葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞内钙离子浓度动态变化及其信号传导途径的研究

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)内钙离子(Ca2+)浓度的动态变化及其信号转导途径。方法:在葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(Hypericin)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(Genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME),利用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察HK-2细胞内[Ca2+]动态变化。结果:LSCM下观察发现,150mmol/L葡萄糖可引起HK-2细胞内[Ca2+]增高。150mmol/L葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入10-4mmol/LHypericin、10-6mmol/LApopain、10-7mmol/LGenistein、10-2mmol/LNAME可抑制葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高。结论:葡萄糖作用于HK-2细胞,可引起细胞内[Ca2+]增高;蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)均参与了葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高的信号传导过程。

葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞凋亡信号传导途径的研究

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)凋亡的信号传导途径。方法:利用葡萄糖诱导细胞凋亡:将不同浓度葡萄糖作用于HK-2细胞不同时间,并经透射电镜观察、流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞。采用抑制剂拮抗葡萄糖诱导凋亡:分别将不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(hypericin)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)抑制剂(apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME)作用于HK-2细胞30min,再加50mmol/L葡萄糖作用48h,后行FCM检测HK-2细胞凋亡情况。结果:50mmol/L葡萄糖作用48h可诱导HK-2细胞发生凋亡,并可通过透射电镜观察到凋亡小体,而FCM检测发现10-4mmol/Lhypericin、10-4mmol/L和10-6mmol/Lapopain、10-7mmol/Lgenistein、10-2mmol/LNAME可明显抑制葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡。结论:蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)都参与了葡萄糖诱导HK-2细胞凋亡的信号传导过程。

近端肾小管上皮细胞代谢重编程在急性肾损伤中的研究进展

肾脏是一个高代谢器官,尤其是近端肾小管上皮细胞,在生理情况下主要依赖脂肪酸氧化供能,但是在急性肾损伤(AKI)期间,线粒体和过氧化物酶体功能障碍,近端肾小管上皮细胞发生代谢重编程,能量供应转向糖酵解,生成乳酸,并伴脂肪酸氧化紊乱及糖异生受损,短期内代谢重编程可能是对肾脏有益的能量代偿,但是该过程中也会加重肾损伤。本文就近端肾小管上皮细胞代谢重编程在AKI中的作用进行综述。

大黄不同炮制品和煎煮时间对TGF-β1诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞中E-cadherin和α-SMA浓度的影响

目的探讨不同大黄炮制品干预人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)的作用差异及筛选最佳的煎煮时间点。方法取生大黄、熟大黄、酒大黄、大黄炭饮片各350 g,均分为7份。每份药物分别煎煮5、7、9、10、15、20、30 min,最终制备浓度约1000 g/L药液。将145只大鼠随机分为生大黄组、熟大黄组、酒大黄组、大黄炭组,各组又分为5、7、9、10、15、20、30 min时间点的亚组,每个亚组5只,另设对照组5只。将各药物组大鼠分别给予相应的大黄煎剂以1.35 g/(kg·d)的剂量灌胃,对照组大鼠给予0.9%氯化钠2 ml灌胃,每日2次,第6日灌胃后制备含药血清。用大黄不同炮制品不同煎煮时间的含药血清干预经转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的HK-2细胞24 h,检测各组HK-2细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的浓度。结果α-SMA浓度最低的分别为生大黄10 min亚组(52.086 ng/ml)、熟大黄10 min亚组(44.596 ng/ml)、酒大黄9 min亚组(49.768 ng/ml)、大黄炭9 min亚组(58.470 ng/ml)。E-cadherin浓度最高的分别为生大黄10 min亚组(1.017 ng/ml)、熟大黄10 min亚组(1.325 ng/ml)、酒大黄9 min亚组(1.163 ng/ml)、大黄炭9 min亚组(0.787 ng/ml)。与大黄炭组比较,其余3组α-SMA浓度降低,E-cadherin浓度升高(P<0.05或P<0.01)。与熟大黄组比较,生大黄组和酒大黄组α-SMA浓度升高,E-cadherin浓度降低(P<0.05或P<0.01)。酒大黄组与生大黄组比较,α-SMA和E-cadherin浓度差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论大黄的四种炮制品均能有效抑制经TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间充质转化,其作用效果由强到弱依次均为熟大黄、酒大黄、生大黄、大黄炭,生大黄和熟大黄最佳煎煮时间为10 min,酒大黄和大黄炭最佳煎煮时间为9 min。

人重组骨形态发生蛋白7通过下调半胱氨酸蛋白酶-1/焦孔素D信号通路抑制高糖诱导的近曲小管上皮细胞的焦亡

目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞模拟糖尿病肾病模型。分为正常浓度葡萄糖对照组(Control)、高浓度葡萄糖组(HG)、Control+rhBMP-7组、HG+rhBMP-7组。采用免疫荧光方法检测HK-2细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SAM)、焦孔素D(gasderminD, GSDMD)蛋白和焦孔素E(gasderminE, GSDME)蛋白;TUNEL染色检测细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组HK-2细胞中焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶-4(caspase-4)、半胱氨酸蛋白酶-5(caspase-5)、 N-GSDMD和GAPDH的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组HK-2细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 与Control组相比,高糖组HK-2细胞Tunel染色的阳性率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1),α-SMA蛋白和α-SMA mRNA表达量也显著增加(P<0.000 1),E-cadherin蛋白和Ecadherin mRNA表达量显著下降(P=0.000 6,P<0.000 1);HG组添加rhBMP-7后α-SMA蛋白和m RNA水平显著下降(P=0.011 7, P=0.002), E-cadherin蛋白和m RNA水平明显升高(P=0.001 5,P<0.000 1)。与对照组比较,HG组HK-2细胞GSDME/GSDMD蛋白的荧光信号明显增强。进而,HG组添加rhBMP-7后GSDME/GSDMD蛋白荧光信号显著减弱。同样,HG组HK-2细胞中焦亡相关蛋白caspase-1、caspase-4、caspase-5以及GSDMD的表达量显著高于对照组,差异明显(均P<0.001)。HG组添加rhBMP-7后焦亡相关蛋白的表达明显下降(分别P<0.001,P=0.002,P<0.001)。与对照组比较,HG组HK-2细胞培养上清液中IL-1β和IL-18蛋白浓度显著增加(均P<0.001)。进而导致rhBMP-7干预后HG组细胞上清液中IL-10和IL-1β蛋白浓度明显减少(P<0.001)。结论 rhBMP-7具有抑制HK-2细胞焦亡的作用,其通过调控caspase-1/GSDMD信号通路减缓高糖诱导的HK-2细胞焦亡。

氨磷汀通过上调PKM2表达增强肾近端小管上皮细胞抵抗顺铂毒性

目的探究氨磷汀缓解顺铂肾毒性的分子机制。方法在肾近端小管上皮细胞系HK-2及原代细胞中,采用CCK-8细胞活性实验检测氨磷汀对顺铂细胞毒性的抑制作用。通过在线数据库tabula-muris分析肾脏组织各细胞亚群PKM2的表达。通过流式细胞术检测细胞凋亡比例。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测细胞中PKM2基因表达。通过小RNA干扰技术敲低细胞中PKM2基因表达。结果氨磷汀显著增强HK-2细胞和原代肾近端小管上皮细胞抵抗顺铂的毒性。在顺铂处理的细胞中,随着氨磷汀浓度的增加,细胞的活力从0.37增加到0.45至0.77(P<0.001)。另外,随着氨磷汀浓度的增加,HK-2细胞中PKM2基因表达依次增加,在1μmol/L浓度时增加到8.76倍(P<0.001)。在HK-2细胞中干扰PKM2基因表达,氨磷汀对顺铂的细胞毒性的保护作用显著受到抑制。顺铂诱导的细胞凋亡比例、标志蛋白Cleaved-PARP和Cleaved-caspase3的表达被氨磷汀显著抑制。单细胞数据分析的结果表明,相对于肾脏组织其他细胞亚群,PKM2在肾近端小管上皮细胞中表达最低。结论氨磷汀通过上调肾近端小管上皮细胞PKM2的表达抑制顺铂诱导的细胞凋亡,从而缓解顺铂的细胞毒性。

新生猪肾近曲小管上皮细胞的体外培养与鉴定

目的 分离新生猪肾小管上皮细胞进行体外培养 ,为研究围生期肾小管上皮细胞生物学行为特征提供理论基础。方法 采用机械分散结合 型胶原酶 (0 .5 g/ L)消化的方法纯化肾小管片段 ,选择含 10 %的 FCS低糖DMEM培养基 ,置于 5 %CO2 ,37℃孵箱培养。 0 .2 5 %胰蛋白酶用于肾小管上皮细胞纯化和传代培养。应用细胞形态学 (光镜和电镜 )、免疫细胞化学 (Pan CK和 CK18单抗 )和酶组织化学 (酸性磷酸酶和碱性磷酸酶 )方法进行肾近曲小管上皮细胞鉴定 ;用流式细胞术做细胞纯度鉴定。结果 出生 12～ 2 4小时的新生猪肾小球直径为 5 0～ 70 μm,出生5～ 6天的肾小球直径为 70～ 98μm。新生猪肾近曲小管上皮细胞体外培养对葡萄糖的需求量不高。培养成功并传 6～8代 ,肾小管上皮细胞纯度达 95 %～ 98%。综合形态学、免疫细胞化学和酶组织化学结果 ,支持细胞来源于肾单位的近曲小管。结论 采用机械分散 -酶消化纯化肾小管 ,0 .2 5 %胰蛋白酶纯化肾小管上皮细胞及低糖 DMEM培养新生猪肾近曲小管的方法是可行的。

乙酰唑胺对大鼠肾脏近曲小管上皮细胞作用的差异蛋白分析及其与AQP1抑制的关系

目的 研究乙酰唑胺抑制大鼠肾脏近曲小管上皮细胞水孔蛋白 1(aquaporin 1,AQP1)表达的内源性机制。方法 将原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞分为两组 ,一组给予 1× 10 - 5mol·L- 1 乙酰唑胺 ,另一组为阴性对照。待细胞长至亚融合状态时裂解细胞 ,用等电聚焦电泳对裂解物进行差异蛋白筛选 ,并对差异蛋白作肽质量指纹谱鉴定。结果 给乙酰唑胺后细胞中出现两个差异蛋白 ,其中等电点 (pI)为 3 8的蛋白给药后的表达减少 ,数据库检索发现其氨基酸序列与来源于大鼠肝脏和睾丸的刷状缘肌球蛋白有 2 1 4 %的相似性 ;而与来源于大鼠脑的糖原磷酸化酶有 2 7%相似性。另外一条pI为 5 5的蛋白被诱导增多 ,它与来源于大鼠肺脏的α亚型磷脂酰肌醇转移蛋白的相似性为 2 0 %。结论 乙酰唑胺可能通过影响pI 3 8蛋白或pI5

葛根素对人肾近曲小管上皮细胞ABCG2表达影响

目的探讨葛根素(Pur)对人肾近曲小管上皮细胞(HK2)内三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ABCG2)基因与蛋白表达的影响,阐明葛根素治疗痛风的可能机制。方法体外培养HK2细胞,分为对照组与25、50、100、200 mg/L葛根素给药组。CCK-8法检测葛根素对HK2细胞的影响;检测ALP活性,观察HK2细胞内酶促反应状态;荧光定量PCR法、Western blotting法检测对照组与给药组HK2细胞内ABCG2基因蛋白表达。结果葛根素对HK2细胞有促进增殖作用(P<0.05);100 mg/L葛根素组ALP活性最佳(P<0.01)。荧光定量PCR和Western blotting法检测结果显示,葛根素组HK2细胞内ABCG2基因及蛋白表达明显高于对照组,其中100 mg/L葛根素组HK2细胞内ABCG2最为明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论葛根素能够增加HK2细胞内ABCG2基因蛋白的表达,这可能是葛根素调节痛风患者血尿酸水平的重要分子机制之一。

大鼠肾缺血与再灌时近曲小管上皮细胞内钙含量变化

本实验采用细胞化学方法结合EDX微区分析及生化测试方法，从细胞水平研究了大鼠肾近曲小管上皮细胞内钙含量在缺血-再灌流损伤过程中的改变情况，并探讨了其机理。结果表明：缺血1h，可致细胞内钙含量增高，质膜Ca2+-ATPase活性下降；膜通透性无明显变化。再灌流期，细胞内钙含量持续增高；质膜Ca2+－ATPase活性在再灌流早期（2～4h）基本恢复至正常，在再灌流晚期（12～24h）下降；再灌流期膜通透性逐渐增大。肾小管上皮细胞内钙含量增加在缺血期、再灌流早期及晚期某机制并不相同。

多巴胺D3受体对肾脏近曲小管上皮细胞D5受体的影响在高血压发生中的作用

目的观察多巴胺 D_3受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞上多巴胺 D_3受体表达和功能的影响。方法以 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠与自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,利用免疫印迹法观察 D_3受体对 D_5受体蛋白表达的影响;并采用 Na^+-K^+-ATP 酶活性测定方法在转染 D_5受体的人胚肾293细胞(HEK293-D_5)上观察D_3受体对 D_5受体影响的病理生理学意义。结果刺激 D_3受体可增强 D_5受体的蛋白表达,该作用呈浓度和时间依赖性;同时能被 D_3受体特异性阻断剂所阻断;在高血压状态下,这种作用受损。刺激 D_5受体可抑制 Na^+-K^+-ATP 酶的活性,在预先刺激 D_3受体的情况下可使 D_5受体对 Na^+-K^+-ATP 酶活性的抑制作用进一步增强。结论D_3受体对肾脏近曲小管上皮细胞上 D_5受体的表达和功能具有促进作用,这种作用的受损可能在原发性高血压的发生发展中具有一定影响。

内皮素B受体对肾近曲小管上皮细胞Na^+-K^+-ATP酶活性的影响

目的探讨内皮素B(ETB)受体对肾脏近曲小管(RPT)上皮细胞Na+-K+-ATP酶活性的影响和机制。方法以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠RPT细胞为研究对象,Na+-K+-ATP酶活性采用哇巴因法进行测定。结果ETB受体激动剂BQ3020能明显降低Na+-K+-ATP酶的活性,这一抑制作用呈浓度和时间依赖性,BQ302010-8mol/L刺激15min达最大效应,下降幅度达36.1%;用细胞膜钙通道阻断剂尼卡地平预先刺激细胞后,能够阻断ETB受体对Na+-K+-ATP酶的抑制效应;在无钙状态下,ETB受体激动剂BQ3020对Na+-K+-ATP酶的抑制效应丧失。结论ETB受体在RPT处通过降低Na+-K+-ATP酶活性调节离子转运;细胞外钙内流参与了ETB受体对Na+-K+-ATP酶活性抑制作用的信号途径。

内皮素B受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺D3受体的异常调节

目的探讨内皮素 B(ETB)受体对肾脏近曲小管上皮细胞多巴胺 D_3受体表达的影响,以及其与高血压(EH)发生之间的关系。方法以 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮细胞(RPT)株为研究对象,观察刺激 ETB 受体后 D_3受体蛋白表达的变化,D_3受体的蛋白表达采用免疫印迹测定,ETB/D_3受体之间的连接采用免疫沉淀测定。结果 ETB 受体激动剂 BQ3020可增加 WKY 大鼠 RPT 细胞 D_3受体的蛋白表达,该作用呈现出时间依赖性和剂量依赖性关系,而且 BQ3020对 D_3受体蛋白表达的刺激作用可以被D_3受体拮抗剂 BQ788所抑制。在 SHR 细胞,ETB 受体激动剂 BQ3020并不能增加 RPT 细胞 D_3受体的蛋白表达,并且基础状态下 D_3受体的蛋白表达在 SHR 细胞明显低于 WKY 细胞。免疫共沉淀显示在 ETB/D_3受体之间存在同连接,刺激 ETB 受体可增加 ETB/D_3受体之间的连接程度,然而,在 SHR 细胞,不仅基础状态下 ETB/D_3受体之间的连接程度低,而且,刺激 ETB 受体对 ETB/D_3受体之间的连接程度无影响。结论 ETB 受体具有对 D_3受体蛋白表达的调节作用,ETB/D_3受体之间的异常调节可能参与了 EH 发生的发病机制。

丹参酮ⅡA对脂多糖诱导人肾皮质近曲小管损伤的影响研究

目的:探究丹参酮ⅡA对人肾皮质近曲小管细胞活力及炎症的影响。方法:通过脂多糖诱导建立人肾皮质近曲小管细胞系(HK-2)炎症损伤模型,并给予丹参酮ⅡA干预;通过形态学观察、CCK8实验评估丹参酮ⅡA对HK-2细胞活力的影响,通过实时荧光定量PCR实验检测细胞炎症因子TNF-α及IL-1β的表达水平,以评价丹参酮ⅡA对HK-2炎症的影响。结果:给予脂多糖干预会导致HK-2出现异常增殖及形态异常,在4μg/mL浓度时其细胞增殖率达到最高。10、20、40、80μM的丹参酮ⅡA会导致HK-2的增殖率显著下降,并在一定程度上改善其细胞形态。20、40、80μM的丹参酮ⅡA可抑制脂多糖诱导的细胞异常增殖及炎症因子TNF-α和IL-1β的表达。结论:丹参酮ⅡA能改善人肾皮质近曲小管的异常增殖及炎症损伤。

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白诱导的人肾近曲小管上皮细胞转分化的作用及机制研究

目的研究普罗布考对氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，Ox-LDL）诱导的人肾近曲小管上皮细胞HK-2转分化的保护作用，并探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1（lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1，LOX-1）及氧化应激在其中的作用和相互关系。方法采用不同浓度Ox-LDL（0-100ug／ml）孵育HK-2细胞，并予普罗布考（20umol／L）和LOX-1抑制剂多聚肌苷酸（250ug／m1）干预。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞增殖情况，用DCFH—DA法检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）活性，生化比色法检测一氧化氮（nitric oxide，N0）浓度，Western blot检测E-钙粘素（cadherin）、a平滑肌动蛋白（a-smooth muscle actin，a-SMA）、LOX-1、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide 2＇-phosphate reduced tetrasodium salt，NADPH）氧化酶4（NOX4）表达。结果12．5～200ug／ml浓度范围内的Ox-LDL对HK-2细胞的增殖无明显影响，25-100ug／ml的Ox-LDL以浓度依赖方式促进HK-2细胞LOX-1、a-SMA蛋白表达上升，E-cadherin下降。而多聚肌苷酸、普罗布考能使LOX-1、a-SMA蛋白表达抑制，E-cadherin表达上调。50ug／ml的Ox-LDL能促进NOX4表达上调，ROS活性增加（451．5ug／ml kg839．8ug／ml，P〈0．05），NO含量略增加（46．0umol／L比46．2umol／L），但无统计学意义（P〉0．05）。而多聚肌苷酸、普罗布考能使NOX4表达下调，ROS活性下降，但对NO浓度无明显影响。结论Ox-LDL可诱导HK-2细胞转分化，其机制可能与其结合LOX-1促进氧化应激有关，而普罗布考可以通过降低LOX-1，抑制氧化应激损伤，从而延缓HK-2细胞转分化的进程。

中毒性急性肾衰早期肾近曲小管上皮细胞细胞骨架的改变

目的 :了解中毒性急性肾衰 (ARF)早期肾近曲小管上皮细胞 (PTC)细胞骨架微丝和微管的改变 ,并探讨其改变的机制。方法 :采用皮下注射氯化汞建立中毒性ARF模型 ,用免疫组化和电镜法观察中毒 6h和 12hPTC细胞骨架微丝和微管的改变 ,并用高效液相色谱法测试细胞内ATP水平。结果 :免疫组化显示微丝随着中毒时间的延长 ,PTC刷状缘损伤逐渐加重 ,胞浆内有片状肌动蛋白分布 ;电镜示中毒 6h微绒毛变成球形小体 ,中毒 12h微绒毛部分缺失 ;免疫组化微管示中毒 6hPTC严重受损 ,着色变浅、不规则 ,中毒 12h着色部分恢复 ;细胞内ATP水平随着中毒时间延长而逐渐下降。结论 :中毒性ARF时 ,PTC细胞骨架微丝和微管发生变化 ,微丝的改变可能与细胞内ATP水平相关。

AT2受体对自发性高血压大鼠肾脏近曲小管上皮细胞AT1受体表达与功能的影响

目的研究AT2受体激动剂CGP42112对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏近曲小管上皮(RPT)细胞AT1受体的表达及功能的影响。方法以RPT细胞株作为研究对象,采用不同浓度AT2受体激动剂CGP42112(10-9～10-7 mol/L)作用24h或同一浓度CGP42112(10-7 mol/L)作用不同时间(8、16、24h),应用Western blotting和RT-PCR法检测AT1受体蛋白和mRNA表达的改变。采用CGP42112(10-7 mol/L)预先作用24h,观察其对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下Na+-K+-ATP酶活性的影响;比较CGP42112(10-7mol/L)作用30min与作用24h后洗脱2h,Na+-K+-ATP酶活性的差异。结果 CGP42112作用于AT2受体后可明显抑制RPT细胞AT1受体蛋白的表达,且呈现一定的浓度与时间依赖性。CGP42112(10-7 mol/L)能够抑制AT1受体mRNA的表达水平。与AngⅡ单独作用比较,CGP42112(10-7 mol/L)预处理24h可使AngⅡ(10-11 mol/L)增强Na+-K+-ATP酶活性的效应明显降低。CGP42112(10-7 mol/L)作用30min后,Na+-K+-ATP酶活性显著降低;但作用24h洗脱后2h,Na+-K+-ATP酶活性与对照组比较无明显差异。结论 AT2受体能够抑制SHR大鼠RPT细胞AT1受体的表达及其介导的Na+-K+-ATP酶活性增强的效应。

苯对小鼠肾近曲小管上皮细胞影响的电镜观察

观察暴露于含苯环境中的小鼠肾近曲小管上皮细胞的超微结构,用体视学方法对线粒体、溶酶体进行Vv、、Nv的计量分析。结果表明实验组线粒体、溶酶体均有不同程度的损伤。计量结果与形态观察结果一致,说明苯对肾近曲小管上皮细胞有损伤。

血必净对百草枯诱导人肾近曲小管上皮细胞-2氧化应激和炎症水平的影响

目的观察血必净注射液对百草枯诱导的人肾近曲小管上皮细胞-2(HK-2)氧化应激和炎症水平的影响。方法常规培养HK-2细胞,按随机数字表法分为空白对照组、百草枯中毒模型组、血必净预处理组、血必净对照组。采用高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内百草枯含量;采用化学比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)水平。结果随时间延长,百草枯中毒模型组和血必净预处理组HK-2细胞内百草枯含量逐渐升高,作用48 h达峰值,且血必净预处理组HK-2细胞内百草枯含量较百草枯中毒模型组明显降低(mg/L :4.26±0.20比5.77±0.18, P<0.05)。与空白对照组比较,百草枯中毒模型组MDA.TNF-a和IL-6含量明显升高[MDA(nmo<mg): 4.47±0.10 比 2.21 ±0.08, TNF-a (ng/L): 206.91 ± 13.22 比 98.14±5.67), IL-6(ng/L):253.33±5.22 比 116.97± 13.54,均 P<0.05〕,SOD 活性明显降低(U/mg : 33.30±0.62 比 41.58±0.17, P<0.05)。与百草枯中毒模型组比较,血必净预处理组HK-2细胞内MDA、TNF- a和IL-6含量明显降低〔MDA(nmol/mg):2.92 ±0.17 比 4.47 ±0.10, TNF-a (ng/L): 166.29 ±15.47 比 206.91 ± 13.22, IL-6 (ng/L ): 209.39 ±3.18 比253.33 ±5.22,均 P<0.05〕,SOD 活性明显升高(U/mg : 38.10±0.67 比 33.30±0.62, P<0.05)。结论血必净可降低HK-2细胞内百草枯含量以及细胞氧化应激和炎症因子水平。