奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长

目的:研究奥曲肽(octreotide,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用,并探讨其作用机制。 方法:采用MTT比色分析法测定OCT10^(-2),10^(-3),10^(-4),10^(-5),10^(-6)g·L^(-1)对MKN45细胞生长的调控作用;采用流式细胞术分析OCT10^(-3)g·L^(-1))对MKN45细胞的周期分布的影响。 结果;OCT 10^(-2),10^(-3),10^(-4)g·L^(-1)对MKN45细胞的生长均有抑制作用,以lO^(-3)g·L^(-1)浓度的抑制作用最显著,为10.4％;10^(-3)g·L^(-l)这一浓度可诱导MKN45出现G0/G1阻滞,于加入OCT后6h开始,为(64±4)％,24h最显著,达(75±3)％,36h已消失;与对照组(7±1)％相比,24h G2/M期细胞比例亦减少,为(2±2)％,但OCT未改变亚二倍体细胞的比例。 结论:OCT可抑制人胃癌细胞株MKN45的生长,其作用机制之一是诱导细胞出现GO/G1阻滞。

热疗联合顺铂对人胃癌细胞株MKN45的细胞毒作用

作者观察了热疗联合顺铂（ＤＤＰ）对人胃低分化腺癌细胞株的ＭＫＮ４５细胞毒作用：两者的协同作用；序贯效应。结果显示，４３℃３０分钟以上的单独热疗有直接的细胞杀伤作用即细胞毒作用；低于４３℃３０分钟的热疗与顺铂合用有明显的协同作用；热疗与顺铂同时应用的效果强于先热疗后化疗或先化疗后热疗。还对热疗联合顺铂的协同机理进行了初步的探讨。

胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白表达的影响

目的研究胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45中骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45根据药物干预分为联合组[胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)]、胃泌素组[胃泌素(10^(-6)mol/L)]、对照组(不加药物培养液),培养24、48 h,获得上清液,采用酶标仪检测光密度值,并测定OPN水平和人胃癌细胞MKN45增殖水平。结果胃泌素组人胃癌细胞MKN45增殖OD值均明显高于联合组、对照组(P<0.05);在胃癌MKN45培养中检测出OPN,随着培养时间的延长,OPN表达增加,胃泌素组OPN水平明显高于联合组、对照组,联合组较对照组明显降低(均P<0.05)。结论胃泌素参与人胃癌细胞MKN45增殖过程,促使OPN表达,丙谷胺对此过程具有抑制作用,为胃癌治疗提供科学依据。

奥曲肽抑制人胃癌细胞株MKN45的生长

目的 探讨奥曲肽 (Octreotide,OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控作用。方法 采用MTT比色分析法分别测定OCT对生长于无血清培养基及含 1 0 %胎牛血清 (FBS)培养基中MKN45细胞的调控作用。结果 OCT 1 0 -2 、1 0 -3 、1 0 -4 g L对培养于无血清培养基中的MKN45的生长均有抑制作用 ,以 1 0 -3 g L浓度的抑制作用最显著 ,为 1 0 .4% ;而OCT 1 0 -2 、1 0 -3 、1 0 -4 、1 0 -5、1 0 -6g L对生长于含 1 0 %FBS培养基中的MKN45均未显示出抑制作用。结论 OCT可抑制无血清培养基中的MKN45的生长。胎牛血清中可能含有可快速降解OCT的肽酶 ,使得OCT未显示出对生长于含 1 0 %FBS培养基中的MKN45的抑制作用。

生长抑素类似物对胃癌细胞株MKN45生长的调控作用

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对胃癌细胞株MKN4 5生长的体外调节作用。方法 MTT法和细胞增殖核抗原 (PCNA)免疫细胞化学染色检测细胞增殖情况 ,RIA法测定表皮生长因子 (EGF)、转化生长因子 -α(TGF -α)的含量。结果 奥曲肽对胃癌细胞生长有抑制作用 ,以 1× 10 -6mol/L浓度最明显 ,并能抑制胃癌细胞合成EGF、TGF -α。结论 奥曲肽对胃癌生长具有负性调控作用 。

shRNA沉默干扰HMGA2基因对胃癌细胞株MKN-45的增殖与凋亡的影响

目的:观察小分子RNA(shRNA)沉默后HMG-A2基因在胃癌细胞株MKN-45的表达,并探讨HMGA2基因对胃癌细胞的增殖与凋亡的影响.方法:构建针对人HMGA2基因的shRNA真核表达载体,瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45.用细胞免疫组化的方法观察转染72h后HMGA2的蛋白表达水平,以MTT比色法、流式细胞术检测转染后MKN-45细胞的生长增殖、凋亡的情况.结果:转染HMGA2-shRNA组的蛋白表达强度(171.34±19.61)明显弱于scrambled组(143.48±19.04)和空白对照组(141.79±18.09,P<0.05),较之scrambled组(5.66%±0.63%)和空白对照组,HMGA2-shRNA组(39.32%±2.37%)能明显抑制细胞的增殖(P<0.05),HMGA2-shRNA组的凋亡率(39.67%±2.35%)与scrambled组(4.29%±1.33%)和空白对照组(5.05%±1.84%)相比明显增加(P<0.05).结论:靶向HMGA2基因的shRNA可以有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并促进细胞的凋亡,HMGA2可能是胃癌治疗的一个潜在靶点.

密点麻蜥调控SLC7A11/GPX4通路诱导胃癌MKN45细胞铁死亡的作用及机制

目的:基于SLC7A11/GPX4信号通路探讨密点麻蜥对人胃癌MKN45细胞发生铁死亡的影响。方法:选择SD大鼠制备含药血清,将MKN45细胞随机分为空白对照组(10%空白血清)、5-FU含药血清(10%)阳性对照组、密点麻蜥含药血清低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度组。CCK-8法检测MKN45细胞的存活率;Transwell法检测MKN45细胞的迁移及侵袭能力;激光共聚焦检测细胞内二价铁离子(Fe^(2+))水平;试剂盒检测细胞内LPO水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;qPCR法检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53 mRNA表达的影响;Western Blotting检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,密点麻蜥含药血清中、高浓度组MKN45细胞存活率、迁移及侵袭能力显著降低,Fe^(2+)、ROS水平显著升高,P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达显著降低,高浓度组LPO水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:密点麻蜥可能通过抑制SLC7A11/GPX4信号通路,同时促进细胞内Fe~(2+)、LPO的积累,从而诱导MKN45细胞发生铁死亡,抑制其增殖、迁移及侵袭。

苦参素对胃癌细胞株MKN-45凋亡的影响

目的 通过检测苦参素诱导胃癌细胞株MKN-45凋亡的作用，探讨其治疗胃癌的作用机制。方法 体外培养人中分化胃癌细胞株MKN-45，应用MTT法检测苦参素对细胞生长的抑制作用，并计算50％抑制浓度(IC50)；将不同浓度梯度的苦参素与细胞株作用后，应用流式细胞仪(ANEXIN-V标记)及TUNEL检测细胞凋亡情况。结果 浓度为lnunol／L的苦参素与细胞株作用30min，流式细胞仪即可检测出细胞凋亡水平升高，但无统计学差异(P>0．05)，lmmol／L作用2d，流式细胞仪及TLINEL均可检测到细胞凋亡水平显著性升高(P<0．05)。结论 苦参素在体外可明显抑制胃癌细胞株MKN-45的生长。苦参素诱导细胞凋亡可能是其治疗胃癌的机制之一；在细胞凋亡的早期检测中应用ANEXIN-V标记流式细胞仪检测的灵敏度较高。

悬浮球培养法在人胃癌细胞株MKN45中分离鉴定胃癌干细胞

肿瘤干细胞（CSC）是肿瘤的起源，它决定肿瘤发生、发展和复发转移。CSC的研究，首先是CSC的分离与鉴定。本研究旨探讨悬浮球培养法分离胃癌CSC细胞的可行性。

HMGA2shRNA真核表达载体转染胃癌MKN45细胞株的沉默作用

目的:将HMGA2shRNA真核表达载体转染至胃癌细胞MKN45,检测其HMGA2mRNA及蛋白的表达。方法:实验分3组:空白组(未转染的胃癌细胞)、实验组(转染HMGA2shRNA组)、阴性对照组(转染错义序列组),RT-PCR和Western blot分别检测HMGA2在mRNA及蛋白水平的变化。结果:与空白组和阴性对照组相比,实验组HMGA2mRNA的表达明显下降,差异具有统计学意义(均P<0.05);HMGA2蛋白表达的变化与基因的变化相一致,实验组的蛋白表达明显受抑制,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:HMGA2的特异性shRNA表达载体抑制了HMGA2的表达,HMGA2shRNA转染有望用于胃癌的基因治疗,为进一步研究其更多功能打下基础。

SOX7对胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭的影响

目的探讨转录调节因子SOX7对人胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭能力的影响。方法以人胃癌MKN45细胞株作为研究对象,用脂质体介导转染pIRES2-EGFP-SOX7重组质粒并建立稳定过表达SOX7的MKN45细胞株,用Real-timePCR和Western blot验证SOX7过表达的情况,并检测转染前后MKN45细胞增殖和侵袭能力的变化,并用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9的表达情况。结果 Real-time PCR和Western blot证实转染后的MKN45细胞SOX7表达明显上调,转染组较对照组增殖和侵袭能力明显下降,且Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9表达明显下调。结论 SOX7在体外可以有效抑制人胃癌MKN45细胞株的增殖和侵袭,其机制可能是通过负性调控Wnt/β-catenin信号通路引起的。

厄洛替尼联合放疗对MKN45细胞株的影响

目的:观察厄洛替尼联合放疗对人胃癌MKN45细胞周期和凋亡的影响,了解厄洛替尼对放疗增敏的作用机制.方法:通过MTT法和集落形成实验,检测厄洛替尼和放射线对MKN45细胞的生长抑制作用,计算出半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50)和放射生物学参数平均致死剂量(mean lethal dose,D0)、准阈剂量(quasi-threshold,Dq)值,得出放射增敏比;流式细胞仪检测MKN45细胞经厄洛替尼及联合放射线处理后细胞的凋亡率及周期分布情况;Westernblot法检测厄洛替尼及联合放射线对MKN45细胞的Bax与Bcl-2蛋白表达的影响.结果:厄洛替尼及放射线均能抑制MKN45细胞的生长,随用药浓度或剂量的增高,抑制作用增强(P<0.01).厄洛替尼与放射线联合对MKN45细胞的抑制作用大于单药和单纯照射(P<0.01);两者联合使S期细胞比率明显降低,放射敏感的G2/M期和G0/G1期细胞比率明显增加(71.87±0.77vs60.72±0.26,P<0.01),细胞凋亡率增加;厄洛替尼联合放射线作用于细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达则明显增加.结论:厄洛替尼通过增加G2/M和G0/G1期细胞比率,降低Bcl-2、升高Bax蛋白表达,从而降低Bcl-2/Bax比率,增加细胞凋亡,以此提高MKN45细胞的放射敏感性.

青蒿琥酯对人胃腺癌MKN45细胞株增殖抑制和诱导凋亡作用

目的研究青蒿琥酯(ART)对人胃腺癌MKN45细胞株的体外增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的ART作用于体外培养的人胃腺癌MKN45细胞株,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法检测不同浓度的ART作用于MKN45细胞株时凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶9(caspase-9)和半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)等表达情况。结果 MTT实验显示,ART作用48 h后对MKN45细胞增殖有显著抑制作用,抑制作用随着药物浓度的增加而递增(P<0.05),IC50值为13.41μmol.L-1。13.41μmol.L-1ART对MKN45细胞增殖存活有明显的抑制作用,且对细胞抑制作用与药物作用时间和浓度呈正相关(P<0.05)。随着ART浓度的增加,ART对MKN45细胞凋亡率逐渐升高(P<0.05)。ART使MKN45细胞Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax、caspase-9及caspase-3蛋白表达明显增高,并随药物浓度的增加,其对凋亡相关蛋白表达的调控作用也明显增强。结论 ART能体外抑制人胃腺癌MKN45细胞株的生长并诱导细胞发生凋亡。

胃泌素对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白表达的影响研究

目的探讨胃泌素(Gastin)对人胃癌细胞MKN45增殖及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法人胃癌细胞MKN45依药物干预进行分组,共分为三组,浓度10^(-6)mol/L的胃泌素组、胃泌素(10^(-6)mol/L)+丙谷胺(10^(-2)mol/L)联合组、不加药物培养液的对照组,均培养24 h、48 h。培养结束后取其上清液,应用酶标仪检测光密度值,连续3次。采用放射免疫法(RIA)检测OPN的表达,应用MTT法测定人胃癌细胞MKN45增殖情况。结果浓度10^(-6)mol/L的胃泌素对人胃癌细胞MKN45的增殖较对照组及联合组有明显的促进作用,差异有显著性(P<0.05);在胃癌细胞株MKN45培养液中测出OPN,随着培养时间的增加,OPN表达也有所增加,胃泌素组较对照组及联合组比较,可明显增加MKN45中的OPN含量,差异有显著性(P<0.05)。结论胃泌素会促进人胃癌细胞MKN45增殖,并促使OPN的表达,提示胃泌素促人胃癌细胞MKN45作用与OPN表达有一定关系;而其受体拮抗剂丙谷胺则可以对这种促进作用产生明显抑制作用。

视黄酸及干扰素对胃癌细胞系MKN45中p16,p21,c-myc基因表达的影响

目的探讨全反式视黄酸及干扰素两种因子对胃癌MKN45细胞的影响.方法将视黄酸及干扰素同时加入胃癌细胞系MKN45中进行细胞培养,用MTT法测定细胞的生长状况,并通过Northern blot和免疫组化测定p16,p21及c-myc的表达情况.结果干扰素（IFN）协同全反式视黄酸（ATRA）可有效地抑制MKN45细胞生长,癌细胞经联合用药诱导后p16和p21基因的表达水平提高,c-myc基因表达水平下降.视黄酸受体RARα基因在MKN45细胞中呈低水平表达,经ATRA和IFN诱导后表达水平提高.结论 ATRA联合IFN诱导可调节p16和p21基因的表达水平,抑制胃癌MKN45细胞生长,这可能与细胞中RARα基因高水平表达有一定关系.

非甾体抗炎药塞来昔布和吲哚美辛对胃癌细胞MKN45的抑制作用

目的:探讨非甾体抗炎药塞来昔布和吲哚美辛对胃癌细胞MKN45的增殖、凋亡的作用及相关作用机制。方法:MTT法检测不同浓度的塞来昔布和吲哚美辛对MKN45增殖的影响。非甾体抗炎药单独或联合应用P38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)处理MKN45细胞,采用流式细胞术检测体外细胞周期及细胞凋亡情况;Western印迹法检测COX2,p-P38MAPK及P38MAPK蛋白的表达情况。结果:MTT的检测结果显示非甾体抗炎药塞来昔布和吲哚美辛均可浓度依赖性的抑制胃癌细胞MKN45的体外增殖。流式细胞周期的检测结果显示非甾体抗炎药可抑制MKN45细胞周期的G1/S转换,而联合应用SB203580则可部分逆转非甾体抗炎药的抑制效应。细胞凋亡的检测结果显示非甾体抗炎药可上调细胞中P53和cleaved-caspase3/caspase3的表达,促进MKN45细胞凋亡;而联合使用SB203580可降低单加药组的细胞凋亡率,部分抑制细胞中P53和cleaved-caspase3/caspase3的表达。此外,Western印迹法的检测结果显示非甾体抗炎药可抑制细胞中COX2的表达,增加p-P38MAPK/P38MAPK的蛋白表达水平;联合使用SB203580可部分逆转该作用。结论:非甾体抗炎药可通过P38MAPK信号通路抑制胃癌细胞MKN45的增殖,并促进其凋亡。

鱼藤素对胃癌细胞MKN-45增殖及凋亡的影响

目的:研究鱼藤素对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用CCK8检测不同浓度(0、1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于胃癌细胞MKN-45 24、48、72和96 h后对其增殖的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;利用倒置相差显微镜观察鱼藤素作用后细胞形态的变化;DAPI及Hoechst染色观察细胞核变化。结果:1μmol/L鱼藤素作用于MKN-45细胞24 h后抑制率为(28.82±0.002)%。随着鱼藤素浓度(10、25μmol/L)增加,作用时间(48、72、96 h)延长,其抑制作用增加,表明其抑制作用呈时间-剂量依赖关系。不同浓度(1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于细胞48 h后,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率显示鱼藤素显著促进细胞凋亡。细胞周期检测发现,与对照组比较,1μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,S期细胞比例升高,G_0/G_1期及G_2/M期细胞比例下降;10μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,G_2/M期细胞比例升高,G_0/G_1期细胞比例下降(P<0.01)。倒置相差显微镜检查镜下则显示,1、10和25μmol/L鱼藤素作用MKN-45细胞48 h后,可见典型凋亡样改变。DAPI及Hoechst染色可见鱼藤素组细胞核皱缩变小、染色质浓聚和典型的凋亡小体。结论:鱼藤素可明显抑制胃癌细胞的增殖、促进凋亡。机制可能与细胞周期阻滞于S期及G_2/M期有关。

脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45抗增殖作用的实验研究

目的:观察脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的抑制增殖的作用。方法:体外培养人胃癌细胞MKN45,观察不同浓度、不同时间的脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的影响,采用MTT法检测脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45的抑制作用,并观察细胞形态学改变。结果:共培养24 h后,脑瘤克浓度在0.97 g/kg以上,20%的含药血清对胃癌细胞MKN45有明显的抑制增值的作用。共培养48 h后,脑瘤克浓度在0.97 g/kg以上,10%和20%的含药血清对MKN45的增值有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论:脑瘤克含药血清对胃癌细胞MKN45具有抗增殖作用,且随药物浓度的增加和共培养时间的延长,抑制作用增强。

西咪替丁对人胃癌细胞MKN45的生长抑制和促凋亡的研究

目的 探讨西咪替丁对胃癌细胞MKN45生长的抑制和凋亡作用。方法 采用MTT比色法测定不同浓度西咪替丁作用下胃癌细胞MKN45培养液的OD值 ,并用流式细胞仪测定西咪替丁对MKN45的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 西咪替丁作用 72小时 ,抑制胃癌细胞MKN45的生长并呈剂量依赖趋势。胃癌细胞MKN45细胞周期发生改变 ,G1期百分比减少 ,S期百分比增加 ,并出现明显的细胞凋亡峰。结论 西咪替丁可能通过诱导胃癌细胞MKN45凋亡从而抑制其细胞增殖。