人参二醇组皂甙促进缺血再灌注性血清致人肾小管细胞损伤后增殖作用研究

目的:研究人参二醇组皂甙(PDS)促进正常的和缺血再灌注血清致伤后的人肾小管细胞增殖的作用及机制。方法:两肾缺血后再灌注兔血清(缺血血清)与人肾小管细胞共培养96h,测定细胞株吸光度(A)值以判定其增殖活性;生化法测定培养液或肾小管细胞中MDA和NO含量以及SOD、LDH、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力。结果:10 mg/L的PDS组A值高于对照组(P<0.05);缺血血清组A值低于缺血血清加PDS组;缺血血清使培养液中MDA含量、细胞内NO含量和LDH活力升高,使细胞内的SOD、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力降低,而PDS则具有抑制缺血血清效应发挥的作用。结论:PDS可促进正常培养的和缺血血清处理后的人肾小管细胞增殖,减轻缺血血清致人肾小管细胞的损伤,其机制可能同增强SOD活力、减轻氧自由基和NO对细胞的损伤、增强ATP酶活性等作用有关。

马兜铃酸对人肾小管细胞分泌性磷脂酶A_2的影响

目的:研究马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对人肾小管细胞(human kidney cell,HKC)的损伤与分泌性磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,sPLA2)活性的影响。方法:以体外培养的HKC为研究对象,脂多糖(LPS)和氯化钙(CaCl2)为sPLA2激活剂,将实验分为单用AA组和联用激活剂组两大类,用sPLA2活性检测试剂盒检测上清中sPLA2活性改变。结果:10 mg/L AA刺激HKC 24 h后,引起细胞上清sPLA2活性降低(1.154±0.079 vs 1.389±0.123),与正常对照组比较无统计学意义。随着AA剂量的增大,sPLA2活性升高,40 mg/L时高达5.422±0.091(P<0.05),且40 mg/L AA培养组sPLA2活性表现出与时间呈正相关的变化。2LPS和CaCl2剂量正相关地激活HKC sPLA2,该过程可为10 mg/L AA所抑制,呈浓度依赖性。结论:10 mg/L AA可抑制LPS和CaCl2激活HKC sPLA2,呈浓度正相关性。同时,较高浓度AA可损伤HKC激活sPLA2。据此,推测AA损伤HKC的过程中,sPLA2活性达不到损伤程度应有的水平。

IL-1受体拮抗剂对培养人肾小管细胞的影响及机制研究

目的:研究IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)抗肾缺血再灌流性兔血清致培养人肾小管细胞损伤的作用及机制。方法:健康家兔16只,随机分为对照和缺血再灌流(IR)组,IR组作双肾动脉夹闭1小时再灌流2小时;对照组仅模拟实验过程,不夹闭肾动脉。分别提取其血清。肾小管细胞培养分对照组(DMEM+小牛血清);SC组(DMEM+对照兔血清);SIR组(DMEM+IR肾损伤性兔血清);IL-1ra+SIR组(DMEM+IR肾损伤性兔血清+IL-1ra)。培养96小时时,测定其增殖状况和细胞存活率,细胞或培养液中MDA、SOD、NO、LDH、Na^+-K^+-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶。结果:SIR组MDA、NO含量、LDH活力比对照组、SC组高(P<0.05),对照组、SC组和IL-1ra+SIR组间比较差异无显著性;肾小管细胞中的SOD活力,对照组最高,IL-1ra+SIR组次之,SC组又次之,SIR组最低,除IL-1ra+SIR组与SC组外,其余组间差异均有显著性(P<0.05);Na^+K^+-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶的活力在SIR组均较对照组和SC组低,差异有显著性。对照组、SC组和IL-1ra+SIR组间差异无显著性。结论:IL-1ra具有减轻IR性肾损伤兔血清致培养人肾小管细胞损伤的作用。

TNFα诱导人肾小管细胞C3产物上调及雷公藤内酯醇对其作用的影响

近年来,随着分子生物学技术的发展研究发现,除肝脏和巨噬细胞是补体合成的主要来源外,肾脏固有细胞也能表达各种补体成分.并且,随着肾脏病变程度的加重,肾局部补体(特别是C3、C4)mRNA表达和蛋白合成也显著增加,其中以肾小管细胞表现的最为明显,提示肾小管细胞具有免疫炎性活性.肾脏移植免疫技术的应用也发现,移植肾肾功能的下降和排异反应的发生与供肾局部,尤其是肾小管细胞C3的过度产生密切相关.因此,肾局部特别是肾小管细胞在致病因素(如致炎细胞因子)诱导下过度生成并激活的补体在肾损伤中的重要作用已受到了重视,由此补体抑制剂的产生和应用也越来越引起关注.

体外循环再灌注血清对人肾小管上皮细胞的损伤作用

目的通过改良缺血再灌注模型,观察体外循环血清对人肾小管上皮细胞损伤的作用。方法以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,根据是否应用体外循环血清将细胞分为空白组:不含人血清的培养基;对照组:含正常人血清的培养基;实验组:含体外循环血清的培养基,进行缺氧复氧培养。通过流式细胞仪检测肾小管细胞凋亡情况,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达。结果实验组凋亡率及Caspase-3均高于对照组及空白组(P<0.05);空白组和对照组凋亡率及Caspase-3表达差异无统计学意义。结论体外循环血清可诱导HK-2细胞凋亡,其机制可能与激活胞内Caspase-3有关。

枸杞多糖对H2O2诱导的肾小管细胞损伤的保护作用

目的人肾小管细胞株HK-2在过氧化氢(H2O2)的作用下发生损伤,分析加入枸杞多糖(LBP)后其损伤的变化和作用机制。方法将HK-2细胞随机分成4组,每组设6个重复孔,采用不同的方法进行孵育。正常组:培养液;H2O2组:浓度为0.10 mmol/L H2O2的培养液;LBP组:浓度为100μg/mL LBP的培养液;LBP+H2O2组:提前加入LBP孵育1 h后再加入H2O2继续孵育30 min。倒置显微镜下观察每组细胞的形态变化;流式细胞仪测定每组细胞的凋亡率;测定各组细胞中丙二醛(MDA)的量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果H2O2组:与正常组比较,细胞的形态变圆,贴壁减少,细胞的凋亡率上升[(52.44±1.90)%],LBP组和正常组差异无统计学意义(P>0.05),MDA水平增加[(8.95±0.21)μmol/L]而SOD活性减少[(2.26±0.27)KU/g Pro],差异均有统计学意义(均P<0.05);LBP+H2O2组:与H2O2组比较,细胞的形态和贴壁量多均有所恢复,细胞凋亡率显著下降[(33.96±1.53)%],MDA水平减少[(4.95±0.21)μmol/L],SOD活性增加[(3.53±0.31)KU/g Pro],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论人肾小管细胞在H2O2的作用下发生凋亡,LBP能减少其凋亡率,这与LBP增加细胞中SOD的活性而减少MDA含量密切相关。