转染miR-185类似物的人胃腺癌MGC-803细胞增殖能力及M2型丙酮酸激酶表达变化

目的观察转染miR-185类似物的人胃腺癌MGC-803细胞增殖能力及M2型丙酮酸激酶(PKM2)表达变化。方法培养人胃腺癌MGC-803细胞,将其分为观察组1、对照组1、观察组2、对照组2,观察组1转染miR-185类似物,对照组1转染无关序列,观察组2转染PKM2小RNA干扰,对照组2转染RNA干扰无关序列,48 h后收集观察组1和对照组1细胞,用Western blotting法检测PKM2蛋白,用实时荧光定量PCR法检测PKM2 mRNA;将四组细胞继续培养24、48、72、96 h,采用MTT法测量各组在570 nm波长处的OD值。结果细胞培养48、72、96h时,OD值观察组1较对照组1低(P均<0.05),观察组2较对照组2低(P均<0.05)。观察组1、对照组1人胃腺癌MGC-803细胞PKM2蛋白相对表达量分别为0.522±0.065、0.937±0.111,PKM2 mRNA相对表达量分别为0.584±0.037、1.046±0.058,两组比较,P<0.05或<0.01。结论转染miR-185类似物的人胃腺癌MGC-803细胞增殖能力下降、PKM2表达降低,miR-185的这一作用是通过下调PKM2实现的。

小叶黑柴胡诱导人胃腺癌MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的研究小叶黑柴胡诱导人胃腺癌MGC-803细胞的凋亡效应。方法实验分6组，对照组（MGC-803细胞培养于基础培养基中），实验1～5组（MGC-803细胞培养于基础培养基中加小叶黑柴胡的乙醚提取物，小叶黑柴胡终浓度分别为4、8、16、32、64μg／μL/3mL培养液）。计算各组细胞死亡率、细胞生长抑制率、克隆形成率并观察形态学变化，应用凝胶电泳、激光扫描共聚焦显微镜观察分析小叶黑柴胡作用MGC-803细胞后的细胞DNA含量的改变。结幂小叶黑柴胡作用后细胞死亡率、细胞生长抑制率升高，克隆形成率降低，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞DNA含量荧光值测定，对照组（2265.92±225．130），实验组（1653．60±236．78），差异有统计学意义（P〈0．01）。细胞DNA凝胶电泳实验组显示清晰的“阶梯状”条带。结论小叶黑柴胡可诱导人胃腺癌MGC-803细胞凋亡。

磺化铝酞菁对胃腺癌细胞MGc-803的体外光动力杀伤实验

近年来血卟啉衍生物（ＨｅｍａｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎＤｅｒｉｖａｔｉｖｅ，ＨＰＤ）在基础医学与临床上对癌细胞的较强杀伤作用研究已取得了不少进展，但它不易从血清中制备，在肝脏有太多积聚，对体表皮肤有光毒反应等缺点，同时它的主吸收峰在紫光波段（４０５ｎｍ）...

芪竹方对人胃腺癌MGC-803细胞Caspase-3及端粒酶增殖与凋亡的影响

[目的]观察芪竹方对人胃腺癌MGC-803细胞Caspase-3及端粒酶增殖与凋亡的影响,探讨中药复方在抗肿瘤治疗中的作用机制。[方法]选用芪竹方500μg/ml在4、8、12、16 h 4个不同时间点及125、250、500μg/ml3个不同浓度在24 h作用人胃腺癌细胞MGC-803,分别采用Caspase-3分光光度法及TRAP银染法端粒酶活性检测法检测Caspase-3和端粒酶在人胃腺癌细胞MGC-803中的表达。[结果]芪竹方500μg/ml在16 h时可明显提高人胃腺癌细胞MGC-803中Caspase-3的活化程度,在250、500μg/ml作用24 h时可明显降低人胃腺癌细胞MGC-803端粒酶的活性。[结论]芪竹方可能通过介导人胃腺癌MGC-803细胞中Caspase-3的增殖及诱导端粒酶凋亡等多途径多靶点而发挥作用。

二甲亚砜诱导人胃腺癌MGC803细胞分化后其碱性磷酸酶表达

目的 :研究二甲亚砜诱导人胃腺癌 MGC80 3细胞分化及其 AKPase表达。方法 :分别提取诱导前后胃腺癌 MGC80 3细胞、胎盘、肝脏、H4移植瘤碱性磷酸酶 ,并通过神经氨酸酶处理后聚丙烯酰胺凝胶电泳分析及敏感实验 (苯丙氨酸 ,温度 ,咪唑对AKPase活性影响 )作 AKPase特性检测。MTT法 ,酶荧光染色法研究胃腺癌 MGC80 3细胞经诱导后细胞生长及 AKPase表达。结果 :诱导前后胃腺癌 MGC80 3细胞均表达两型 AKPase,细胞生长下降 3 4 %;AKPase酶量 /细胞下降 3 2 %,AKPase特性曲线走向由诱导前与胎盘 AKPase相近向肝 AKPase走向趋近。结论 :MGC80 3细胞诱导前后均表达的同样的两型 AKPase,在细胞被诱导前表达的AKPase在表型上以近胎盘型 Regan同工酶为主 ,诱导后则以肝型 Regan同工酶为主。原始型胎盘型 AKPase表达量的下降同时说明了 MGC80 3细胞向高分化方向发展。

胃癌细胞株SGC-7901及MGC-803中SURVIVIN基因转录与表达的鉴定

目的 探讨胃腺癌细胞株SGC 790 1及MGC 80 3中survivin基因转录与表达情况 ,为胃癌与survivin基因的相关研究提供帮助。方法 ①利用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)及DNA序列测定技术检测两种细胞株中survivin基因mRNA转录情况。②采用免疫组织化学染色鉴定两种细胞株survivin基因有无蛋白表达及其表达程度。结果 从提取的胃癌细胞总RNA中扩增出 6 12bp的DNA片段 ,与预期的扩增片段大小相符 ;序列测定显示两细胞株的DNA扩增片段序列与基因库survivin基因mRNA序列完全一致 ;免疫组织化学染色显示两细胞株中均有survivin蛋白表达产物。结论 中国人胃腺癌细胞株SGC 790 1及MGC 80

家蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞MGC-803的增殖抑制活性鉴定

以不同蛋白酶酶解制备家蚕蛹蛋白酶解产物（SPPHs）,采用MTT比色法检测其对人胃腺癌细胞MGC-803的增殖抑制活性。不同蛋白酶酶解制备SPPHs对MGC-803的增殖抑制作用存在显著差异（P〈0.05）,其中家蚕蛹蛋白以Alcalase 2.4L酶解的产物（AH）对MGC-803的增殖抑制活性最高,当AH的质量浓度为0.25 mg/m L时,水解度（DH）=25%的AH的抑制活性最高,对MGC-803细胞的增殖抑制率可达到92.74%。Alcalase2.4L酶解家蚕蛹蛋白产物的分子质量也显著影响其对MGC-803细胞的增殖抑制活性,其中分子质量〈5 k D组分的抑制率高达91.13%,将该组分经葡聚糖（G-25）凝胶层析后分离出4个组分（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）,组分Ⅱ对MGC-803细胞的增殖抑制率最高（27.5%）,但与未分离样品相比,抑制效率显著降低,而其他3个分离组分则无抑制作用。研究结果提示,蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞的体外增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能是由多种组分协同完成。

视黄酸诱导胃腺癌细胞凋亡并上调P21/WAF1基因表达

目的 研究视黄酸 (RA)对胃腺癌MGC - 80 3细胞的作用及有关机制。方法 以荧光显微镜、透射电镜和电泳技术检测细胞凋亡 ,免疫组化检测细胞P 2 1/WAF 1蛋白表达。结果 RA处理的MGC - 80 3细胞发生凋亡特征性的改变 :细胞皱缩 ,核染色质凝集 ,边移 ,沿核膜内缘分布 ,呈帽形或半月形 ,亦可见凋亡小体的产生 ;基因组DNA沿核小体之间断裂 ,电泳得到凋亡特征性的DNA梯带 ;细胞P 2 1/WAF 1蛋白表达显著增高。结论 RA诱导胃腺癌MGC - 80 3细胞凋亡与其上调P 2 1/WAF

MACC1基因下调对胃腺癌细胞的生长抑制作用

目的研究下调MACC1表达对胃腺癌细胞株MGC-803生长作用的影响。方法设计并合成RNAi干扰片段,脂质体介导MACC1-si RNA1(MACC1-si RNA1组)和MACC1-si RNA2(MACC1-si RNA2组)转染MGC-803细胞,同时设非特异性干扰片段为对照组。应用q RT-PCR检测转染后各组MACC1的m RNA表达,噻唑蓝比色实验、平板克隆形成实验和流式细胞周期实验检测RNAi转染后MGC-803细胞增殖能力的变化,Western blot检测转染后MACC1、P21、CDK4、CCND1和c-myc蛋白的表达,并进行比较分析。结果与对照组相比,MACC1-si RNA1组和MACC1-si RNA2组MACC1表达在m RNA及蛋白水平下降,细胞的增殖速度变慢,单克隆形成数量减少,细胞周期中G1期细胞的比例显著升高,P21的表达增加,MACC1、CDK4、CCND1和c-myc的表达减少。结论下调MACC1能使MGC-803细胞的细胞周期进程受阻,抑制细胞的增殖,MACC1可以作为治疗胃癌的有效靶点。

黄酮类化合物GL-V9对人胃低分化黏液腺癌细胞株的凋亡作用及其机制

探讨黄酮类化合物GL-V9对人体低分化胃黏液腺癌细胞系MGC-803和BGC-823的凋亡作用及其机制。采用MTT法观察不同浓度的GL-V9作用于两种胃癌细胞后对其细胞活力的影响。采用Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法观察GL-V9对MGC-803细胞株凋亡率和细胞核形态的影响。采用免疫印迹法观察GL-V9对MGC-803细胞株中主要凋亡蛋白caspase-9,caspase-3的影响。应用钙离子荧光探针Fluo-3 AM检测GL-V9对MGC-803细胞株内钙离子浓度变化的影响。实验结果表明,GL-V9可以抑制胃癌细胞株MGC-803,BGC-823细胞活性,改变MGC-803细胞核形态,激活caspase-9,caspase-3蛋白,诱导细胞凋亡。同时,GL-V9可以显著上调MGC-803细胞中钙离子水平,这可能与GL-V9作用下的胃癌细胞株中线粒体凋亡通路的激活相关。

表没食子儿茶素没食子酸酯对人胃腺癌细胞株MGC-803增殖和凋亡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胃腺癌细胞株MGC-803的作用及其机制。方法:对数生长期的MGC-803细胞分别用不同剂量的EGCG处理(25,50,100μmol·L-1),另设空白组,细胞培养48 h后,利用噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况;流式检测细胞凋亡情况,免疫印迹法检测p38,p-p38,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Cleavage-Caspase-3蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,EGCG可以成浓度依赖性的诱导MGC-803细胞的增值抑制和凋亡,明显上调Bax和Cleavage-Caspase-3蛋白表达,明显下调p-p38和Bcl-2蛋白,均具有明显的统计学差异(P<0.05,P<0.01),对p38表达无明显影响。结论:EGCG可通过抑制p38信号通路激活而诱导MGC-803细胞增值抑制和凋亡。

MTT快速比色法在肿瘤细胞活性检测中的影响因素

选用本室建立的人胃腺癌MGc－803细胞株，对MTT用于细胞活性检测的几个变量进行了探讨。结果表明：MTT甲产物最大吸收波长为570nm，在一定范围内，活细胞数目与甲产量成近似直线关系。

环六亚甲基二乙酰胺对G1期人胃癌MGc－803细胞理化的影响

环六亚甲基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）作为一种诱导分化剂，最早用于小鼠红白血病细胞（ＭＥＬＣ）的诱导分化。用ＨＭＢＡ研究人胃癌细胞的诱导分化效应，将有助于了解各种癌症及白血病的发病机理。以人胃癌Ｇ１期ＭＧｃ－８０３细胞经５ｍｍＨＭＢＡ培养液处理后，细胞内环腺苷酸（ｃＡｍｐ）及蛋白激酶Ａ（ＤＫＡ）活性上升，而二酰基甘油（ＤＧ）水平及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性下降，提示ＨＭＢＡ对细胞诱导分化作用与细胞内信号传导通路密切相关，而ＲＮＡ印迹分析表明经ＨＭＢＡ处理后，Ｒｂ基因表达增高，Ｍｙｃ基因表达下降，表明ＨＭＢＡ可能通过调节两套信使系统而调节细胞基因表达。