大鼠胸主动脉腹腔移植模型的技术改良

目的 为了使血管吻合方法更简单 ,移植血管缺血时间更短 ,以避免吻合口出血和狭窄。 方法 纯系SD大鼠 40只 ,均为雄性。体重 130～ 15 0 g为供者 ,体重 2 5 0～ 35 0 g为受者。利用 Teflon管 (外径 1.7mm,内径 1.5 mm,长度 3mm )将移植的胸主动脉两端外翻固定。将肾动脉和腰升动脉间的腹主动脉游离、阻断 ,分别于肾动脉下方和腰升动脉上方剪开其管径的 1/3,插入套管结扎 ,并将牵引线与套管缝合固定 ,然后切断两吻合口间的腹主动脉。 结果手术成功率 90 % ,术后 1个月移植血管通畅率为 10 0 % ,吻合口未发生内膜增生。 结论 此方法简化了血管吻合技术 ,避免了原模型的并发症。

大鼠腹腔心脏异位移植模型的改进

目的改进传统大鼠腹腔心脏异位移植模型,提高成功率。方法完全摘取供体心肺,离体供心灌注停跳;在松弛的状态下结扎静脉系统,端侧吻合采取间断+连续的缝合方法;先开放远心端再开放近心端,同时按摩心脏。结果传统方法组(n=20)成功14只,动脉吻合口出血2只、心脏复跳失败2只、吻合口狭窄2只;改进方法组(n=20)成功18只,2只死于吻合口出血。传统方法组手术成功率为70%,改进方法组为90%(P>0.05)。结论①快速摘取心肺,离体心脏灌注保护,操作简单,热缺血时间短,效果肯定,对供心的保护效果好。②松弛的状态下结扎静脉系统,对心房、冠脉影响非常小。③采取间断+连续的缝合方法,因吻合口狭窄造成手术失败的可能性很低,④合理定位,避免吻合完毕供心动脉扭曲,从而影响复跳。⑤注意受体鼠的保温、消毒及血容量丧失非常关键。⑥利用心外膜起搏导线获得了供心的动态心电图。

裸小鼠人胃癌原位移植模型的浸润转移特征

目的;建立裸小鼠人胃癌原位移植模型并观察其浸润转移特征。方法:BALB/C—nu/nu裸小鼠12只,以SGC-7901人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤为材料,通过手术将瘤组织块移植到裸小鼠胃壁,待动物自然濒临死亡时进行系统解剖。结果:原位移植瘤全部成功,且所有动物均出现局部浸润及淋巴结转移,肝脏转移率为66.7％,50％的荷瘤鼠发生腹水,肿瘤晚期与周围脏器发生粘连,荷瘤鼠死于全身衰竭,中位数生存期为18周。结论:裸小鼠人胃癌原位模型的浸润转移特性接近临床病人,是研究人胃癌浸润转移的理想手段。

消水散对人胃癌小鼠腹膜移植模型B7/CD28/CTLA-4协同刺激通路及腹水微环境的影响

目的 研究消水散对人胃癌小鼠腹膜移植模型B7/CD28/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)协同刺激通路及腹水微环境的影响。方法 2019年4月至2020年5月,在湖南省中医药研究院动物中心实验室,采用腹腔注射人胃癌细胞MGC803建立人胃癌小鼠腹膜移植模型,共分为模型组、消水散低、中、高剂量组,另取正常小鼠为对照组,每组10只。通过行为学观察及测定血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)含量评估模型质量,影像学方法评估恶性腹水情况,流式细胞仪及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测B7-1、B7-2、CD28及CTLA-4表达量及其mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腹膜组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果 正常小鼠的阳虚症状积分为(0.00±0.00)分,血清ACTH水平为(103.46±10.13)ng/L、CORT水平为(81.34±9.21)μg/L、T3含量为(178.52±15.86)ng/L、T4含量为(213.59±16.97)μg/L和TSH含量为(10.84±1.15)mIU/mL。与对照组相比,模型小鼠阳虚症状积分[(7.84±1.59)分]显著增加(P<0.05),血清ACTH[(71.09±6.42)ng/L]、CORT[(43.42±7.14)μg/L]、T3[(103.77±13.24)ng/L]、T4[(127.64±13.25)μg/L]、TSH含量[(8.14±1.02)mIU/mL]显著降低(P<0.05)。模型组小鼠的腹水量为(5.18±0.46)mL、瘤体积为(1.23±0.12)cm3、瘤重为(1.73±0.15)g、B7-1 mRNA水平为(1.06±0.10)、B7-2 mRNA水平为(1.04±0.11)、CD28 mRNA水平为(0.97±0.08)、CTLA-4 mRNA水平为(1.03±0.09)、TGF-β1含量为[(181.73±15.26)pg/g]和IL-10水平为[(68.74±6.03)pg/g]。与模型组相比,消水散低、中、高剂量组小鼠的腹水量[(4.03±0.41)、(3.24±0.25)、(2.33±0.27)mL]、瘤体积[(0.93±0.09)、(0.49±0.05)、(0.16±0.02)cm3]、瘤重[(1.42±0.13)、(0.79±0.11)、(0.27±0.08)g]、CTLA-4 mRNA水平[(0.83±0.07)、(0.42±0.05)、(0.16±0.02)]、TGF-β1[(152.69±12.39)、(131.45±11.68)、(107.26±10.52)pg/g]、IL-10[(51.65±5.38)、(34.28±2.73)、(27.13±2.64)pg/g]表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05),B7-1[(2.13±0.22)、(4.56±0.51)、(7.29±0.68)]、B7-2[(1.95±0.14)、(4.32±0.41)、(6.83±0.63)]、CD28[(2.02±0.15)、(3.94±0.28)、(7.11±0.84)]mRNA水平逐渐增加(P<0.05)。结论 消水散可抗人胃癌移植瘤恶性腹水作用,可能与抑制CTLA-4表达,促进T细胞激活,改善机体免疫抑制及腹腔免疫微环境有关。

直视下袖套法加套入式吻合大鼠全血供肝移植模型建立

目的 直视下应用套入式吻合方法重建大鼠移植肝的动脉血供。 方法 SD- SD大鼠肝移植30只,SD- Wistar大鼠肝移植5 0只。供体从腹腔干动脉开始分别结扎脾动脉、胃左动脉、胃右动脉及胃十二指肠动脉,保留肝固有动脉。以8- 0无损伤缝线作袖套法加套入式方法行供体的腹腔干动脉和受体的右肾动脉吻合,恢复移植肝动脉血供。 结果 无肝期最短13min,最长2 1min。套入式吻合肝动脉时间平均4 .0 0±1.31min;手术成功率96 .3% ;SD- SD大鼠成功2 9只,术后不使用免疫抑制剂均健康存活,最长目前已超过2个月。SD- Wistar大鼠成功4 8只,一般术后3～5 d出现急性排斥反应,不用免疫抑制剂于9d后死于排斥反应所致的肝功能衰竭。 结论 直视下袖套法加套入式吻合方法重建大鼠移植肝的动脉血供是一种稳定。

大鼠双供体肝移植模型的改进

目的建立改良的大鼠双供体肝移植模型。方法在经典供体Y型双髂静脉再通双侧肝移植物和受体门静脉和胆管的基础上,通过增加大鼠体质量、右侧移植物增加右下叶、适度的胆管长度、修剪Y型血管、“三角形法”吻合的方法,改进大鼠双供体肝移植模型。记录双供体肝移植手术时间、冷缺血时间、热缺血时间及无肝期;观察受体的术后并发症发生情况;分析受体术后7、30 d的存活情况。结果大鼠双供体肝移植的手术时间为(114±7)min,冷缺血时间为(36±3)min,热缺血时间为(9.7±1.6)min,无肝期为(19.9±2.2)min。受体大鼠术后并发症发生率为31%(5/16),包括2例腹腔积液、1例出血、1例胆漏、1例呼吸梗阻。受体大鼠术后7、30 d生存率分别为81%(13/16)、56%(9/16)。结论改良后的大鼠双供体肝移植技术,可以建立稳定的大鼠双供体肝移植模型,值得推广应用。

建立Lee氏大鼠异位心肺联合移植模型的几点改进

目的:建立并改进Lee氏异位心肺联合移植模型。方法:以Lee氏腹腔异位心肺联合移植模型为基础,在受体血管的切口、吻合方法及术后补液几方面加以改进。结果:通过改进,简化了手术过程,提高了手术的效率。正式实验80次,成功率为86.3%,整个手术过程为(64.5±2.0)min。结论:改进的方法稳定可靠,提高了手术的成功率。

建立大鼠Ono氏心脏异位移植模型的几点改进

目的:建立并改进O no氏异位心脏移植模型。方法:以O no氏腹腔异位心脏移植模型为基础,在受体血管的切口、吻合方法及术后补液几方面加以改进。结果:通过改进,简化了手术过程,提高了手术有效率。正式实验51次,成功率为84.3%,整个手术过程为(87.5±3.0)m in。结论:改进的方法稳定可靠,提高了手术的成功率。

灯盏花提取物对心脏移植异基因大鼠蛋白激酶C的作用

目的:利用异基因大鼠心脏移植模型研究中药灯盏花提取物对蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的抑制作用。方法:以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型,分为灯盏花提取物低剂量组(5mg·kg-·1d-1)、中剂量组(10mg·kg-·1d-1)、高剂量组(15mg·kg-·1d-1)和对照组。移植术后各实验组受体腹腔注射药物至移植心停跳。用底物磷酸化激酶测定法检测受体外周血淋巴细胞PKC的活性并用Westernblot印迹法鉴定;用酶联免疫吸附法检测受体外周血液中白细胞介素-2(IL-2)的水平。结果:各实验组受体外周血淋巴细胞PKC活性及表达和IL-2的水平明显较对照组低。结论:在异基因大鼠心脏移植中灯盏花提取物可对PKC的活性产生抑制作用。

NM-3诱导裸鼠体内人胃癌细胞的凋亡机理

目的:探讨新的血管生长抑制剂NM- 3对体内人胃癌细胞凋亡的作用。方法:建立人胃腺癌裸鼠皮下异体移植模型。移植后第1周开始腹腔注射NM- 3,1周3次,剂量为10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg,分别联合卡铂5mg/kg,1周2次;并与生理盐水对照组,NM -3或卡铂单独治疗比较(应用NM 3 5 周,卡铂3 周)。移植后第7 周处死裸鼠,测量肿瘤大小,计算抑瘤率,FCM法分析肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果:单用NM- 3剂量分别为10mg/kg、20mg/kg及40mg/kg时,肿瘤的平均重量分别为1220±116.85mg、1041±143.51mg和767.5±140.11 mg,显著低于生理盐水对照组的肿瘤平均重量1754±144.18mg(P<0.05)。单用卡铂组的抑瘤率为5.6%,对人胃癌没有明显抑制作用。当单用NM 3 剂量10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg时,抑瘤率分别为30.4%、40.6%、56.2%,相对于对照组有明显的抑瘤作用(P<0.05),而且显著高于卡铂组抑瘤率5.6%。NM 3 3个剂量组联合卡铂治疗的AI分别是:5.66%±0.65%、8.98%±1.43%、21.66%±2.96%;生理盐水对照组为1.37±0.19%,卡铂组为1.85±0.22%。结论:NM 3能诱导体内人胃癌细胞的凋亡,抑制胃癌的生长。

胃癌实验动物模型构建研究简况

胃癌动物模型可模拟胃癌在人体的发生与发展,建立合理、有效的动物模型是中医药实验及临床研究的重要前提。可用于构建胃癌模型的动物有非人灵长类动物,犬、兔子、大鼠、小鼠、裸鼠等,考虑到成本、诱发率、饲养等,大鼠、小鼠、裸鼠较为常用。(1)自发型胃癌很少发生在实验动物体内,获得比较困难,不适合大批量、短期实验。基因工程转染模型造价相对昂贵,多为单个基因突变,与临床多个基因互相作用发生胃癌距离较大,实际应用有一定限制;长期诱发型常用诱导剂有MNNG、Hp等,可单独亦可联合应用。(2)单因素法操作较为简单,构建喂食途径,成模持续时间较长、诱导癌变率不甚理想,包括给药物浓度、给药方式及时间等对成瘤率也都有很大影响。(3)多因素法选用多个胃癌相关因素对动物联合攻击复制胃癌模型,较单因素法周期短,且癌发率较高,诱导过程中动物意外死亡率亦高。(4)原位移植能最大程度地模仿人胃癌发生发展,涉及手术开腹并在胃部移植肿瘤,增加造模难度,需操作者注意很多细节,不严格无菌操作、术中技术不熟练及术后感染等易导致实验动物死亡。(5)胃癌腹膜种植播散模型对研究胃癌腹膜播散及转移机制具有重要价值,可用于模拟晚期胃癌癌细胞腹腔内转移。(6)皮下移植操作简单、观察方便,是异位移植胃癌模型中最常选择的移植部位,但局部侵犯和远处转移率都较低,腹腔联合皮下移植造模成功率更高。(7)免疫抑制法是一种联合方法造模方法,利用射线或免疫抑制剂先处理实验动物,再接种细胞悬液或肿瘤瘤块到动物皮下或肾包膜下,成瘤率较高。中药药理研究动物模型可用于评价疗效、筛选中药成分、健全中药实验研究体系等;大致分为证候动物模型、疾病动物模型及病证动物模型等。胃癌动物模型建立方法各不相同,各有优缺点,应根据中医药实验目的选用。

抗癌消水散对人胃癌小鼠腹腔移植阳虚模型的干预作用

目的:研究抗癌消水散对人胃癌小鼠腹腔移植阳虚模型的影响。方法:采用腹腔注射人胃癌细胞MGC803及冰水建立人胃癌小鼠腹腔移植阳虚模型,将造模成功的50只小鼠分为模型组及抗癌消水散低、中、高剂量组,每组各10只,另取10只正常小鼠为对照组。干预30 d后评价阳虚症状积分,测定血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、促甲状腺激素(TSH)含量及B7-1、B7-2、CD28、胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)含量,检测腹膜组织中B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、CD28 mRNA、CTLA-4 mRNA及转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)含量,观察腹水量、瘤体积、瘤重。结果:与正常组比较,模型组阳虚症状积分显著增加,血清ACTH、CORT、T_(3)、T_(4)、TSH水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。抗癌消水散低、中、高剂量组小鼠腹水量、瘤体积、瘤重,血清中B7-1、B7-2、CD28、CTLA-4含量,腹膜组织中B7-1、B7-2、CD28 mRNA、CTLA-4 mRNA及TGFβ1、IL-10含量与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);上述指标低、中、高剂量组组间比较,差异亦有统计学意义(P<0.05),以高剂量组改善为最佳。结论:抗癌消水散具有抗人胃癌小鼠移植阳虚模型瘤恶性腹水的作用,这可能与抑制CTLA-4表达,促进T细胞激活,改善机体免疫抑制及腹腔免疫微环境有关。

小鼠腹腔异位心脏移植模型方法改进

自从1973年Corry等[1]首次报道小鼠异位心脏移植模型以来,小鼠异位心脏移植现已成为移植免疫研究中最为常用的模型.小鼠血管细、手术困难,限制了该模型的广泛应用.我们改进手术方法,获得了很好的效果.一、材料与方法1.材料：C57BL/6（H2b）小鼠150只及BABL/c（H2d）小鼠50只,雌性,6～8周龄,体质量16～20 g,购于上海交通大学医学院实验动物中心.供、受体体质量差异无统计学意义.同种同品系组：供、受体均为C57BL/6小鼠.同种异品系组：供体为BABL/c小鼠,受体为C57BL/6小鼠.两组均为50例.手术显微镜购于上海医用光学仪器厂;血管夹购于Accurate Surgical＆ScientificInstruments公司;显微持针器购于E6emSurgical公司;显微剪刀和镊子购于FineScience Tools公司;11-0带针缝线和6-0医用丝线购于上海金环医用缝线厂;戊巴比妥钠和肝素钠购于上海医药集团公司.

经保存的大鼠胚胎后肾同种腹腔内移植模型的建立

目的建立胚胎后肾大网膜内移植大鼠模型,并探讨其在受者体内生长、发育情况。方法取孕16d(E16)和17d(E17)的SD大鼠胚胎,切取胚胎后肾,以组氨酸色氨酸酮戊二酸盐液(HTK液)保存3d,然后移植到切除单侧肾脏的成年SD大鼠的大网膜内,另设未经保存的E16胚胎后肾直接移植对照组。术后给予环孢素A皮下注射,术后3～4周后开腹观察器官形成情况;术后8周,切除受者自体肾脏,观察移植后肾的组织学形态,测定后肾功能。结果移植后3周,移植后肾肾单位、集合管及输尿管的结构正常,组织中少有淋巴细胞浸润,电镜显示移植后肾发育的肾血管球细胞及基底膜、近端肾小管、远端肾小管和集合管上皮细胞超微结构正常。移植后8周,移植后肾的湿重、体积、分泌尿量及内生肌酐清除率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论E16、E17胚胎后肾大网膜内移植,并辅以环孢素A皮下注射,可以形成器官,并发挥功能。

消水散对人肠癌小鼠腹腔移植模型B7/CD28/CTLA-4协同刺激通路及腹水微环境的影响

目的:研究消水散对人肠癌小鼠腹腔移植模型B7/CD28/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)协同刺激通路及腹水微环境的影响。方法:采用腹腔注射人肠癌细胞株HCT116细胞建立人肠癌小鼠腹腔移植模型,分为模型组,消水散低、中、高剂量组,另设正常小鼠为对照组,每组各10只。观察阳虚症状积分,血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)含量,腹水量,瘤体积,瘤重,B7-1、B7-2、CD28、CTLA-4表达量及其mRNA表达水平,腹膜组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果:与正常组比较,模型组阳虚症状积分显著增加(P<0.01),ACTH、CORT、T3、T4、TSH含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,消水散呈剂量依赖性降低小鼠腹水量、瘤体积、瘤重、CTLA-4水平、TGF-β1、IL-10表达水平(P<0.05),增加B7-1、B7-2、CD28水平(P<0.05)。结论:消水散具有抗人肠癌移植瘤恶性腹水作用,这可能与抑制CTLA-4表达,促进T细胞激活,改善机体免疫抑制及腹腔免疫微环境有关。

大鼠颈总动脉移植模型的建立

随着新型免疫抑制剂的应用和个体化治疗方案的实施，器官移植术后急性排斥反应得到了有效控制，慢性排斥反应及由此导致的移植物慢性功能丧失已成为限制移植器官及受者长期存活的主要因素。探寻移植物慢性排斥反应的机制已成为当代免疫学家亟待解决的重大课题。目前，研究慢性排斥反应常用的动物实验是大鼠胸主动脉腹腔移植模型，但其存在创伤大、易截瘫、腹腔感染和粘连等缺点，死亡率高。我们在成功建立大鼠胸主动脉腹腔移植模型的基础上，

HLA衍生肽RDP1258延长大鼠移植心脏存活时间

目的 观察HLA衍生肽RDP1258对大鼠同种移植心脏存活时间的影响。方法人工合成HLA衍生肽RDP1258;建立大鼠心脏腹部移植模型,随机分为4组。(1)对照组:心脏移植前后不用任何药物;(2)环孢素A(CsA)组:心脏移植前后给予CsA灌胃;(3)RDP1258组:心脏移植前后给予PDP1258腹腔注射;(4)RDP1258+CsA组:心脏移植前后联合给予RDP1258和CsA。分别观察人工合成的RDP1258纯度、移植心存活时间及移植心组织的光镜及电镜检查情况。结果RDP1258纯度达95%以上,分子量与理论值相符。大鼠移植心脏存活时间:对照组为(8.00±2.90) d,CsA组为(13.38±3.62)d,RDP1258组为(33.29±10.09)d,RDP1258+CsA组为(85.38±18.34) d。RDP1258组和RDP1258+CsA组与对照组比较,移植心脏存活时间显著延长。RDP1258组和RDP1258+csA组移植心病理改变较轻,超微结构无明显改变。结论RDP1258能抑制急性排斥反应,围手术期给予RDP1258和CsA,能够明显延长大鼠移植心脏存活时间。

转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白基因的同供体大鼠树突状细胞对胰岛移植物存活的影响

目的 探讨转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(转染CTLA4Ig基因)的同供体大鼠DC细胞对同种大鼠胰岛移植的影响。方法 链尿菌素(STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠糖尿病模型,胶原酶法分离、Ficoll 40 0密度梯度离心法纯化胰岛,GM CSF +IL 4诱生培育的方法,获得高纯度的DC ,含目的基因CTLA4Ig重组腺病毒AdvCTLA4Ig ,转染同供体DC细胞,与胰岛细胞同时移植于糖尿病受体大鼠肾包膜下,免疫组织化学、Dot ELISA、逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测CTLA4Ig基因在实验组和对照组DC细胞中的表达,并检测受体大鼠的血糖浓度变化,同时观察受体存活情况。结果 实验组DC细胞有CTLA4Ig表达,而对照组DC细胞没有CTLA4Ig表达,实验组正常血糖维持时间(17.3±2 .4)d较对照组(10 .1±1.5 )d、空白对照组(8.3±1.2 )d显著延长,实验组、对照组和空白对照组受体大鼠存活天数分别为(3 4.5±3 .4)d、(14 .7±2 .3 )d和(11.2±1.4)d ,实验组高于对照组(P <0 .0 1)。结论 表达CTLA4Ig基因的DC细胞可能诱异胰岛移植免疫耐受。

肝及肝管

9932177 大鼠肝移植模型的Bax、Bcl-2的表现和细胞凋亡[日]/∥日病理会志.-1997,86(1).-174 冀医情 9932178 肝切除术后腹腔内感染:多变量分析对发病要因的研究[日]/亩村泰树∥感染志.-1998,72(3).-307 冀医情 9932179 在肝棘球蚴囊手术中联合应用溴烷和洗必泰的疗效/Sonisik M∥Br JSurg.-1998,85(9).-1277 友谊医 9932180 缺血预处理可减轻肝损伤/Yoshizumi T∥Br J Surg.-1998,85(12).-1636～1640 友谊医 9932181