基于VEGF/PI3K/AKT通路探讨消岩汤联合阿帕替尼抑制胃癌MGC-803细胞增殖的作用机制研究

[目的]明确消岩汤通过血管内皮生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路治疗胃癌的作用机制。[方法]通过CCK-8检测消岩汤对MGC-803细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测消岩汤对MGC-803细胞凋亡和周期的影响;通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测消岩汤、阿帕替尼及其联合用药作用于MGC-803细胞后VEGF/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。[结果]消岩汤呈剂量依赖性抑制MGC-803细胞的增殖(P<0.05),其半抑制浓度(IC_(50))为63.56 mg/mL;随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的总凋亡率逐渐升高(P<0.05);随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的G0/G1期细胞所占百分比逐渐降低(P<0.05),S期细胞所占百分比逐渐升高(P<0.05),G2/M期细胞所占百分比变化不大(P>0.05);与空白对照组比较,消岩汤组、阿帕替尼组及其联合用药组的p-PI3K、p-AKT、Bcl-2、血管内皮生长因子A(VEGFA)和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)蛋白的表达量显著下调(P<0.05),Cleaved Caspase-9和Bax蛋白的表达量显著上调(P<0.05),相较于单药组,联合用药组对相关蛋白的调控作用更强。[结论]消岩汤能有效抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导凋亡以及S期阻滞,抗胃癌作用机制与其对VEGF/PI3K/AKT信号通路的调控相关。

红芪多糖诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用机制研究

本文重点探究红芪多糖对人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用机制。方法 利用体外细胞培养技术,将MGC-803细胞分配为对照组和红芪多糖处理组。应用细胞凋亡相关蛋白和免疫印迹法,考察黄芪多糖对细胞凋亡的影响,一并研究它们对于蛋白质的表达水平的改变。结果 实验结果显示,红芪多糖处理组中,MGC-803细胞的凋亡明显增加,伴随着细胞凋亡指标的增加和相关蛋白的表达改变。和对照组比较,摄入中药成分实验样本呈现明显细胞死亡比例增长态势,这种情况随着处理量的增加表现出与剂量增加相关性。红芪提取物能够促使人的胃癌MGC-803细胞引起细胞凋亡,作用原理包含关于跟死亡途径相连的蛋白质表现调节控制。实验的最终成效显示,红芪提取物能显著遏制癌细胞的增殖,为了研制新式胃癌治疗药物供应了关键的科学根据。

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。

ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK、MMP-9基因表达的影响

目的:探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用.方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,采用MTT法观察胃癌细胞MGC-803增殖情况,Westernblot检测P-ERK的蛋白表达,RT-PCR法和Westernblot法检测RECK和基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA和蛋白表达.结果:MTT法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制胃癌MGC803细胞增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059的有效浓度为25μmol/L,在此浓度下有效时间为24h;Westernblot法检测结果显示PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调P-ERK1/2,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;RT-PCR法和Westernblot法检测结果显示PD98059能够浓度依赖性(25-100μmol/L)和时间依赖性(12-48h)刺激培养的胃癌MGC803细胞RECKmRNA和蛋白表达增加,MMP-9mRNA和蛋白表达下降.结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,上调RECK的表达,下调MMP-9的表达,从而抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖、生长.

lncRNA 00707通过miR-613调控胃癌MGC-803、SGC-7901细胞的恶性生物学行为

目的:探讨长链非编码RNA 00707(lncRNA 00707)和微小RNA-613(miR-613)对胃癌细胞增殖和转移的调控作用及其相关机制。方法:收集2014年1月至2018年6月青海省人民医院肿瘤外科89例原发性胃癌组织及癌旁组织标本以及胃癌MGC-803、SGC-790、BGC-823细胞,采用qPCR实验检测胃癌组织和细胞系中lncRNA 00707、miR-613的表达水平。分别建立lncRNA 00707低表达和过表达细胞模型,采用CCK-8实验检测MGC-803、SGC-7901细胞增殖能力,Transwell法检测MGC-803、SGC-7901细胞迁移和侵袭能力。用双荧光素酶基因报告实验验证lncRNA 00707与miR-613的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中lncRNA 00707呈明显高表达(P<0.01),lncRNA 00707表达水平与WHO分期呈正相关(P<0.05);与正常细胞系GES-1相比,胃癌细胞系中lncRNA 00707表达明显上调(P<0.05)。敲低lncRNA 00707可明显抑制SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力(均P<0.05);lncRNA 00707过表达可明显提高MGC-803细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。与阴性对照组相比,lncRNA00707过表达显著降低了miR-613荧光素酶报告载体的荧光素酶活性,而下调MGC-803和SCG-7901细胞中lncRNA 00707,miR-613的表达显著增加(均P<0.01)。结论:lncRNA 00707在胃癌组织和细胞系中发挥促癌效应,其可以通过抑制miR-613而促进胃癌MGC-803和SCG-7901细胞的增殖和转移。

胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例的相关性及临床意义

目的探讨胃癌患者血清糖类抗原72-4(CA72-4)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平与外周血CD4^(+)CD25^(+)调节性T(Treg)细胞比例的相关性和临床意义。方法回顾性分析2020年1月至2022年12月在西安长安医院就诊的胃癌患者68例作为胃癌组,另选取同期体检的健康志愿者50例作为对照组。检测并比较两组患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例。比较胃癌组不同临床资料患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例,采用Pearson相关分析胃癌组CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例的相关性。结果胃癌组血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例比对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例比Ⅰ~Ⅱ期患者高,高~中分化程度患者CA72-4、CEA、CA19-9水平比低分化程度患者低,淋巴结转移患者的CA72-4、CEA、CA19-9水平及CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例比淋巴结未转移患者高,差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组血清CA72-4、CEA、CA19-9水平与CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例均呈正相关(r=0.587,0.678,0.696,P<0.05)。结论胃癌患者血清CA72-4、CEA、CA19-9水平及外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例明显升高且存在正相关性,与胃癌的发生、发展及肿瘤浸润转移密切相关;CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞比例随肿瘤负荷的变化而变化,对胃癌患者病情评估、监测机体免疫状态及判断预后具有一定临床价值。

基于PI3K/Akt/caspase-9信号通路研究归芪白术方联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过PI3K/Akt/caspase-9通路对荷瘤小鼠的抑瘤作用及细胞凋亡的机制。方法建立荷瘤模型,随机分模型组、奥沙利铂组(10 mg·kg^(-1))、奥沙利铂+归芪白术方高、中、低剂量组(17.68、8.84、4.42 g·kg^(-1));末次给药后切除移植瘤,计算抑制率;苏木精-伊红染色法(HE)观察瘤组织病理改变;免疫组化法(IHC)检测p-PI3K、p-Akt、caspase-9、caspase-3表达;免疫印迹法(Western blot)检测Bax、Bcl-2及PI3K/Akt/caspase-9通路表达情况。结果各用药组瘤重较模型组降低(P<0.01);与奥沙利铂组比,奥沙利铂+归芪白术方高、中剂量组瘤重降低(P<0.05,P<0.01);模型组肿瘤细胞密集,未见组织坏死区;各用药组肿瘤细胞减少,有明显的组织坏死区和广泛炎性细胞浸润;与模型组比,各给药组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白下降,而caspase-9、cleaved-caspase-9、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax蛋白升高;与奥沙利铂组比,奥沙利铂+归芪白术方高剂量组p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白下降(P<0.05,P<0.01),caspase-9、cleaved-caspase-9、caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax升高(P<0.05,P<0.01);奥沙利铂+归芪白术方中剂量组p-PI3K、p-Akt蛋白下降(P<0.05),cleaved-caspase-9和Bax含量升高(P<0.05)。结论归芪白术方可提高奥沙利铂抑瘤作用,促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt/caspase-9信号通路有关。

鹰嘴豆粗黄酮物质的提取及抑制胃癌细胞MGC-9活性研究

研究了从鹰嘴豆中提取粗黄酮的条件,正交实验表明,在70℃水浴,乙醇体积分数为70%,料液比(g∶mL)为1∶20,提取时间为4h的条件下,从鹰嘴豆中提取粗黄酮物质的含量最高。用MTT法测定鹰嘴豆粗黄酮抑制胃癌细胞MGC-9增殖活性的结果显示,鹰嘴豆粗黄酮对体外培养的胃癌细胞MGC-9具有一定的抑制作用,其抑制率为16.3%,抑制效果不显著。

迷迭香酸衍生物RAD-9通过PI3K/Akt和p38 MAPK信号通路诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的研究迷迭香酸衍生物RAD-9诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及其机制。方法 MTT法观察RAD-9对胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞的凋亡;Hoechst 33258染色法观察RAD-9对MGC-803细胞核凋亡形态学的影响;Western blot检测RAD-9干预MGC-803细胞36 h后,对Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的影响。结果MTT结果显示,RAD-9呈时间、浓度依赖性抑制胃癌MGC-803细胞增殖;流式细胞术结果显示,RAD-9对胃癌MGC-803细胞有明显的促凋亡作用(P<0.01);Hoechst 33258染色实验结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,细胞核呈现典型凋亡形态学改变;Western blot结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax、caspase-3蛋白表达水平明显提高,Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调,p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。结论 RAD-9能抑制胃癌MGC-803细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt和激活p38 MAPK信号通路相关。

蟾蜍灵对人胃癌细胞系MGc-803的细胞毒作用

蟾蜍灵(bufalin)是我国传统中药蟾酥中蟾毒的主要成分之 一，研究其抑癌作用及机制具有重要意义。采用台盼蓝染色法、噻唑蓝还原法和光镜观察bu falin对人低分化胃腺癌细胞系MGc-803的生长抑制作用。结果显示，0.01 μmol/L及以上 浓度bufalin对MGc-803细胞具有显著的抑制作用，IC50值约为0.1 μmol/L。bufal in抑制MGc-803生长的机制是致使细胞核染色质凝缩、碎裂，DNA损伤，胞浆RNA含量下降， 导致细胞死亡。

槐定碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的 探讨槐定碱对人胃癌MGC 80 3细胞抑制作用及其诱导凋亡机理。方法 用MTT法测定槐定碱对MGC 80 3细胞的IC50 ,荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 实验显示 0 .4～ 3.2mg /ml的槐定碱对体外培养的MGC 80 3细胞有明显的抑制作用并可诱导其发生凋亡 ,凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化等 ;DNA电泳可见DNA“梯形”条带 ;流式细胞仪检测Sub G1凋亡峰在G1期前出现 ,S期细胞比例增高。结论 槐定碱对体外培养MGC 80 3细胞生长有抑制作用 ,机理与通过阻止细胞周期的进程 ,诱导肿瘤细胞凋亡有关。

槲皮素对胃癌MGC-803细胞VEGF-C及VEGFR-3表达水平的影响

目的:研究槲皮素抑制胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用。方法:实验分为对照组和40μmol/L槲皮素处理组两组。采用免疫组化和RT-PCR方法,检测槲皮素对VEGF-C及其受体VEGFR-3表达水平的作用。结果:槲皮素处理48h后VEGF-C和VEGFR-3表达水平均有下调,与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:槲皮素可下调胃癌MGC-803细胞VEGF-C、VEGFR-3的表达。

甘草提取物诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的初步研究

目的 :研究甘草提取物诱导胃癌MGC 80 3细胞发生凋亡。方法 :用荧光双染、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法 ,观察甘草提取物处理MGC 80 3细胞后细胞形态和染色质DNA等的变化 ,以双重免疫标记法和免疫组化法检测处理前后 p53基因表达的变化。结果 :激光扫描共聚焦显微镜观察到处于不同凋亡进程中的细胞 ;流式细胞仪检测到显著的凋亡峰 ,且凋亡百分率呈浓度、时间依赖性 ;高浓度甘草提取物处理的MGC 80 3细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“ladder” ;甘草提取物对p53基因表达没有影响。结论 :甘草通过p53非依赖途径诱导MGC 80 3细胞凋亡 ,可望作为一种新的细胞凋亡诱导剂用于胃癌的治疗。

去甲斑蝥素抑制胃癌MGC-803细胞生长并诱导其凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)法及克隆形成抑制实验观察去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(propidium iodide,PI)单染色检测细胞周期改变,膜连蛋白-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素作用MGC-803细胞后,不同浓度的去甲斑蝥素对胃癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.05),去甲斑蝥素作用于胃癌MGC-803细胞48 h和72 h的IC_(50)浓度分别为69.92μmol/L和31.27μmol/L;与对照组相比随着去甲斑蝥素的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;细胞周期检测结果显示,随着去甲斑蝥素浓度的增加,胃癌MGC-803细胞出现明显G2/M期阻滞;不同浓度去甲斑蝥素作用后,出现明显的凋亡细胞群;Western blotting检测结果显示,去甲斑蝥素处理组细胞的Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变。Casepase-9、Caspase-3活化降解,PARP蛋白出现切割条带。结论:去甲斑蝥素能够抑制胃癌MGC-803细胞生长,使细胞周期抑制在G2/M期,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞发生凋亡。

Survivin基因沉默抑制胃癌MGC-803细胞增殖并增强其对塞来昔布的敏感性

目的研究Survivin基因沉默对人胃癌MGC-803细胞增殖和对化疗药物塞来昔布敏感性的影响。方法设计合成Survivin的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染入MGC-803细胞。采用RT-PCR和Western blotting检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTT法和细胞克隆形成试验法察Survivin基因沉默后MGC-803细胞对塞来昔布的敏感性。结果 Survivin基因沉默48 h后,MGC-803细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低(P<0.05)。细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少(P<0.05)。Survivin基因沉默组细胞对塞来昔布的敏感性显著性增强(P<0.05)。结论 Survivin特异性siRNA能显著沉默MGC-803细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强MGC-803细胞对塞来昔布的敏感性。

苦参素对人胃癌细胞系MGC-803增殖的抑制作用

目的:观察苦参素对人胃癌细胞系MGC803的增殖抑制作用。方法:人胃癌细胞系MGC803接种培养24h后,实验组分别加入不同浓度苦参素(0.25g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、4g/L),阳性对照组与阴性对照组分别加入氟尿嘧啶(2g/L)和培养液,继续培养12h,24h,36h,48h,采用MTT法测定苦参素对MGC803细胞的增殖抑制情况。判定苦参素的剂量与MGC803细胞增殖活性间的关系,计算细胞抑制率和群体倍增时间。结果:苦参素在0.25～4g/L范围内,对MGC803细胞的增殖活性具有抑制作用,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),且该作用随剂量增加而增加。与阴性对照组比较,阳性对照组和实验组细胞群体倍增时间增加。结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC803有明显的增殖抑制作用,且具有时间、剂量效应关系。

重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用

目的研究重楼总皂苷对胃癌细胞株MGC-803生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测重楼总苷对MGC-803细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术测定细胞周期变化及细胞凋亡率,并分析E-phA2、survivin及Caspase-3蛋白的表达变化。结果重楼总皂苷可显著抑制MGC-803细胞的生长,并且呈时间-剂量依赖关系;可阻滞细胞于S期,诱导细胞凋亡率的升高;可显著抑制EphA2、survivin蛋白的表达,同时上调Caspase-3蛋白的表达。结论其作用机制可能与下调EphA2和survivin的表达以及促进Caspase-3的表达有关。

盐酸小檗碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的 :探讨小檗碱诱导人胃癌细胞株MGC 80 3的细胞凋亡。方法 :用 4μg/ml盐酸小檗碱在体外作用于人胃癌MGC 80 3细胞 48小时后进行吖啶橙染色、荧光照相 ,同时用原位末端标记 ,检测给药 48小时后MGC 80 3细胞的凋亡情况。结果 :荧光照相发现MGC 80 3细胞呈典型的凋亡细胞形态 ,细胞核和细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色 ,甚至可见黄绿色碎片 ;而原位末端标记法 (insituend labelling ,ISEL)检测结果显示盐酸小檗碱组细胞凋亡指数显著高于空白对照组 (P <0 .0 5 )。 结论 :盐酸小檗碱诱导了人胃癌MGC 80 3细胞的凋亡。

CIK细胞对MGC-803胃癌细胞株抗增殖及诱导凋亡作用的研究

目的 :研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞 (Cytokine inducedkillcells ,CIK)对MGC 80 3胃癌细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用 ,并探讨其作用机制。方法 :应用MTT法检测CIK细胞对MGC 80 3胃癌细胞株的抗增殖作用的影响及细胞毒活性 ;通过HE染色、扫描电镜和透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变 ;通过免疫细胞化学法测定p5 3、p16、C myc的阳性表达率。结果 :MTT比色法表明随着CIK细胞与胃癌细胞效靶比增加及作用时间延长 ,抑制率明显增强 (P <0 0 1)。CIK细胞作用于胃癌细胞 2 4小时后 ,形态学观察胃癌细胞发生凋亡或坏死。CIK实验组p5 3、p16、C myc蛋白随作用时间延长表达均下降 ,与对照组相比均有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外胃癌细胞的免疫活性细胞。其杀伤MGC 80 3胃癌细胞的作用机制之一可能是通过下调p5 3、C myc的蛋白表达。