木犀草素通过上调microRNA-34a-5p诱导肺癌细胞株H460凋亡的研究

探究木犀草素诱导人肺癌细胞株H460凋亡的分子机制,为其治疗肺癌提供新的科学依据。选取处于对数生长期的H460细胞株,并分为对照组和不同剂量的木犀草素组。采用CCK-8法检测木犀草素对H460细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;PCR array检测肺癌相关基因mRNA表达;Western-blot检测p53、p21、Bax、Bcl-2表达量变化;qRT-PCR法检测microRNA-34a(miR-34a)的表达水平;本实验还检测了过表达miR-34a-5p后对H460细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。结果显示,木犀草素能有效抑制人肺癌H460细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制可能是通过激活p53信号通路,上调miR-34a-5p,最终影响凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达来实现的。

siRNA对肺癌细胞株NCI-H460 bcl-2基因表达的影响

目的:研究siRNA (smallinterferenceRNA)对大细胞肺癌细胞株NCI -H4 6 0bcl- 2基因表达的影响。方法:利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl - 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入NCI-H4 6 0细胞株,设置转染bcl- 2反义药物G3139和空白两对照组。用MTT法检测siRNA对细胞生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期的改变和Bcl- 2蛋白表达;RT -PCR检测bcl- 2mRNA水平。结果:siRNA组与对照组细胞存活率均有显著性差异(P <0 0 5 ) ;siRNA组bcl- 2的mRNA明显低于对照组和反义组(P <0 0 5 ) ;siRNA组Bcl- 2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组以及反义组细胞阻滞于S期。结论:体外转录合成的siRNA可抑制NCI-H4 6 0细胞bcl- 2基因的表达,抑制率可达5 0 %以上。

索拉非尼对非小细胞肺癌H460与A549细胞株的抑制作用及其机制

目的探讨索拉非尼对非小细胞肺癌H460、A549细胞株的抑制效果及其作用机制。方法选取H460、A549细胞株进行培养,随机分为对照组和不同浓度(3.0μmol·L^(-1),6.0μmol·L^(-1),9.0μmol·L^(-1))索拉非尼组,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot法检测Cyclin E1和E2F1的蛋白表达。结果不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞OD值均明显低于对照组(P<0.05),其中9.0μmol·L^(-1)索拉非尼组H460、A549细胞OD值分别为(0.550±0.080)和(0.603±0.073),明显低于其他各组(P<0.05)。不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞G0/G1期比例均明显高于对照组(P<0.05),其中9.0μmol·L^(-1)索拉非尼组H460、A549细胞G0/G1期比例分别为(68.20±7.40)%和(69.12±7.04)%,明显高于其他各组(P<0.05)。不同浓度索拉非尼组H460、A549细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达明显低于空白对照组(P<0.05),其中9.0μmol·L^(-1)索拉非尼组H460细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达分别为(0.206±0.097)和(0.412±0.096),A549细胞Cyclin E1和E2F1蛋白表达分别为(0.210±0.094)和(0.311±0.095),均明显低于其他组(P<0.05)。结论索拉非尼可抑制非小细胞肺癌H460、A549细胞增殖,将细胞阻滞于G1期,可能与调控Cyclin E1和E2F1蛋白有关。

血管性血友病因子、整合素β_3在人肺癌细胞H460中的表达及其与肿瘤转移的相关性

背景与目的:血管性血友病因子(von Willebr and factor,vWF)、整合素β3(integrinβ3)与肿瘤转移的机制目前研究不清楚。本研究目的是观察vWF与integrinβ3在人肺癌细胞H460中的表达,人肺癌细胞H460与vWF黏附的关系,两因子与肿瘤轻移的相关性及vWF与integrinβ3的相互关系。方法:①应用免疫组化技术观察vWF及integrinβ3在人肺癌细胞株H460的表达;②联合应用vWF黏附实验、抗体抑制实验及MTT法,观察vWF及integrinβ3与人肺癌细胞H460的黏附,及vWF与integrinβ3的相互关系。结果:①免疫组化结果显示H460细胞均表达vWF及integrinβ3。②vWF可以与H460细胞黏附,Anti-integrinβ3抑制后这种黏附降低,A值由1.59±0.06降到0.55±0.03,(P=0.01619),Anti-vWF抑制后这种黏附也降低,A值由1.60±0.06降到0.54±0.03,(P=0.01598),两者抑制黏附效果相同。结论:H460细胞表达vWF及integrinβ3,vWF可以与H460细胞黏附,vWF可能通过与integrinβ3结合发挥黏附作用,从而促进肿瘤细胞转移。

和厚朴酚通过NF-κB信号通路抑制IL-1诱导的人肺癌细胞H460血管生成

目的探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对肿瘤炎性微环境诱导的肺癌细胞H460血管生成的影响及其可能的机制。方法采用CCK-8检测HNK对H460细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响;RT-PCR、Western blot、免疫荧光检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blot检测信号通路蛋白p-IκBα、p-IKKα和NF-κB p65蛋白表达。采用划痕试验、Transwell迁移试验和成管试验检测HNK抑制HUVEC细胞的迁移和血管生成能力。结果HNK作用H460细胞24、48、72 h后,浓度和时间依赖地抑制H460细胞增殖。HNK能够浓度依赖的抑制HUVEC细胞的存活。HNK还降低了H460细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白质和mRNA表达水平。随后,HNK浓度依赖性地抑制了NF-κB信号通路中IκBα、NF-κB和p-IKKα。划痕试验、Transwell小室迁移试验和成管试验显示HNK处理的H460条件培养基具有抑制HUVEC细胞的迁移和血管生成能力。结论HNK可以通过抑制NF-κB途径导致VEGF的下调而降低人肺癌细胞的活力和血管生成。

重楼皂苷Ⅶ抑制肺癌H460细胞增殖和迁移能力研究

为研究重楼皂苷Ⅶ(polyphyllin Ⅶ)抑制人肺癌H460细胞增殖、迁移能力和诱导凋亡的作用和机制。本实验采用MTT法检测重楼皂苷Ⅶ处理后H460细胞生长抑制率,Hoechst 33258染色观察细胞形态,细胞集落形成实验考察细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell小室实验研究H460细胞迁移和侵袭能力的改变,并通过western blot法检测在重楼皂苷Ⅶ处理前后细胞蛋白表达变化情况。结果发现,重楼皂苷Ⅶ可显著抑制H460细胞增殖,影响其集落形成,并使细胞形态发生变化,抑制细胞体外的迁移和侵袭能力,并可诱导凋亡的发生。重楼皂苷Ⅶ处理后,H460细胞中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9显著降低,凋亡相关蛋白剪切型caspase-3、Bax表达增加,ICAD、Bcl-2表达降低,提示重楼皂苷Ⅶ体外可能通过调节基质金属蛋白酶抑制H460细胞迁移和侵袭,同时诱导凋亡的发生。

黄芩苷对肺癌H460细胞生物学特性及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨中药单体黄芩苷对人肺癌H460细胞增殖、凋亡、上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移生物学特性及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测不同浓度的黄芩苷对H460细胞细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)。通过流式细胞术检测黄芩苷对H460细胞凋亡的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中上皮性钙黏附素(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)基因表达量,划痕实验检测黄芩苷对H460细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测黄芩苷对H460细胞侵袭能力的影响,Western印迹检测H460细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及Wnt/β-catenin信号通路Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)等关键蛋白表达情况。结果黄芩苷可抑制H460细胞增殖,且呈浓度依赖性关系,对H460细胞的IC50为(188.1±11.52)μmol/L;黄芩苷以浓度依赖性促进H460细胞凋亡,抑制H460细胞侵袭和迁移;qRT-PCR结果发现黄芩苷能够促进H460细胞中E-cadherin基因表达,抑制N-cadherin和Vimentin基因表达;黄芩苷可下调PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且能够抑制Wnt/β-catenin信号通路中Wnt1和β-catenin蛋白表达。结论黄芩苷可抑制人肺癌H460细胞增殖、EMT、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,该过程的分子机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

丹参酮ⅡA对NCI-H460肺癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的:本研究拟探讨丹参酮ⅡA对肺癌细胞株NCI- H460的增殖抑制作用及其作用机理。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对NCI- H460细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪观察丹参酮ⅡA对NCI- H460细胞周期的影响,应用RT- PCR法检测用药后bcl 2和C myc基因mRNA表达水平。结果:丹参酮ⅡA对NCI H460细胞增殖抑制作用成剂量依赖性。细胞周期分析显示:用0 5μg/ml丹参酮ⅡA作用NCI H460细胞24、48、72h后,凋亡细胞分别占细胞总数1 .2%、3 .4%、7. 7%;用1 0μg/ml丹参酮ⅡA作用24、48、72h,凋亡细胞分别占细胞总数2 .6%、5. 9%、13 .4%;用2 0μg/ml丹参酮ⅡA作用24、48、72h,凋亡细胞分别占细胞总数4 .1%、8 .7%、37. 6%,说明丹参酮ⅡA能促使NCI H460细胞发生凋亡,且此作用呈剂量依赖性。用药48h后bcl- 2和C -myc基因mRNA表达明显降低。结论:丹参酮ⅡA对NCI H460细胞的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用。关键词 丹参酮ⅡA;NCI H460细胞株;细胞周期;

n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1在人肺癌细胞H460内的表达

n-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1来自于秀丽线虫(C.elegans)。为检测该基因在人肺癌细胞H460中的表达效果,本项研究构建了哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+)myc-HisA-fat-1,以Xfet polymer介导法转染到人肺癌细胞H460中,RT-PCR检测到有效的异源基因表达,MTT法证实基因表达能有效地抑制肺癌细胞的增殖率(P<0.05),气相色谱分析基因表达前后细胞中n-6/n-3多不饱和脂肪酸比例降低(P<0.05),为将该基因用于癌症的转基因治疗奠定了基础。

依托泊苷脂质微球注射液对人肺癌H460细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的:观察依托泊苷脂质微球注射液抑制肺癌H460细胞裸鼠移植瘤生长的作用。方法:采用人肺癌H460瘤株种植于裸鼠皮下,形成移植瘤模型,用依托泊苷脂质微球注射液静脉注射,对抑制荷瘤动物肿瘤生长作用进行观察。结果:依托泊苷脂质微球注射液具有明显的抑制荷瘤动物肿瘤生长作用;依托泊苷脂质微球注射液抑瘤生长作用与依托泊苷注射液比较无明显差异。对血液WBC和脏器损伤轻于依托泊苷注射液。结论:依托泊苷脂质微球注射液治疗肺癌具有安全、有效,不良反应低,耐受性好的特点。

单核细胞与肺癌H460细胞及肺成纤维细胞三维立体混合培养IL-1β与TNF-α的表达

目的:探讨外周血单核细胞和肺癌H460细胞及肺成纤维细胞相互作用对产生IL-1β与TNF-α的影响。方法:三维胶原立体培养条件下,分为单核细胞、H460细胞、肺成纤维细胞单独培养组,单核细胞和H460细胞共同培养组,单核细胞和肺成纤维细胞共同培养组,H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组,单核细胞、H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组。培养24、72、96h,收集上清液,用酶联免疫法检测不同时间点各组IL-1β与TNF-α的含量。结果:各组细胞在三维立体胶原培养条件下生长良好,单独培养时,仅单核细胞组分泌少量IL-1β和TNF-α,而H460细胞组、肺成纤维细胞组没有检测到IL-1β和TNF-α。单核细胞和H460细胞共同培养组分泌IL-1β与TNF-α量增高,单核细胞和肺成纤维细胞共同培养组分泌IL-1β与TNF-α量也有轻微增高,而H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组仅检测到少量IL-1β与TNF-α的表达,单核细胞、H460细胞和肺成纤维细胞共同培养组分泌IL-1β与TNF-α量明显高于其它组。结论:单核细胞和肺癌H460细胞及肺成纤维细胞相互作用可以促进IL-1β与TNF-α的表达。

肺癌H460细胞与单个核细胞相互作用对MMP-1、-2、-9表达的影响

目的:研究单个核细胞和肺癌H460细胞三维立体混合培养对MMP-1、MMP-2和MMP-9表达的影响,并观察MMPs对胶原的降解作用。方法:活性胶原立体培养分为空白对照组(CG)、H460细胞组(HG)、单个核细胞组(MG)、混合组(HMG)共4组,观察癌细胞的生长状况。用明胶酶谱法测定不同时间点各组MMP-2和MMP-9表达,用Western blotting法测定MMP-1。结果:各组细胞在立体胶原内生长良好。MG未明显分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,HG和HMG均分泌MMP-1、MMP-2和MMP-9,但HMG分泌量明显多于HG。结论:炎症细胞和癌细胞混合培养后,细胞间相互作用促进MMPs分泌增多。基质金属蛋白酶可降解细胞外基质,进而促进肺癌的侵袭和转移。

重离子辐照对人肺癌细胞株H1299细胞周期及caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨重离子辐照对人肺癌细胞株H1299细胞周期及caspase-3蛋白表达的影响。方法以不同剂量的^(12)C^(6+)辐照H1299细胞,培养12、24、48、72h收获细胞。用流式细胞术和噻唑蓝法检测H1299细胞周期及增殖的变化。caspase-3荧光分析试剂盒检测caspase-3活性的变化。蛋白印迹法和SP法检测辐照后caspase-3蛋白的表达。结果 H1299细胞经^(12)C^(6+)辐照后出现形态学改变;辐照12h细胞出现中期阻滞;4Gy辐照24h细胞中期阻滞最为明显,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),具有剂量依赖性。caspase-3活性随着辐照剂量的增加而增加。^(12)C^(6+)显著上调caspase-3的表达。结论 ^(12)C^(6+)辐照能够调控细胞周期,抑制细胞生长。重离子辐照H1299细胞经非p53依赖途径发生凋亡,caspase-3可能在辐照诱导细胞凋亡中发挥重要作用。

澳洲茄碱诱导肺癌细胞株H446凋亡及其机制探讨

背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合适浓度和时间,以药物浓度为0μmol/L、3.4μmol/L、6.8μmol/L、13.6μmol/L分4组,作用于H446细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化,DAPI核染观察细胞核变化,流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、CASP3表达的变化。结果澳洲茄碱可降低H446细胞的存活率,抑制其增殖,具有剂量相关性,存活率可降低至16.77%(P<0.001),最高凋亡率为44.62%(P<0.001);H446有明显的细胞凋亡形态学变化;Western blot显示凋亡相关蛋白BAX、CASP3表达上调(P<0.05),凋亡抑制基因蛋白BCL2表达下调(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制H446细胞的增殖,上调促凋亡相关蛋白表达,下调抑凋亡蛋白表达,从而促进细胞的凋亡。

沉默肌球蛋白轻链9基因对非小细胞肺癌H1299细胞株增殖及迁移的影响

目的探讨沉默肌球蛋白调节轻链9(MYL9)基因对非小细胞肺癌H1299细胞株增殖及迁移的影响。方法将H1299细胞株分为对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)和敲减组(KD组),CON组细胞不进行转染,NC组、KD组分别转染空载短发夹RNA慢病毒和沉默MYL9基因表达的短发夹RNA慢病毒。检测3组细胞MYL9 mRNA表达水平、增殖能力及迁移能力。结果与CON组和NC组比较,KD组MYL9的mRNA相对表达水平、细胞增殖及细胞迁移能力均更低(均P <0. 05)。结论沉默MYL9基因可下调非小细胞肺癌H1299细胞株MYL9基因的mRNA表达水平,降低其增殖和迁移能力。

非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞MT1-MMP表达的影响

目的:探讨非类固醇类抗炎药NS398对肺癌H460细胞增殖及其膜型基质金属蛋白酶-1(mem-brane type 1-matrix metalloproteinase,MT1-MMP)表达的影响。方法:应用MTT法检测细胞生长抑制率,免疫荧光法检测MT1-MMP蛋白质表达,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)检测细胞培养液中活性基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)的浓度。结果:NS398可抑制H460细胞的增殖及MT1-MMP蛋白质的表达,减少H460细胞培养液中活性型MMP-2的含量,并呈剂量依赖关系。结论:NS398可能通过抑制肺癌细胞MT1-MMP表达及MMP-2的激活而抑制肺癌细胞的侵袭转移。

ABCE1基因通过RNase L途径抑制人大细胞肺癌H460细胞凋亡

目的研究ABCE1基因表达对人大细胞肺癌H460细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其机制。方法体外培养H460细胞,分为A组(转染ABCE1-siRNA-1组)、B组(转染ABCE1-siRNA-2组)、C组(转染空质粒组)以及D组(空白对照组)。将构建好的ABCE1的siRNA(小干扰RNA)载体转染入培养的细胞中,荧光显微镜下观察转染效率,Western Blot法检测ABCE1蛋白以及RNase L蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCE1 mRNA的表达,MTT法分析细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果将构建好的载体成功转入了H460细胞,转染后A、B组的细胞活性降低,ABCE1的表达受到阻断(P<0.01),RNase L蛋白含量明显增加(P<0.01),细胞的增殖能力明显降低并逐渐凋亡(P<0.01)。结论 ABCE1基因可促使人大细胞肺癌H460细胞增殖并抑制细胞凋亡,其机制是阻断了2-5A/RNase L细胞通路。

秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响

目的探讨秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响。方法将体外培养人肺癌H460细胞分为4组:空白对照组、秦皮乙素0.2 mg/ml组、秦皮乙素0.4 mg/ml组、秦皮乙素0.8 mg/ml组。给药干预48 h后,MTT法观察细胞增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞凋亡率和周期;比色法检测Caspase-3的活性。结果不同浓度的秦皮乙素均能抑制人肺癌细胞H460的体外增殖,并使细胞阻滞于S期,Caspase-3的活性上升,上述结果均呈剂量依赖性。结论秦皮乙素能抑制人肺癌H460细胞的体外增殖,并能诱导H460细胞的凋亡,具有良好的抗肿瘤作用。

二去水卫矛醇对人非小细胞肺癌H460细胞体内抗癌活性及其机制研究

目的:研究二去水卫矛醇(DAG)对人非小细胞肺癌(NSCLC)H460细胞体内抗癌作用及其机制。方法:建立裸鼠人NSCLC H460细胞移植瘤模型,分为模型组、阳性对照组及DAG低、中、高剂量组(DAG-L组、DAG-M组、DAG-H组)。采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,分别采用RT-qPCR法和Western blotting法检测肿瘤组织凋亡相关基因和蛋白表达。结果:与模型组比较,DAG各剂量组和阳性对照组瘤体体积和瘤重减小,抑瘤率均高于40%,肿瘤细胞凋亡率增高(均P<0.05);DAG-M组、DAG-H组和阳性对照组Bax、Caspase-3、Caspase-9、P53 mRNA相对表达量升高,DAG-L组Caspase-9 mRNA相对表达量升高,DAG各剂量组Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量均降低,Bax、P53蛋白表达量升高(均P<0.05)。结论:DAG可抑制人NSCLC H460裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制与诱导线粒体凋亡途径有关。

臭椿酮对人非小细胞肺癌H460细胞的抑制机制研究

目的探究臭椿酮抗非小细胞肺癌H460细胞的作用及分子机制。方法CCK8法检测臭椿酮对非小细胞肺癌H460细胞增殖的影响;Cultrex细胞迁移和侵袭法检测臭椿酮对细胞迁移和侵袭的作用;细胞免疫荧光检测臭椿酮对细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响;Western blot检测臭椿酮对细胞蛋白激酶B(Akt)、蛋白酪氨酸激酶Src(Src)磷酸化和Cyclin D1蛋白表达的影响。结果CCK8结果表明,与0μM浓度(100.00±6.02)%比较,不同浓度(0.2μM,0.4μM,0.6μM,0.8μM,1.0μM)臭椿酮处理下H460细胞活力下降[(75.00±2.88)%,P<0.05;(55.33±1.40)%,(42.33±3.52)%,(32.33±1.45)%,(27.00±1.15)%,P<0.01];Cultrex 96孔细胞迁移法检测结果显示,与二甲基亚砜(DMSO)组(100.00±7.21)%比较,臭椿酮组(35.25±3.46)%H460细胞迁移率降低(P<0.01);Cultrex BME细胞侵袭法显示,与DMSO组(100.00±7.00)%比较,臭椿酮组(27.00±4.07)%细胞侵袭率降低(P<0.01);细胞免疫荧光实验显示,与DMSO组(50.00±1.73)%比较,臭椿酮组(14.67±1.20)%Cyclin D1阳性细胞比例明显下降(P<0.01);Western blot结果显示,H460细胞在臭椿酮处理后Akt和Src的磷酸化明显降低,同时Cyclin D1表达明显下降。结论臭椿酮抑制非小细胞肺癌H460细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能是抑制Akt磷酸化抑制细胞迁移和侵袭,同时抑制Src磷酸化抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达。