重离子辐照对人肺癌细胞株H1299细胞周期及caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨重离子辐照对人肺癌细胞株H1299细胞周期及caspase-3蛋白表达的影响。方法以不同剂量的^(12)C^(6+)辐照H1299细胞,培养12、24、48、72h收获细胞。用流式细胞术和噻唑蓝法检测H1299细胞周期及增殖的变化。caspase-3荧光分析试剂盒检测caspase-3活性的变化。蛋白印迹法和SP法检测辐照后caspase-3蛋白的表达。结果 H1299细胞经^(12)C^(6+)辐照后出现形态学改变;辐照12h细胞出现中期阻滞;4Gy辐照24h细胞中期阻滞最为明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),具有剂量依赖性。caspase-3活性随着辐照剂量的增加而增加。^(12)C^(6+)显著上调caspase-3的表达。结论 ^(12)C^(6+)辐照能够调控细胞周期,抑制细胞生长。重离子辐照H1299细胞经非p53依赖途径发生凋亡,caspase-3可能在辐照诱导细胞凋亡中发挥重要作用。

MCPH1在肺组织的表达及其对人肺癌细胞株H1299凋亡的影响

目的探讨MCPH1基因在肺癌组织和正常组织的蛋白表达分布及其过表达后对人肺腺癌细胞系H1299凋亡的影响。方法临床收集20例肺癌组织和8例正常肺组织标本,免疫组化法检测MCPH1蛋白在肺组织的表达分布,真核表达质粒pcDNA3.1(-)/MCPH1和空白质粒pcDNA3.1瞬时转染肺癌细胞株H1299,并设立未处理组。转染质粒48 h后,采用Real-time PCR法检测细胞中MCPH1基因mRNA的转录表达情况;转染72 h后提取细胞总蛋白,Western blot检测细胞中MCPH1蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MCPH1蛋白在肺癌组织中表达低于正常组织,而且MCPH1蛋白在癌组织中表现为核质低表达,在正常组织中为核质高表达;H1299转染pcDNA3.1(-)/MCPH1重组质粒后,可有效上调H1299细胞中MCPH1基因的mRNA和蛋白表达,处理组的细胞凋亡率(18.10±1.87)%较pcDNA3.1(-)转染组(5.76±1.85)%和未处理组(5.85±0.57)%显著增加(P<0.05)。结论 MCPH1在人肺癌组织表达降低,过表达之后可诱导肺腺癌细胞发生凋亡。

沉默肌球蛋白轻链9基因对非小细胞肺癌H1299细胞株增殖及迁移的影响

目的探讨沉默肌球蛋白调节轻链9(MYL9)基因对非小细胞肺癌H1299细胞株增殖及迁移的影响。方法将H1299细胞株分为对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)和敲减组(KD组),CON组细胞不进行转染,NC组、KD组分别转染空载短发夹RNA慢病毒和沉默MYL9基因表达的短发夹RNA慢病毒。检测3组细胞MYL9 mRNA表达水平、增殖能力及迁移能力。结果与CON组和NC组比较,KD组MYL9的mRNA相对表达水平、细胞增殖及细胞迁移能力均更低(均P <0. 05)。结论沉默MYL9基因可下调非小细胞肺癌H1299细胞株MYL9基因的mRNA表达水平,降低其增殖和迁移能力。

噬菌体随机肽库淘选肺癌细胞NCI-H1299特异性结合多肽

目的利用噬菌体展示肽库筛选出与肺癌NCI-H1299细胞特异性结合的多肽,鉴定其特异性和亲和力,为寻找肺癌早期诊断和治疗标志物打下基础。方法以肺癌细胞NCI-H1299为靶细胞,肺二倍体成纤维细胞MRC-5为吸附细胞,在37℃下对噬菌体随机十二肽库进行三轮减性筛选,挑取单克隆ELISA初步鉴定噬菌体克隆亲和力;阳性克隆提取质粒,测序后合成多肽,鉴定多肽的亲和力及特异性。结果经ELISA初步鉴定,随机挑选的20个单克隆中,其中6号对NCI-H1299亲和力最高,将其命名为PhageZS6。细胞免疫荧光试验进一步证明,合成的相应多肽FITCZS6对NCI-H1299具有高亲和力。结论利用噬菌体随机十二肽成功筛选出与肺癌细胞具有较高亲和力的多肽ZS6,为肺癌的早期诊断和靶向治疗奠定基础。

雷公藤红素诱导非小细胞肺癌H1299细胞凋亡及其机制研究

目的:研究雷公藤红素对非小细胞肺癌H1299细胞形态、线粒体膜电位及凋亡的影响。方法:用AO/PI荧光染色实验检测不同浓度雷公藤红素对H1299细胞形态的影响;用线粒体膜电位实验检测不同浓度雷公藤红素对H1299细胞线粒体膜电位变化的影响;用RT-PCR及Western blot检测不同浓度的雷公藤红素对H1299细胞中XIAP、p53 mRNA和蛋白及NF-κB信号通路的影响。结果:雷公藤红素可剂量依赖性诱导H1299细胞形态及线粒体膜电位的变化,抑制XIAP mRNA和蛋白的表达,上调p53 mRNA和蛋白的表达,同时抑制NF-κB信号通路中IKKβ、IKKα、NF-κB p65的磷酸化水平。结论:雷公藤红素能通过上调p53 mRNA和蛋白的表达以及抑制NF-κB信号通路和XIAP mRNA和蛋白的表达来诱导H1299细胞发生凋亡,即通过线粒体途径和NF-κB信号通路起到抗肿瘤作用。

复方苦参注射液增加肺癌H1299细胞放射敏感度的研究

目的观察复方苦参注射液对肺癌H1299细胞放射敏感度的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐法检测放射对H1299细胞增殖的影响;采用流式细胞法检测H1299细胞凋亡率;克隆形成试验检测各组H1299细胞的存活率。结果不同浓度复方苦参注射液处理H1299细胞24、48、72 h的IC50分别为14.46、8.51、3.52 mg/mL,对H1299细胞的毒性有一定的剂量和时间依赖性。苦参放射组H1299细胞增殖抑制率分别为33.03%、34.00%,单纯放射组抑制率分别为12.73%、15.44%,差异有统计学意义(P<0.05)。苦参放射组H1299细胞的凋亡率为11.0%,单纯放射组凋亡率为6.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。单纯放射组H1299细胞的存活率为16.3%,复方苦参注射液联合放射可使H1299细胞存活率降为12.0%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论复方苦参注射液能增加放射线诱导的肺癌H1299细胞凋亡,从而提高肺癌H1299细胞的放射敏感度。

抑制NSCLC细胞株H1299中EIF5A2表达对肿瘤生长及转移的影响

目的研究真核翻译起始因子5A2(eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株H1299中的作用和潜在分子机制。方法采用EIF5A2干扰RNA,敲除NSCLC细胞株H1299中的EIF5A2后,评估细胞的增殖能力、细胞凋亡率、细胞迁移和侵袭能力;采用Western印迹法检测NSCLC细胞株H1299敲除EIF5A2后,肿瘤相关蛋白和E-cadherin的表达情况。结果 EIF5A2的表达在NSCLS细胞株H1299中上调。而在体外实验中,EIF5A2的沉默可以抑制肿瘤细胞生长并诱导凋亡,降低细胞的迁移和侵袭能力,上调c-Myc、Bcl-2、Rac1表达,下调E-cadherin的表达。结论 EIF5A2可以促进NSCLC细胞株H1299的增殖和转移,可能成为NSCLS药物作用新靶点。

PTEN、MMP-2在淋巴结侵袭性非小细胞肺癌细胞株H1299中的表达变化及其分子调控机制

目的观察同源性磷酸酶张力蛋白(PTEN)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)在淋巴结侵袭性非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株H1299中的表达变化,并探讨其分子调控机制。方法采用RT-qPCR法和Western Blotting法检测淋巴结侵袭性NSCLC细胞株H1299、淋巴结非侵袭性NSCLC细胞株A549中PTEN和MMP-2 mRNA及蛋白。采用慢病毒介导的脂质体转染技术建立过表达PTEN的H1299细胞,记为PTEN过表达组,以转染空载质粒的H1299细胞为对照,记为对照组,分别采用RT-qPCR法和Western Blotting法检测两组细胞中PTEN蛋白、MMP-2 mRNA及蛋白、Akt蛋白、p-Akt蛋白,采用荧光素酶报告基因实验检测转录因子NF-κb。结果H1299细胞中PTEN mRNA及蛋白的相对表达量均低于A549细胞,MMP-2 mRNA及蛋白的相对表达量均高于A549细胞(P均<0.01)。与对照组相比,PTEN过表达组细胞中PTEN蛋白相对表达量显著增高,MMP-2 mRNA及蛋白、p-Akt蛋白相对表达量显著降低(P均<0.01)。PTEN过表达组细胞中NF-κb活性低于对照组(P<0.01)。结论淋巴结侵袭性NSCLC细胞株H1299中PTEN表达降低、MMP-2表达升高,过表达PTEN可能是通过Akt/NF-κb信号通路抑制MMP-2的表达。

siRNA对肺癌细胞株NCI-H460 bcl-2基因表达的影响

目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。

BH3诱导肺癌H1299细胞凋亡的试验研究

目的研究肽BH3抗人非小细胞肺癌细胞株H1299的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养H1299细胞,取10μM、100μM和1000μM浓度的BH3作用于H1299细胞,72h后,用RT-PCR检测Bcl-2、Capase3和Bcl-xL的表达变化、测定Capase3和Capase9的活性并观察体内外细胞生长的抑制情况。结果 RT-PCR结果显示,不同浓度的BH3作用后,Bcl-2、Capase3和Bcl-xL的表达表现出相应变化,Capase3和9的活性也有增高的趋势。BH3对细胞有明显的抑制作用,24h后,抑制率分别为2.34%、17.5%、24.46%;48h后,抑制率分别为8.72%、20.33%、45.17%;72h后,抑制率分别为13.11%、38.90%、50.24%。BH3(10μM、100μM和1000μM)对裸鼠移植性非小细胞肺癌细胞株H1299也有抑制作用,3个剂量组的抑瘤率分别为43.85%,54.92%和59.02%。结论肽BH3有促进H1299细胞凋亡的作用。降低高表达的Bcl-2和Bcl-xL基因,升高Ca-pase3基因,可能是BH3抗人非小细胞肺癌的机制之一。

ULF基因沉默对依托泊苷引起的非小细胞肺癌H1299细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰靶向抑制ULF的表达对化疗药物依托泊苷(etoposide)引起的非小细胞肺癌H1299细胞凋亡的影响。方法设计3条针对ULF基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段及1条阴性对照siRNA,分别在慢病毒载体介导下感染H1299细胞。用real-time PCR及Western印迹法筛选出1条抑制效率最高的ULF序列,对有效干扰组和对照干扰组细胞进行etoposide处理,干扰对照细胞或沉默ULF的H1299细胞,用c-PARP做标记物检测H1299细胞的凋亡程度,MTT法检测H1299细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果经感染ULF-shRNA-1序列的H1299细胞中ULFmRNA及蛋白表达降低最为明显,抑制率达80%,选择该条siRNA作为有效干扰组进行后续实验。Western blot结果显示etoposide处理后,有效干扰组H1299细胞凋亡水平显著增加,细胞增殖抑制率显著高于对照干扰组,并与etoposide剂量呈正相关,2组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流武结果显示有效干扰组G0/G1期细胞较对照组增加,S期细胞减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 etoposide处理后通过干扰ULF蛋白表达可诱导H1299细胞的凋亡,抑制细胞增殖,使细胞出现S期阻滞,推测ULF基因可能成为癌症基因治疗的一个新靶点。

贝伐珠单抗通过调控PI3K/AKT信号通路下调肺腺癌H1299细胞PD-L1表达

目的:探讨贝伐珠单抗(Beva)对人肺腺癌H1299细胞程序性细胞死亡配体1(PD-L1)表达的影响及其可能机制。方法:使用不同浓度Beva(0、5、10、20、40、80μg/ml)作用于H1299细胞36 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞PD-L1表达;实验分为:对照组(等量培养液)、Beva组、740-YP(PI3K激活剂)组、LY294002(PI3K抑制剂)组、Beva+740-YP组,流式细胞术检测细胞PD-L1表达,Western blot法检测细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果:(1)Beva能抑制H1299细胞增殖,其作用与剂量有关(P<0.05);(2)随着Beva浓度升高、作用时间延长,H1299细胞PD-L1表达量逐渐减少(P<0.05);(3)PI3K通路抑制剂LY294002处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著减少(P<0.01),PI3K通路激活剂740-YP处理H1299细胞后PD-L1的表达量显著增加(P<0.01);(4)Beva处理H1299细胞后PD-L1、p-PI3K、p-AKT的表达显著减少(P<0.05),加入740-YP后可减弱Beva对PD-L1、p-PI3K、p-AKT的抑制作用(P<0.01)。结论:Beva在一定范围内以剂量依赖方式抑制H1299细胞增殖,以时间-剂量依赖方式下调H1299细胞中PD-L1的表达,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

三基序蛋白25过表达对肺癌细胞H1299顺铂敏感性的影响

目的:初步探讨三基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制。方法:应用基因克隆技术构建TRIM25高表达质粒载体,瞬时转染人肺癌细胞株H1299,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot法检测TRIM25蛋白表达水平及其过表达时丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)蛋白水平的变化。用顺铂分别处理转染前后的H1299细胞24 h,MTT法检测细胞耐药性,Annexin V/PI双染法流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡。结果 :同H1299空白组和转染pGCMV/neo空载体组比较,pGCMV-trim25转染组细胞中TRIM25蛋白的表达水平明显增加(P=0.003,P=0.005);且TRIM25过表达时,细胞中PKM2蛋白的表达水平降低(P=0.001,P=0.003)。用顺铂处理后,pGCMV-trim25转染组细胞的药物敏感性显著下降(P<0.001),转染组细胞凋亡率亦明显降低(P<0.001)。结论:TRIM25在肺癌细胞H1299中高表达时,可能通过下调PKM2而降低对顺铂的敏感性。

Omicron变异株XBB.1.16刺突蛋白对人非小细胞肺癌细胞的生物学功能的影响

目的探讨新型冠状病毒Omicron变异株XBB.1.16刺突蛋白(XBB.1.16-S)感染人非小细胞肺癌细胞H1299-ACE2的病毒学特征及其对H1299-ACE2细胞线粒体受损的影响。方法以亲本pCMV3-SARS-CoV-2-S质粒为模板构建XBB.1.16-S基因真核表达载体(pCMV3-XBB.1.16-S质粒)后转染H1299-ACE2细胞,比较两者诱导细胞形成合胞体的能力。利用双质粒系统包装SARS-CoV-2-S和XBB.1.16-S假病毒后分别感染H1299-ACE2细胞,测定感染后宿主细胞荧光素酶强度并采用Western blot实验检测细胞中S蛋白的切割效率,采用MitoTracker Green探针观察染色细胞的线粒体形态,采用流式细胞仪检测细胞的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与亲本pCMV3-SARS-CoV-2-S质粒相比,pCMV3-XBB.1.16-S质粒的T19I、V83A、G142D等关键氨基酸突变位点突变成功,且转染H1299-ACE2细胞后所形成的合胞体面积明显减小(P<0.0001)。与SARS-CoV-2-S相比,XBB.1.16-S感染H1299-ACE2细胞后荧光素酶强度、S蛋白切割效率及ROS水平均降低(均P<0.05),线粒体长度更长(P<0.0001),MMP水平升高(P<0.001)。结论Omicron变异株XBB.1.16-S对非小细胞肺癌细胞H1299-ACE2的感染能力和线粒体损伤能力较亲代病毒有一定程度减弱,这为肺癌合并新型冠状病毒肺炎的细胞学变化及治疗靶点的研究奠定了重要基础。

人肺癌细胞H1299放射敏感性与细胞周期研究

目的通过对人肺癌细胞H1299照射前、后细胞周期分布及其周期相关基因状态等研究,初步探讨其放射敏感性与照射后细胞周期阻滞的关系。方法利用克隆形成法比较H1299与H1299细胞照射后细胞存活份数及流式细胞术研究其细胞周期分布的差异;用功能基因芯片技术对周期相关的421基因进行分析研究;流式细胞术测定细胞周期及凋亡;苔盼蓝染色研究细胞死亡方式;用克隆形成率检测细胞的存活曲线。结果H1299细胞对γ射线高度敏感,照射后G1期阻滞消失,但仍存在G2期阻滞;基因芯片分析,其中周期相关基因有13个基因表达改变超过对照组2倍以上;苔盼蓝染色检测到的细胞死亡比例与对照组比较差异无显著性。结论结果表明射线对细胞的杀伤绝大部分不是由于照射后细胞凋亡所致,而是由于基因表达改变使其细胞周期阻滞,失去增殖能力引起增殖死亡的结果。

澳洲茄碱诱导肺癌细胞株H446凋亡及其机制探讨

背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合适浓度和时间,以药物浓度为0μmol/L、3.4μmol/L、6.8μmol/L、13.6μmol/L分4组,作用于H446细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化,DAPI核染观察细胞核变化,流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、CASP3表达的变化。结果澳洲茄碱可降低H446细胞的存活率,抑制其增殖,具有剂量相关性,存活率可降低至16.77%(P<0.001),最高凋亡率为44.62%(P<0.001);H446有明显的细胞凋亡形态学变化;Western blot显示凋亡相关蛋白BAX、CASP3表达上调(P<0.05),凋亡抑制基因蛋白BCL2表达下调(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制H446细胞的增殖,上调促凋亡相关蛋白表达,下调抑凋亡蛋白表达,从而促进细胞的凋亡。

STAT1对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖及IFN-β敏感性的影响

目的:探讨信号转导及转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)对人非小细胞肺癌H1299细胞增殖及人重组干扰素β(interferon-β,IFN-β)敏感性的影响。方法:构建STAT1基因慢病毒过表达载体Lenti-STAT1,转染H1299细胞,建立稳定表达STAT1的细胞株,EGFP转染组作为对照,观察各组细胞生长情况。用不同浓度的IFN-β处理各组细胞,观察对细胞的生长抑制作用。Western blot法检测各组细胞内p-STAT1、ICAM-1和PCNA的蛋白水平。结果:成功构建稳定过表达STAT1及对照EGFP的H1299细胞株。过表达STAT1的H1299细胞的增殖活性明显低于EGFP对照组(P<0.05),其对IFN-β的敏感性显著高于EGFP对照组(P<0.05)。过表达STAT1上调活化的STAT1磷酸化水平,下调ICAM-1表达。并且,STAT1增强IFN-β诱导的STAT1磷酸化水平,下调PCNA表达。结论:过表达STAT1可抑制H1299细胞增殖,增强细胞对IFN-β的敏感性,为STAT1基因联合IFN-β治疗非小细胞肺癌提供了实验基础。

PTPN12低表达参与调控肺癌H1299细胞凋亡的作用及对放疗敏感性的影响

目的探讨PTPN12低表达参与调控肺癌H1299细胞凋亡的作用及对放疗敏感性的影响。方法选取肺癌患者82例,应用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit试剂盒进行样本DNA提取,采用NanoDrop1000 spectrophotometer测定样本DNA浓度与纯度,所提取的DNA采用紫外分光光度仪进行浓度检测与质量评估。采用化学发光法检测外周血血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、肿瘤特异性生长因子(TSGF)]。扩增产物采用western blot法进行蛋白产物的定性和定量分析。结果PTPN12表达对肺癌病情的调控作用分析结果可见,在组织分化和病理分期更严重的患者中PTPN12-mRNA表达更低,且在随访生存期更低的患者中也可见表达更低,均有统计学意义;但PTPN12蛋白表达只在不同病理分期患者中检出差别有统计学意义,且同mRNA表达规律相一致;而在不同组织分化和预后患者间差别尚未见统计学意义,与样本量等因素限制有关。PTPN12基因在肺癌组织中突变38例,突变患者血清CEA高于野生型患者,CA125、CYFRA21-1低于野生型患者(P均<0.05)。同时,PTPN12低表达与NSCLC患者的放射敏感性密切相关,而且PTPN12基因下调能明显增加H1299细胞的放射敏感性。结论PTPN12低表达同肺癌患者的放射敏感性存在关联,PTPN12下调可以有效增加H1299细胞的放射敏感性,可以考虑作为提示患者的放射敏感性的靶点,并为靶向治疗联合放疗提供更多依据。

大豆苷元对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖、迁移能力的影响及机制

目的探究大豆苷元(daidzein,Daid)对非小细胞性肺癌细胞株A549和H1299增殖、迁移能力的影响及可能机制。方法以A549和H1299为研究对象,CCK-8法检测Daid(0,5,10,25,50,100,200μmol·L^-1)抑制A549和H1299两种细胞的增殖情况。划痕和Transwell小室实验检测Daid对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测Cleaved Caspase-3和LC3Ⅱ/Ⅰ等的蛋白表达。结果与对照组相比,Daid在体外可明显抑制肺癌细胞的增殖,且抑制作用呈浓度依赖关系。Daid(100μmol·L^-1)可明显降低人肺癌细胞A549和H1299的迁移侵袭能力。Western blot结果显示,Daid(100μmol·L^-1)预处理后,两种肺癌细胞的Cleaved Caspase-3及LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高。结论Daid可抑制人非小细胞肺癌A549和H1299细胞的增殖,使上述细胞的迁移侵袭能力明显下降,其机制可能与Daid诱导细胞凋亡及自噬有关。

鸦胆子苦醇对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用研究

目的:探讨鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用及其机制。方法:利用CCK-8法检测BRU对H1299细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC50),将H1299细胞分为对照组、BRU组(IC50)、X射线组(2 Gy)和BRU联合X射线组(BRU+2 Gy)。应用克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测照射后24 h细胞凋亡率和胞内活性氧含量(reactive oxygen species,ROS);Western blotting技术检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路和线粒体凋亡通路相关蛋白表达;免疫荧光技术实现Nrf2蛋白定位。结果:BRU的IC50为100 nmol/L,用该浓度处理H1299细胞24 h后,Nrf2表达量最低;100 nmol/L BRU联合2 Gy的X射线照射后,与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、Nrf2蛋白表达量降低,细胞核中Nrf2蛋白含量减少,线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高。结论:BRU联合X射线通过抑制PI3K/Akt/Nrf2信号通路,增加H1299细胞凋亡,从而增强H1299细胞的辐射敏感性。