蛋白激酶C和JNK在溶血磷脂酸诱导人肺成纤维细胞MCP-1表达中的作用

目的:研究蛋白激酶C(PKC)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)在溶血磷脂酸(LPA)诱导人肺成纤维细胞(HLF-1)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达中的作用。方法:培养HLF-1细胞,以不同浓度(0、1、3和10μmol/L)的LPA处理细胞不同时间(0.5、6、12和24h)后,ELISA检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用不同浓度的PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(0、0.1、1和10μmol/L)或JNK抑制剂SP600125(0、0.1、1和10μmol/L)预孵育细胞30 min后,用LPA(10μmol/L)刺激2或6 h后,ELISA方法检测细胞培养基上清液中MCP-1的蛋白表达,荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA的表达水平。用PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(1μmol/L)预孵育30 min,以浓度为10μmol/L的LPA处理细胞不同时间(0、5、30和60 min)后,Western blot检测c-Jun蛋白磷酸化水平。结果:LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1蛋白释放,并呈剂量效应和时间效应关系。LPA的浓度为10μmol/L时,HLF-1细胞释放MCP-1蛋白的量是对照组的2.4倍(P<0.05);细胞在LPA处理24 h后,MCP-1蛋白的释放量较对照组增加约1倍(P<0.05)。LPA可诱导HLF-1细胞MCP-1 mRNA的表达并呈时间效应,LPA处理2 h后,MCP-1 mRNA表达水平是对照组的5.3倍(P<0.05)。PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I和JNK抑制剂SP600125均可显著抑制LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1 mRNA表达及MCP-1蛋白释放。Bisindolylmaleimide I的浓度为1μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的60%(P<0.05),浓度为3μmol/L时对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达40%(P<0.05);而SP600125的浓度为1μmol/L时可阻断LPA诱导的HLF-1细胞MCP-1蛋白释放量的78%(P<0.05),对MCP-1 mRNA表达有明显抑制效果,抑制率达87%(P<0.05)。10μmol/L的LPA可显著诱导HLF-1细胞c-Jun磷酸化,同时PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I(1μmol/L)可显著抑制LPA(10μmol/L)诱导的HLF-1细胞c-Jun磷酸化。结论:PKC与JNK通路均参与LPA诱导HLF-1细胞MCP-1的表达。