不同人肺癌细胞系FHIT基因和蛋向的表达，为探讨外源FHIT基因对不同FHIT状态人肺癌细胞恶性表型的影响筛选受体细胞。方法提取B01D（人肺巨细胞癌细胞系）、LTEP-A2（人肺腺癌细胞系）、LTEP-Sm（人小细胞肺癌细胞系）和A549（人肺腺癌细胞系）细胞总RNA，定量后逆转录合成cDNA第一链，分别用5131、3D1和5U2、3D2两对引物进行巢式PCR扩增FHIT基因外显子1～10。1．5％琼脂糖凝胶电泳检测4种细胞株的FHIT基因表达。将扩增的PCR产物纯化后进行DNA测序。用FHIT单克隆抗体进行免疫组化染色检测4种细胞FHIT蛋白表达。结果801D和LTEP-Sm细胞有正常FHIT基因转录本，LTEP-A2细胞有一条正常FHIT基因转录本和一条异常转录本，正常转录本测序显示与FHIT cDNA同源，无缺失及重排。801D和LTEP-Sm细胞FHIT蛋向表达呈强阳性。A2细胞FHIT蛋白表达减弱。A549缺乏FHIT基因转录本和蛋白表达。结论4种细胞系代表3种FHIT基因状态，为进一步研究外源FHIT基因对不同FHIT状态人肺癌细胞恶性表型的影响提供了合适的受体细胞。