评价新型3,5-二取代吡唑啉衍生物抗人肺癌细胞株(A549)的潜能

目的 评估新型3,5-二取代吡唑啉衍生物抗人肺癌细胞株(A549)的潜能。方法 制备新型吡唑啉衍生物,评价这种衍生物在体外对抗人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549的效能。利用MTT法与SRB法筛查全部最终衍生物的抗癌潜力,测定其存在的细胞毒性。结果 本文条件下制备最终化合物用时10d,在表达抗A549中存在细胞毒性潜能,占比约为71.24%,对照药物为阿奇霉素,阿奇霉素所具有的细胞毒性为80.55%,两组相较并无差异(P>0.05)。所制备的新型吡唑啉衍生物的抗癌活性SRB检查结果与MTT法检查所得的细胞毒性结果类似,其成分为具有甲硫基、氟基团、甲氧基官能团的化合物,10d对抗A549的GI50水平为11.41μg/mL,对照药物ADR的TGI水平>100μm,化合物10d为46.76μm。结论 新型吡唑啉衍生物抗NSCLC的A549细胞株的潜力理想,细胞毒性水平较为合理。

基于DGKα-PA信号轴探讨扶正祛邪方对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响

目的探讨扶正祛邪方调节DGKα-PA信号轴对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法将H292细胞分为对照组和扶正祛邪方低、中、高浓度组,扶正祛邪方低、中、高浓度组分别予3、6、12 mg/mL扶正祛邪方干预48 h,对照组予等体积培养基常规培养。克隆形成实验观察H292细胞增殖情况,细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞迁移和侵袭情况,ELISA检测细胞磷脂酸(PA)含量,Western blot检测细胞二酰甘油激酶α(DGKα)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT和雷帕霉素机械靶蛋白(mTOR)表达。结果与对照组比较,扶正祛邪方低、中、高浓度组细胞克隆形成数明显减少(P<0.05,P<0.01),细胞迁移率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数明显减少(P<0.05,P<0.01),细胞PA含量明显减少(P<0.01),DGKα、p-AKT、mTOR蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),且以扶正祛邪方高浓度组抑制作用最明显(P<0.01)。结论扶正祛邪方可能通过DGKα-PA信号轴抑制人肺癌H292细胞增殖、迁移,其机制与抑制下游AKT/mTOR信号通路有关。

过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长

目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P<0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P<0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P<0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P<0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。

反义Ku70在人肺癌细胞的表达及对放射线的敏感性研究

目的 :研究反义Ku70在人肺癌细胞的表达及对放射线的超敏效应。方法 :采用Western boltting法证明 ,Ku70 LCA中Ku70蛋白的表达情况 ,采用体外放射线敏感实验证明 ,反义Ku70在人肺癌细胞的表达及对放射线的超敏效应 ,其结果以细胞存活克隆率和剂量效应曲线表示。结果 :(1)对照组和导入正义Ku70基因的LCA组细胞可见Ku70蛋白表达印迹 ,导入反义Ku70基因LCA组细胞未见Ku70蛋白表达印迹。 (2 )导入反义Ku70基因的LCA组细胞对放射线的敏感性明显增强 (P <0 0 1) ,并呈剂量依赖性。结论 :反义Ku70封闭了肿瘤细胞的正义Ku70蛋白表达后 ,对放射线呈超敏效应 ,为提高肿瘤放疗的特异性和靶向基因治疗奠定了基础。

反义Ku80在人肺癌细胞的表达及对放射线的敏感性研究

目的 :研究反义Ku80在人肺癌细胞的表达及对放射线的超敏效应。方法 :采用Western blotting法证明 ,Ku80 LCA中Ku80蛋白的表达情况 ,采用体外放射线敏感实验证明 ,反义Ku80在人肺癌细胞的表达及对放射线的超敏效应 ,用细胞存活克隆率和剂量效应曲线表示。结果 :(1)对照组和导入正义Ku80的LCA细胞可见Ku80蛋白表达印迹 ,导入反义Ku80的LCA细胞未见Ku80蛋白表达印迹。 (2 )导入反义Ku80的LCA细胞对放射线的敏感性明显增强 (P <0 0 1) ,并呈剂量依赖性。结论 :反义Ku80封闭了肿瘤细胞的Ku80蛋白表达后 ,对放射线呈超敏效应 ,为提高肿瘤放疗的特异性和靶向基因治疗奠定了基础。

醌茜素对人肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及初步机制研究

醌茜素是一种具有高效性、高选择性和细胞能透性的药物.虽然醌茜素能够有效抑制前列腺癌细胞的增殖,但醌茜素对肺癌细胞的作用机制尚不清楚.本文研究了醌茜素对人肺癌A549细胞周期及细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制.

趋化因子受体CXCR4在人肺癌高转移细胞株的表达和意义

目的 :以人肺癌高、低转移细胞株 95D、95C为研究对象 ,研究趋化因子受体CXCR4的表达及其在肿瘤细胞体外转移潜能中的作用和意义。方法 :采用RT PCR检测 95D、95C细胞CXCR4mRNA的表达情况 ;以PMA活化肿瘤细胞 ,研究CXCR4mRNA表达水平与细胞活性状态的关系 ;应用钙离子内流实验验证其表达是否具有功能 ;通过趋化实验观察CXCR4特异性配件SDF 1α和裸鼠组织匀浆液对 95D细胞的趋化迁移作用 ;通过MTT法测定 95D细胞对SDF 1α作用的增殖反应。结果 :95D细胞功能性地高表达趋化因子受体CXCR4 ,且其表达水平与细胞活性状态有关 ;CXCR4特异性配件SDF 1α和裸鼠肺、淋巴结组织匀浆均可在体外趋化 95D细胞的迁移 ,SDF 1α还可促进 95D细胞的增殖。结论 :95D细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4可能与人肺癌细胞株

新城疫病毒HN基因诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用机制

为了探索新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因对人肺癌细胞SPC-A1的作用及机制,将含有HN基因的重组质粒pVHN经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,通过MTT方法检测细胞活力;采用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色分析肿瘤细胞凋亡;罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位(ΔΨm)和活性氧水平变化;流式细胞仪分析MHC-Ⅰ分子表达;底物染色反应检测caspase-3活性.结果重组质粒pVHN转染人肺癌细胞SPC-A148h后,细胞活力明显降低;AO/EB染色可见明显的细胞凋亡形态学变化;与空质粒对照相比,线粒体ΔΨm下降(P<0·01),活性氧水平升高(P<0·05);细胞表面MHC-Ⅰ分子表达上调(P>0·05);caspase-3活性增强(P<0·01).以上结果提示,新城疫病毒HN基因能够上调SPC-A1细胞表面MHC-Ⅰ分子表达,并通过上调ROS水平,下调线粒体ΔΨm,进而激活caspase-3,最终诱导人肺癌细胞凋亡.

南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的实验研究

目的探讨南方红豆杉水提物诱导人肺癌A549细胞的凋亡作用及其分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖抑制作用;以光镜、电镜、膜联蛋白Ⅴ-FITCPI(An-nexinⅤ-FITC/PI)标记法检测细胞凋亡;以蛋白印迹法分析南方红豆杉水提物对细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2),c-jun氨基未端激酶1/2(JNK1/2)和生存素(survivin)蛋白表达的影响。结果南方红豆杉水提物能抑制A549细胞的增殖;南方红豆杉水提物处理A549细胞后,光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞;Annexin Ⅴ-FITC/PI标记法的定量检测进一步证实了南方红豆杉水提物诱导细胞凋亡的作用;蛋白印迹检测表明南方红豆杉水提物能使survivin表达下降,对ERK1/2和JNK1/2表达无影响。结论南方红豆杉水提物能显著抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,主要通过调节survivin蛋白的表达来实现。

HIFU诱导人肺癌细胞凋亡及其可能机制

目的 研究高强度聚焦超声 (HIFU )诱导人肺癌细胞凋亡的作用及可能机制。方法 用不同剂量 HIFU作用于人肺癌细胞株 A549,分别应用 MTT试验、集落形成试验及流式细胞仪检测细胞存活、增殖、凋亡及相关基因表达的改变。结果 一定剂量的 HIFU可通过影响细胞增殖和凋亡相关的基因 (p53、fas、bax及 HSP70 )表达 ,阻止细胞于 G0 / G1期 ,抑制细胞增殖和集落形成 ,诱导细胞凋亡。结论 一定剂量的 HIFU可抑制体外培养的人肺癌细胞增殖 ,诱导细胞凋亡 ,其作用机制可能与其调控细胞增殖。

莪术、三棱对人肺癌细胞凋亡的影响

运用EPICS ELITE型流式细胞仪 ,研究莪术、三棱对人肺癌A5 49细胞凋亡的诱导作用。实验共设莪术提取液组、三棱提取液组及二者协同作用组 3组。结果显示 ,莪术、三棱对人肺癌细胞的凋亡有诱导作用。提示诱导肿瘤细胞的凋亡可能是莪术、三棱抑癌作用的机制之一。

茶多酚对高转移性人肺癌细胞间隙连接通讯功能的上调研究

应用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测用药后PG细胞内Ca2 +浓度、细胞间隙连接通讯(GJIC)、Cx4 3表达和细胞增殖周期分布的变化。结果显示 ,4个浓度的茶多酚对PG细胞均有杀伤作用 ,呈剂量依赖关系。细胞增殖受到明显抑制 ,使细胞阻滞于G0 /G1期 ,不能进入S期及G2 /M期 ,细胞增殖指数明显下降。与对照组相比 ,随着茶多酚浓度的增加 ,细胞内Ca2 + 浓度、GJIC和Cx4 3表达水平逐渐上升。提示茶多酚对PG细胞具有生长抑制作用 。

白英诱导人肺癌细胞凋亡及对Bcl-2的影响

目的:研究白英水提取物对人肺腺癌SPC-A-1细胞株的凋亡诱导作用及对其Bcl-2表达的影响;探讨白英提取物诱导SPC-A-1细胞凋亡的可能机制。方法:选用人肺腺癌SPC-A-1细胞株为研究对象,在体外与白英提取物4种不同浓度共同培养24、48、72、96h,采用MTT法检测白英提取物对SPC-A-1细胞增殖活性的影响;琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测白英水提取物处理的SPC-A-1细胞株细胞凋亡;比较白英提取物处理前后SPC-A-1细胞凋亡相关基因Bcl-2表达的变化。结果:白英提取物抑制SPC-A-1细胞增殖活性;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯带;SPC-A-1细胞有很低的自然凋亡率(1.37±0.52)%,50.0mg/ml白英提取物作用SPC-A-1细胞48h后,凋亡率为(33.25±4.39)%(P<0.05);50.0mg/ml白英提取物处理48h后的细胞凋亡相关基因Bcl-2表达率(24.41±2.96)%比未经处理的细胞(53.53±4.80)%表达率低(P<0.001)。结论:白英水提取物对人肺腺癌SPC-A-1细胞株有抑制增殖、诱导其凋亡作用,细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因Bcl-2表达下调有关。

榄香烯乳对体外培养人肺癌细胞株超微结构的影响

榄香烯乳(Elemene emuMon)是从中药温莪术(Gurcurma Wenyujin Y．HCHEN)的挥发油中提取的抗癌活性成分，经乳化处理而制成的乳剂注射液。体内、体外实验研究均证实该药对肿瘤细胞有直接及间接的抑制作用。临床上显示对多种肿瘤有效，并能改善病人症状，提高生活质量。为进一步了解榄香烯乳的作用机理，我们从超微结构上观察了其对人肺癌细胞株的影响。

维甲酸、甘草酸和18β-甘草次酸抗人肺癌细胞增殖和侵袭的作用

[目的]探讨全反式维甲酸(RA)与甘草酸(GL)和18β鄄甘草次酸(GA)对高转移人肺癌细胞(PGCL3)增殖抑制和抗侵袭的作用及其联合作用。[方法]用2.5μmol/L和5.0μmol/LRA、0.5mmol/L和1.0mmol/LGL、25μmol/L和50μmol/LGA,以及5.0μmol/LRA与0.5mmol/LGL联合用药和5.0μmol/LRA与25μmol/LGA联合用药处理PGCL3细胞96h,进行细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、侵袭、运动和粘附试验,以及组织蛋白酶B活性的测定,观察药物对PGCL3细胞增殖和侵袭能力的影响。[结果]RA、GL和GA可减弱PGCL3细胞增殖能力和侵袭能力(P<0.05和P<0.01),呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)分别为12.6μmol/L、1.8mmol/L和145.3μmol/L。RA与GL联合作用及RA与GA联合作用对细胞侵袭抑制率均大于两药单独作用之和,呈协同作用。GL和GA对细胞的运动、粘附、组织蛋白酶B分泌和软琼脂集落形成均有显著抑制作用(P<0.05和P<0.01)。[结论]RA、GL和GA均有抗PGCL3人肺癌细胞增殖和侵袭作用,RA与GL或GA联合作用均有协同抗侵袭作用,GL和GA抗侵袭机理是对侵袭过程中多个关键环节起抑制作用。

化痰散结方对人肺癌细胞Fas-FasL和TNFR1信号通路的影响

目的观察化痰散结方含药血清,对人肺癌 SPC-A1细胞 Fas-FasL 和 TNFR1的表达的影响。方法通过血清药理学方法,选择不同浓度的含化痰散结方的兔血清,与人肺癌细胞 SPC-A1共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜对细胞生长和凋亡状况进行形态学观察,应用 SABC 法检测 SPC-A1细胞 Fas 和FasL 的表达。用原位杂交方法检测 SPC-A1细胞 TNFR1的表达。结果人肺癌细胞经含化痰散结方的兔血清作用后,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增加;SABC 法显示,化痰散结方含药血清可上调 SPC-A1细胞 Fas(P<0.05),而且可下调 SPC-A1细胞 FasL 的表达(P<0.05)。原位杂交方法显示,含药血清组 SPc-A1细胞 TNFR1的表达明显高于不含药血清组(P<0.01)。结论化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞凋亡,其机制可能与上调 SPC-A1细胞 Fas、下调其 FasL 以及上调 TNFR1有关。

人源化抗人肺癌单域抗体基因的构建、表达及活性分析

目的:构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因,在大肠杆菌中表达,对其蛋白活性进行分析。方法:采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化,通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因。构建pET22(b+)/hu3D3VH表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达。表达产物通过Ni亲和层析柱纯化。采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析。结果:通过重叠PCR获得序列正确的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,目的蛋白的纯度达95%以上。hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性,并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合。结论:获得的人源化单域抗体hu3D3VH,保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性,为进一步临床应用奠定了基础。

牛膝多糖硫酸酯和磷酸酯衍生物对人肺癌A549细胞的影响

目的探讨牛膝多糖硫酸酯(S-AbPS)和磷酸酯(P-AbPS)衍生物对人肺癌A549细胞的影响及其作用机制。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测牛膝多糖、S-AbPS和P-AbPS对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪观察S-AbPS和P-AbPS处理A549细胞后细胞凋亡的改变。结果S-AbPS和P-AbPS对A549细胞的增殖有抑制作用,且存在时间和剂量相关性。S-AbPS和P-AbPS的48 h抑瘤活性均较同浓度的牛膝多糖强。流式细胞仪分析显示,S-AbPS和P-AbPS均可不同程度地诱导细胞凋亡。结论S-AbPS和P-AbPS较牛膝多糖能更有效地抑制人肺癌A549细胞的增殖,其机制可能是通过诱导A549细胞凋亡而实现。

甘草酸抗人肺癌细胞增殖和侵袭作用的研究

目的 :探讨甘草酸对高转移人肺癌细胞 (PGCL3)增殖抑制和抗侵袭的作用。方法 :甘草酸处理PGCL3细胞 ,用细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、侵袭、运动和粘附试验以及组织蛋白酶B活性测定 ,观察细胞增殖和侵袭能力的变化。结果 :甘草酸可降低PGCL3细胞增殖能力 ,并呈剂量依赖性 ,IC50 为 1.83mmol/L ;0 .5mmol/L和 1mmol/L甘草酸能抑制PGCL3细胞的侵袭能力 (P <0 .0 1) ,且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上述浓度的药物对细胞的运动、粘附及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,软琼脂集落形成率也显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :甘草酸有抗PGCL3人肺癌细胞增殖和侵袭作用 ,其抗侵袭机理不是对侵袭的某一环节的阻断 ,而是对侵袭各个基本环节都有抑制作用。

虎杖提取物对人肺癌A549细胞株抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的:研究虎杖提取物对人肺癌A549细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,为新药开发提供实验和理论依据。方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测虎杖提取物对细胞诱导凋亡的情况;采用流式细胞仪检测A549细胞株的细胞周期分布相和细胞凋亡率;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡关键酶Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9与凋亡相关基因产物bcl-2,以及与细胞周期有关的p21ras、Ki-67蛋白的表达情况,深入探讨虎杖提取物对人肺癌细胞株诱导凋亡的机制。结果:(1)TUNEL法检测结果:虎杖提取物40μg/mL作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;加药组凋亡率与对照组相比有显著差异,同时凋亡指数呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)流式细胞仪检测结果显示:虎杖提取物可以诱导A549细胞凋亡,加药组出现G0/G1期和G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期;(3)免疫细胞化学结果表明:虎杖提取物作用后加药组Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达增强,Ki-67、p21ras蛋白随提取物浓度表达均降低,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:1.虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。2.虎杖提取物抑制增殖作用机制可能与下调Ki-67、p21ras蛋白表达,细胞周期发生G0/G1期阻滞有关。3.虎杖提取物诱导凋亡作用机制可能与下调bcl-2蛋白表达,上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。