鱼腥草注射液诱导人肺腺上皮细胞β防御素2 mRNA表达

目的:探讨鱼腥草注射液体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)后人β防御素2(human beta-defensin2,HBD-2)基因表达的情况,并研究HBD-2表达对鱼腥草注射液浓度和作用时间的依赖效应。方法:体外培养SPC-A-1细胞,设置12.5、25、50、100和200μg/ml5个鱼腥草注射液浓度梯度,刺激贴壁生长的SPC-A-1细胞8h,根据细胞HBD-2mRNA表达量明确作用最佳的浓度;最佳作用浓度鱼腥草注射液作用0、1、2、4、8、16、24和48h,根据细胞HBD-2mRNA表达量明确最佳作用时间。SPC-A-1细胞HBD-2mRNA表达的情况应用逆转录聚合酶链式反应技术检测。结果:不同浓度鱼腥草注射液刺激SPC-A-1细胞后,HBD-2表达与刺激剂量(rs=0.829,P=0.042)和刺激时间(rs=0.914,P=0.003)具有一定的相关性,当鱼腥草浓度为100μg/ml、刺激8h时,HBD-2mRNA表达水平达到最高。与空白对照组和白细胞介素1β对照组比较,100μg/ml鱼腥草注射液作用8h可以上调SPC-A-1细胞HBD-2mRNA的表达。结论:鱼腥草注射液可诱导HBD-2基因的表达增强,最佳浓度为100μg/ml,最佳刺激时间为8h。

卡介苗对人肺腺上皮细胞表达Fall-39 mRNA及抗菌活性的影响

目的 探讨卡介苗能否增强 Fall- 39在人肺腺上皮 SPC- A- 1细胞中的表达 ,分离鉴定卡介苗刺激作用的有效胞壁蛋白组份 ,并检测其抗菌活性。方法 根据 Gen Bank中人 Fall- 39的 c DNA序列资料 ,设计特异性引物 ,应用 RT- PCR法检测 SPC- A - 1细胞 Fall- 39m RNA的表达 ,采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、SephadexG- 75柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份 ;采用琼脂糖弥散杀菌法检测 SPC- A- 1细胞培养上清的抗菌活性。结果 卡介苗刺激 SPC- A - 1细胞 Fall- 39m RNA的表达明显增强 ,而且这种诱导增强表达在一定范围内具有刺激物剂量和时间依赖性。卡介苗胞壁蛋白层析所得 6个组份中 ,组份 4 (相对分子质量范围约 2 1～ 2 9× 10 3)诱导 SPC-A- 1细胞 Fall- 39m RNA的表达增强约 8.5倍 ,其培养上清的抗菌活性显著增强。结论 BCG胞壁蛋白是 Fall- 39基因的激活因子 。

板蓝根诱导人肺腺上皮细胞β-防御素-2基因表达的研究

目的研究板蓝根体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)是否诱导表达具有抗菌活性的人-β-防御素-2(HBD-2)表达,并进一步探讨该表达是否存在浓度和时间依赖性效应,为进一步在动物水平探讨HBD-2的表达与中药之间的量效关系及时效关系提供依据。方法体外培养SPC-A-1细胞,设置板蓝根5个浓度梯度,另设阳性对照和空白对照各1个,分别刺激贴壁生长的SPC-A-1细胞,应用RT-PCR技术检测SPC-A-1细胞HBD-2mRNA的表达情况,获取最佳表达浓度;再以最佳浓度经不同时间点刺激SPC-A-1细胞,得到表达诱导时间和持续时间。结果研究显示板蓝根能够上调(SPC-A-1)细胞HBD-2mRNA的表达,且这种表达与板蓝根具有浓度和时间依赖性,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,HBD-2mRNA的表达达到最高。结论板蓝根可诱导HBD-2基因的表达,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,其表达达到最高。

卡介苗胞壁蛋白诱导人肺腺上皮细胞hBD-1 mRNA表达及其抗菌活性的增强

目的 分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞 (SPC A 1) β 防御素 1(hBD 1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白 ,开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂为防治粘膜感染的研究打基础。方法 采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、SephadexG 15 0柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组分 ;应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法和Northern杂交检测SPC A 1细胞hBD 1mRNA的表达 ;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC A 1细胞培养上清的抗菌活性。结果 利用RT PCR和Northern杂交分析 ,证实卡介苗刺激SPC A 1细胞hBD 1mRNA的表达增强了 2倍。卡介苗胞壁蛋白SephadexG 15 0层析所得 6个组分中 ,组分 5 [相对分子质量 (Mr)范围在 2 1× 10 3～ 2 9× 10 3]诱导SPC A 1细胞hBD 1mRNA的表达增强 4倍 ,其培养上清的抗菌活性显著增强。这种诱导作用具剂量和时间依赖关系。结论 卡介苗能增强人肺腺上皮SPC A 1细胞hBD 1mRNA的表达及其抗菌活性 ;Mr 为 2 1× 10 3～ 2 9×10 3

香菇多糖诱导人肺腺上皮细胞β-防御素-2基因表达的研究

探讨香菇多糖诱导人肺腺上皮细胞的人-β-防御素-2(HBD-2)基因表达的情况。香菇多糖体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)后,应用RT-PCR技术检测SPC-A-1细胞HBD-2 mRNA的表达。香菇多糖可上调人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)HBD-2 mRNA的表达;这种增强表达与药物的刺激剂量和刺激时间具有一定的相关性。

流感病毒H1N1感染A549细胞诱导凋亡及黄芩苷干预作用的研究

目的研究黄芩苷对流感病毒H1N1感染A549细胞诱导的凋亡干预作用,探讨黄芩苷抗流感病毒感染的作用机制。方法采用基因芯片技术研究流感病毒感染细胞后细胞内凋亡信号通路中相关基因转录的变化。同时,采用荧光定量PCR检测各组细胞中天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白-8(caspase-8)和caspase-3的mRNA表达的变化。Western blot法检测各组细胞中的相关蛋白的变化。结果利用基因芯片技术,通过KEGG pathway分析涉及细胞凋亡信号传导途径。与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Casp3、Casp7、Casp8、Casp10、TRAIL、MYD88、IL1A、和IL1B明显上调;与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组对差异表达基因Casp3、Casp4和Casp8明显下调;黄芩苷高剂量组对差异表达基因Casp3、Casp4、Casp6和Casp8明显下调;黄芩苷低剂量组除上述差异表达基因外,还明显下调了IL1RAP和Cn。qRT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组caspase-3和-8的mRNA表达均明显升高。与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组、黄芩苷高低剂量组的caspase-3和-8的mRNA表达均明显降低(P<0.01);并且,黄芩苷低剂量组的治疗效果优于高剂量组;该结果和基因芯片表达的结果基本相符。结论流感病毒体外感染细胞A549后诱导凋亡,黄芩苷能通过调控天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白家族介导凋亡通路的相关基因表达,对病毒感染诱导的细胞凋亡有干预作用,从而发挥抗病毒作用。

负载连翘苷的外泌体递药系统制备及体外评价

目的:制备负载连翘苷(phil)的外泌体(exos)递药系统(phil-exos),并考察其对人肺上皮腺癌细胞A549迁移能力的影响。方法:采用差速-超高速离心法结合超滤法获取小鼠肺泡巨噬细胞(MHS)来源的外泌体,超声法制备phil-exos并测定其粒径及电位,采用透射电子显微镜观察其形态,蛋白质免疫印迹法鉴定标志蛋白CD63和Alix,激光共聚焦显微镜观察A549细胞对phil-exos的摄取,划痕实验考察其对A549细胞迁移能力的影响。结果:phil-exos的平均粒径为(139±1)nm,聚合物分散系数(PDI)为(0.237±0.023),Zeta电位为-(19.33±0.17)mV;外观呈类球状,具有茶托状膜结构;外泌体及phil-exos对Alix高表达,CD63低表达。A549细胞8 h时对phil-exos摄取良好,且24 h时phil的迁移抑制率为46.30%,phil-exos的迁移抑制率为81.99%,phil-exos对A549细胞迁移能力具有效抑制作用。结论:phil-exos制备成功,其可显著降低A549细胞的迁移能力。