阿托伐他汀对人胃癌AGS细胞增殖、自噬和糖代谢的影响及机制

目的探究阿托伐他汀对人胃癌AGS细胞增殖、自噬和糖代谢的影响及机制。方法通过预实验考察低、中、高浓度(12.5、25、50μmol/L)阿托伐他汀对AGS细胞活力的影响,筛选作用浓度。正式实验分为对照组(不做干预)、阿托伐他汀组(25μmol/L)、阳性对照组(50 mg/L 5-氟尿嘧啶)、抑制剂组[25μmol/L阿托伐他汀+10μmol/L磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制剂LY294002]和激活剂组(25μmol/L阿托伐他汀+10μmol/L PI3K/Akt信号通路激活剂SC79),干预24 h,检测细胞糖代谢情况(葡萄糖和乳酸含量)和细胞增殖率,以及细胞中自噬相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果中、高浓度阿托伐他汀均能显著抑制AGS细胞活力(P<0.05),正式实验选择25μmol/L阿托伐他汀进行后续实验。与对照组相比,阳性对照组和阿托伐他汀组细胞中葡萄糖和乳酸含量、细胞增殖率以及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均显著降低(P<0.05),LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与阿托伐他汀组相比,抑制剂能显著加强上述指标变化(P<0.05),激活剂能显著逆转上述指标变化(P<0.05)。结论阿托伐他汀可抑制人胃癌AGS细胞的糖代谢和增殖,促进细胞自噬,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路相关。

新疆家蚕抗菌肽体外抑制人胃癌细胞AGS的增殖

新疆家蚕抗菌肽（Cecropin XJ）具有抑制肿瘤细胞生长的能力。为研究不同浓度Cecropin XJ体外对人胃癌细胞AGS生长的影响,分别采用MTT比色法、软琼脂集落形成实验、流式细胞术、划痕愈合和Transwell实验进行检测。结果表明,20-100μg/mL的Cecropin XJ能够显著抑制AGS细胞的增殖,并具有剂量和时间依赖性。同时,20,50,100μg/mL的Cecropin XJ处理后集落形成率分别降低了（35.81±13.10）%、（48.12±5.68）%和（81.46±6.21）%。AGS细胞经不同浓度Cecropin XJ处理24 h后,凋亡率逐渐上升并且细胞周期阻滞于S期。20μg/mL Cecropin XJ能够显著抑制AGS细胞的迁移和侵袭,100μg/mL Cecropin XJ几乎完全抑制AGS细胞的迁移和侵袭。以上结果说明,Cecropin XJ能够抑制AGS细胞生长、增殖,有可能成为人胃癌治疗的辅助药物。

榄香烯乳联合5-氟尿嘧啶对人胃癌细胞AGS增殖的抑制作用研究

目的:研究榄香烯乳联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌细胞AGS增殖的抑制作用。方法:取对数生长期AGS细胞,分为榄香烯乳各剂量[0(对照组)、20、40、60、80μg/ml]组、5-FU组(40μg/ml)及其混合组(榄香烯乳80μg/ml+5-FU 40μg/ml),每个浓度3个复孔,采用MTT法考察榄香烯乳各剂量组作用12、24、48 h,5-FU组和混合组作用24 h后细胞的增殖抑制率;采用流式细胞仪、蛋白质印迹法检测对照组、榄香烯乳组(80μg/ml)、5-FU组和混合组作用24 h的细胞周期和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达情况。以接种AGS细胞的裸鼠为模型,考察模型组、5-FU组[17 mg/(kg·d)]、榄香烯乳组[75 mg/(kg·d)]及其混合组荷瘤鼠体内的抑瘤率。结果:榄香烯乳能呈浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);混合组对细胞的抑制作用强于二者单用组;与对照组比较,榄香烯乳组、5-FU组和混合组细胞G0/G1期比例增加,差异具有统计学意义(P<0.05);后3组细胞中Cyclin D1表达依次减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,榄香烯乳组、5-FU组和混合组的体内抑瘤率分别为45.16%、52.68%、65.59%。结论:榄香烯乳与5-FU具有协同抑制AGS细胞增殖的作用。

miR-106a通过调控PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调节胃癌细胞生物学行为的研究

目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。观察各组细胞存活率、细胞周期、细胞侵袭、迁移及caspase活性、Bax、Bcl-2、Casepase-3蛋白相对表达量、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达量。结果与miR-NC组比较,miR-106a inhibitor组AGS细胞活性降低[(分别为15.01±0.97)、(69.82±2.31)%](P<0.01);miR-106a mimics组AGS细胞G0/G1期细胞比例降低(P<0.05)(分别为17.33±1.04、58.24±0.82),G2/M和S期细胞比例升高(分别为50.11±1.12、35.64±1.07和31.56±0.92、9.24±0.25);miR-106a inhibitor组AGS细胞G0/G1期细胞比例升高(分别为78.43±1.12、58.24±0.82)(P<0.05),G2/M和S期细胞比例降低(分别为33.65±0.99、35.64±1.07和19.78±0.84、9.24±0.25)(P<0.01)。与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞的迁移、侵袭能力增强,miR-106a inhibitor组AGS细胞的迁移、侵袭能力减弱(P<0.01);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性降低,miR-106a inhibitor组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(P<0.05);miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞Bax(分别为0.69±0.07、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为0.37±0.04、0.91±0.09)相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(分别为1.53±0.12、0.94±0.09),miR-106a inhibitor组AGS细胞Bax(分别为2.07±0.21、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为1.23±0.12、0.91±0.09)相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)(分别为0.65±0.07、0.94±0.09);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞p85β(分别为1.24±0.12、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为2.13±0.23、1.01±0.10)、p-AKT蛋白(分别为1.14±0.11、0.72±0.06)相对表达量升高,miR-106a inhibitor组AGS细胞p85β(分别为0.69±0.07、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为0.75±0.07、1.01±0.10)、p-AKT(分别为0.53±0.05、0.72±0.06)相对表达量降低(P<0.05)。结论miRNA-106a表达能通过调控宫颈癌细胞PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控其细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导癌细胞细胞周期停滞,抑制miRNA-106a表达可能是胃癌患者治疗的新靶点之一。

和胃降逆胶囊通过PI3K/AKT信号通路调控人胃癌AGS细胞增殖与凋亡机制研究

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。

Ad-ING4对人胃癌AGS细胞凋亡及其p53基因表达的影响

目的探讨腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4(Ad-ING4)在体外对人胃癌AGS细胞凋亡的作用及其p53基因表达的影响。方法不同浓度(80、160、320ng/ml)的Ad-ING4作用人胃癌AGS细胞48h后,用Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,RT-PCR检测p53 m RNA的表达,免疫印迹法检测p53蛋白表达水平,并与对照组进行比较。结果凋亡检测发现,不同浓度Ad-ING4可明显诱导人胃癌AGS细胞凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05);Ad-ING4作用前AGS细胞p53 m RNA和p53蛋白表达水平较低,不同浓度Ad-ING4作用后p53 m RNA和p53蛋白表达水平明显上调,呈浓度依赖性(P<0.05)。结论随Ad-ING4作用浓度增高,人胃癌AGS细胞出现明显凋亡,其机制可能与p53基因转录活性增强有关。

Neuropilin-1的干扰RNA对胃癌细胞株AGS生物学行为的影响

目的:探讨神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人胃腺癌细胞株AGS某些生物学行为的影响。方法:通过脂质体lip-2000分别将NRP-1特异性siRNA、control siRNA转染入人胃腺癌AGS细胞株作为转染组、无意义序列组,加入PBS的细胞作为空白对照组,采用MTT法检测三组细胞24h、48h、72h的增殖情况;Transwell小室侵袭和迁徙实验检测细胞的迁徙和侵袭能力。结果:转染后,转染组细胞的增殖能力在24h、48h和72h与对照组相比,均显著下降(P=0.00)。小室迁徙及侵袭实验表明:与对照组相比,转染组的胃癌AGS细胞迁徙能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。转染组的胃癌AGS细胞侵袭能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Neuropilin-1的siRNA能够明显影响人胃癌细胞株AGS的某些生物学行为。

Spiranthesphenanthrene A对人胃癌AGS细胞凋亡影响及其机制初步研究

为探讨从绶草中分离得到的新化合物spiranthesphenanthrene A对人胃癌AGS细胞凋亡的作用及可能机制,利用MTT法检测spiranthesphenanthrene A对AGS细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明:spiranthesphenanthrene A呈剂量和时间依赖性地抑制AGS细胞活力(P<0.05);与空白对照组相比, spiranthesphenanthrene A可显著诱导AGS细胞凋亡,且呈剂量依赖性(P<0.05)。进一步研究表明, spiranthesphenanthrene A可显著上调凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax和Cytochrome C (Cyt-C)的表达,并下调Bcl-2的表达(P<0.05)。这一研究提示spiranthesphenanthrene A能抑制AGS细胞活力,并通过内源性线粒体途径诱导细胞凋亡。

去甲斑蝥素对胃癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的采用体外实验探讨去甲斑蝥素对胃癌细胞生物学行为的影响,初步研究其相关作用机制。方法本实验分成Control组和NCTD组,CCK8实验检测2组细胞的DNA增殖情况,划痕实验检测2组细胞的转移能力,Western blotting检测2组细胞中TETs蛋白的表达。结果CCK8增殖实验中甲斑蝥素预处理能明显降低吸光度增加速率;划痕实验甲斑蝥素能明显抑制人胃癌AGS细胞的愈合能力;Western blotting实验中甲斑蝥素能明显增加TET1蛋白表达,对TET2和TET3的影响不明显。结论去甲斑蝥素可能通过提高TET1的表达量激活细胞内主动去甲基化,抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。

余甘子醇提物抑制人胃癌株AGS细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用

目的考察余甘子醇提物体外对人胃癌AGS细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法采用MTT法、细胞集落实验、Hoechst染色分析、Annexin-V-FITC/PI等方法对经过余甘子醇提物体外作用的AGS细胞进行观察和检测。结果AGS细胞经0.05,0.1,0.15 mg·m L?1余甘子醇提物作用后,各组细胞形态均发生不同程度的变化,并呈现浓度-时间依赖性;细胞集落实验表明余甘子醇提物抑制肿瘤细胞的集落形成率;Hoechst染色分析、Annexin V/PI实验表明余甘子醇提物能够促进肿瘤细胞的凋亡。结论余甘子醇提物在体外对人胃癌AGS细胞具有良好的抑制生长和诱导凋亡的作用。

高压氧联合紫杉醇对人胃癌AGS细胞周期及活性氧水平的影响

目的探讨高压氧(HBO)联合紫杉醇(PTX)对体外培养的人胃癌AGS细胞株增殖、活性氧水平(ROS)及细胞周期的影响。方法体外培养人胃癌AGS细胞完成后,将细胞分为4组:对照组、PTX组、HBO组和HBO+PTX组。采用CCK-8法检测HBO和PTX联用对胃癌AGS细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞内ROS水平和细胞周期阻滞情况,Western blotting实验检测AGS细胞内细胞周期相关蛋白的表达水平。结果HBO+PTX组AGS细胞存活率明显低于对照组和HBO组(P<0.01),也低于PTX组(P<0.05);HBO+PTX组AGS细胞内ROS水平明显高于对照组和HBO组(P<0.01),也高于PTX组(P<0.05)。PTX将AGS细胞周期阻滞在S期(P<0.05),同时发现HBO+PTX组S期占比略高于PTX组(P>0.05)。HBO+PTX组Cyclin A1表达量明显低于其他3组(P<0.05或P<0.01),CDK2表达量低于对照组和HBO组(P<0.05),略低于PTX组(P>0.05)。结论HBO能够有效增强PTX对AGS细胞的增殖抑制作用,提高AGS细胞内ROS水平,并阻滞细胞周期,从而抑制AGS细胞的分裂与增殖。