棒曲霉素对人胃黏膜细胞体外毒性机理研究

研究了棒曲霉素(patulin,PAT)对人胃黏膜细胞(gastric epithelial cells,GES-1)的体外毒性作用,从细胞增殖、凋亡、氧化损伤和DNA损伤等方面对其毒性机理进行了初步探讨。采用四甲基偶氮唑盐法检测PAT对细胞增殖的毒性作用;通过荧光显微镜观察了细胞凋亡形态;利用反转录聚合酶链式扩增反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)实验考察了Bax和Bcl-2 mRNA相对表达量变化;检测了细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)等氧化损伤指标变化;采用Western Blot技术对DNA双链断裂标志物γ-H2AX的表达量进行了测定。研究结果表明,当c(PAT)>1.0μmol/L时,PAT对GES-1细胞抑制率大于20%,荧光染色镜检可见明显的细胞凋亡现象;Bax mRNA转录水平表达量上调,而Bcl-2 mRNA转录水平表达量显著下调,表明GES-1细胞进入了凋亡阶段。同时,总SOD、CAT检测值降幅最高可达53.76%,GSH检测值降幅最高可达56.55%,而MDA最低增幅为139.59%;γ-H2AX表达量上调。研究结果表明PAT可显著抑制GES-1细胞增殖并诱导其凋亡,具有明显的量效关系。由研究结果推断PAT可能通过体外诱发氧化损伤和DNA损伤途径引起GES-1细胞凋亡。

槟榔碱对人胃黏膜上皮细胞的毒性作用研究

本文旨在探讨槟榔碱对人胃黏膜上皮细胞GES-1的毒性作用。用不同浓度(60、90、120、150μg/mL)的槟榔碱处理GES-1细胞,并检测GES-1细胞活力、活性氧水平(Reactive Oxygen Species,ROS)和线粒体膜电位(Mitochondrial Membrane Potential,MMP),测定GES-1细胞还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)水平、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活力、三磷酸腺苷(ATP)酶活力。测定肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin 6,IL-6)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)水平。结果表明,与空白对照组相比,槟榔碱刺激后GES-1细胞形态发生改变,细胞活力最低降低至24%,活性氧水平最高升至12.5倍,线粒体膜电位最低下降至10.4%。在150μg/mL槟榔碱刺激下,总ATP酶以及Na^(+)K^(+)-ATP酶活力分别下降至42.31%和39.84%,GSH和SOD分别下降了40.23%和34.1%,LDH上升了30.46%,TNF-α、IL-6、VEGF、TGF-β水平分别上升了4.67%、10.2%、23.14%和22.83%。结果表明槟榔碱能够产生氧化应激并诱发炎症因子,对GES-1细胞造成毒性损伤。

幽门螺杆菌诱导人胃黏膜细胞GES-1过表达COX-2的研究

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)对人胃黏膜细胞系GES-1细胞增殖和COX-2表达的影响。方法 GES-1细胞与Hp共培养后不同时间段,采用MTT法检测GES-1细胞增殖的动态变化;采用RT-PCR技术分析GES-1细胞COX-2mRNA的表达水平;采用ELISA检测GES-1细胞培养上清液中COX-2的蛋白水平。结果 Hp在低浓度(1×102、1×103cfu/ml)时,可以不同程度地促进人胃黏膜细胞系GES-1细胞增殖,但在高浓度(1×105、1×106cfu/ml)时,细胞的增殖活性逐渐受到抑制。在共培养后24～48 h,GES-1细胞的COX-2 mRNA表达和上清液中的蛋白含量均明显升高。结论在体外培养条件下,Hp能调节GES-1细胞的增殖活性,并能上调COX-2的表达。

幽门螺杆菌感染对人胃黏膜和胃癌细胞热休克蛋白70表达的影响

背景热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)是细胞在不利应激下产生的保护蛋白,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染可能影响胃黏膜细胞HSP70的表达。目的研究Hp感染对人胃黏膜和胃癌细胞HSP70表达的影响,探讨HSP70在人胃黏膜组织的表达特征。方法将人胃黏膜细胞Ges-1和胃癌细胞BGC-823分别与Hp ATCC 26695共培养,采用Western-blot及RT-PCR/qPCR方法检测HSP70蛋白及mRNA在细胞水平表达的变化。利用免疫组织化学染色(IHC)检测人胃黏膜组织的Hp感染和HSP70表达,观察HSP70蛋白在胃癌组织和正常胃腺体组织的分布规律。结果Hp感染的Ges-1细胞和BGC-823细胞均出现了HSP70 mRNA表达一过性下调,Ges-1细胞和BGC-823细胞分别在与Hp共培养的12 h和24 h下调最为显著,至48 h则mRNA表达水平回升;而在蛋白水平,Ges-1细胞和BGC-823细胞内HSP70蛋白的表达在48 h内逐渐下降。IHC显示,组织切片中Hp长期感染的人胃黏膜腺体HSP70蛋白表达无明显下降;与正常胃腺体组织相比,胃癌组织的HSP70蛋白高表达;在正常胃腺体中,胃泌酸腺体和腺颈部增殖带的细胞也表现出一定程度的HSP70表达,而分化成熟的胃小凹上皮细胞无HSP70表达。结论Hp感染导致的正常胃黏膜细胞和胃癌细胞HSP70表达下调具有时间规律性,其中在体外试验中Ges-1细胞和BGC-823细胞的HSP70 mRNA水平在12 h和24 h下调到最低点,随后开始逐渐回升;HSP70蛋白表达在48 h内逐渐下调,而在体内长期感染Hp的胃黏膜组织中表达水平无下调趋势。因此,Hp感染导致的HSP70表达下调呈现出一过性的特点。

艾灸血浆对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的影响

目的:探讨艾灸血浆对乙醇损伤的离体人胃黏膜上皮细胞(GES-1)的保护作用.方法:将离体胃黏膜上皮细胞(GES-1)分为4组,即空白组、乙醇损伤模型组、艾灸穴位血浆组和艾灸非穴位血浆组.艾灸人体足三里、中脘、关元穴及非穴对照点前后提取并制备艾灸前后的血浆.以含8%乙醇培养液作用于后3组胃黏膜上皮细胞,建立胃黏膜上皮细胞损伤模型.各组分别加入预先提取的灸前血浆、艾灸穴位血浆和艾灸非穴位血浆.采用MTT法检测细胞抑制率,比色法检测细胞培养上清液中液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率.结果:模型组与空白组比较,细胞A490降低(P<0.01),抑制率明显上升;与模型组比较,艾灸穴位血浆组A490升高(P<0.01),细胞抑制率降低;艾灸非穴位血浆组A490低于艾灸穴位血浆组A490(P<0.01),而细胞抑制率高于艾灸穴位血浆组(26.52%vs22.06%).与空白组比较,模型组培养液中LDH、MDA、SOD含量均有所提高(P<0.01或0.05);艾灸穴位血浆组与模型组比较,SOD水平升高(P<0.01),LDH、MDA含量降低(均P<0.01);艾灸非穴位血浆组与艾灸穴位血浆组比较,SOD水平下降(34.11kU/L±4.14kU/Lvs38.73kU/L±4.34kU/L,P<0.05),LDH和MDA水平升高(9.26U/L±1.62U/Lvs7.38U/L±1.28U/L;3.91μmoL/L±0.11μmoL/Lvs3.75μmoL/L±0.11μmoL/L,均P<0.05).艾灸非穴血浆组与艾灸穴位血浆组比较,细胞周期中各期无明显差异(均P>0.05),凋亡率升高(1.56%±0.19%vs1.24%±0.08%,P<0.01).结论:艾灸足三里、中脘、关元穴后提取的人体血浆对受损人胃黏膜细胞具有一定的保护作用.

小檗碱减轻幽门螺杆菌诱导的人胃黏膜上皮细胞损伤

目的:探讨小檗碱(Ber)对幽门螺杆菌(Hp)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的保护作用及机制。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入小檗碱(5,10和20μmol/L)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)抑制剂PD98059(20μmol/L)共培养。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA法检测细胞白细胞介素(IL)-1β及IL-8的水平,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性并以Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、p-ERK1/2的蛋白水平。结果:与对照组比较,Hp可抑制GES-1细胞活力、促进GES-1细胞凋亡、诱导GES-1细胞分泌IL-1β和IL-8、增加LDH活性、增加GES-1细胞内p-ERK1/2及Bax蛋白水平并降低Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学显著性(P<0.05);与Hp感染组比较,中、高剂量小檗碱均可逆转Hp对GES-1细胞活力、细胞凋亡、细胞IL-1β及IL-8分泌、LDH活性和GES-1细胞内p-ERK1/2、Bax及Bcl-2蛋白水平的影响,差异均有统计学显著性(P<0.05);与高剂量小檗碱组比较,PD98059联合小檗碱可进一步逆转Hp对GES-1细胞上述指标的影响,差异均有统计学显著性(P<0.05)。结论:小檗碱可通过抗炎、增加细胞活力和抗凋亡来减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制ERK1/2通路有关。

氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞增殖作用的影响及其机制的研究

目的探讨氯吡格雷(Clopidogrel)对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)增殖作用的影响及其机制。方法建立GES-1单层细胞模型,将细胞分为阴性对照组、氯吡格雷24 h干预组、氯吡格雷48 h干预组、氯吡格雷72 h干预组,采用MTT比色法和流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;采用Western blotting检测各细胞组紧密连接蛋白Occludin的表达量。结果与阴性对照组相比,氯吡格雷24 h干预组、氯吡格雷48 h干预组、氯吡格雷72 h干预组的细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);Western blotting结果显示:与阴性对照组相比,后三组的Occludin表达下降。结论在GES-1细胞模型中,氯吡格雷可能通过降低Occludin的表达,从而损伤GES-1细胞。

三种中药有效成分对转化的人胃黏膜上皮细胞的抑制作用

目的明确三种中药有效成分三七皂甙(PNS)、黄芪皂甙(AS)及黄芩甙(Ba)单用或配伍对永生化的人胃黏膜上皮细胞GES1以及经过幽门螺杆菌(HP)培养滤液转化后的GES1细胞(HP细胞)增殖能力的影响。方法以HP培养上清滤液作用GES1细胞,通过描绘细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤试验检测细胞恶性转化程度。分别以不同浓度的三七皂甙、黄芪皂甙及黄芩甙处理两种细胞,四甲基谷氮唑盐(MTT)法及软琼脂集落形成试验检测三种药物单用及配伍对细胞增殖活性的影响。结果HP滤液作用后的GES1细胞增殖活性升高,软琼脂集落形成能力增强,但仍不能在裸鼠体内成瘤。PNS、AS及Ba对GES1和HP细胞的增殖活性有明显的抑制作用,并有随剂量增加作用增强的趋势。三药配伍应用对两种细胞的抑制作用增强,还能明显抑制HP细胞的软琼脂集落形成能力。结论HP滤液能促进GES1细胞的进一步转化。三种药物有效成分显著抑制GES1及HP细胞的增殖,三药配伍抑制作用有不同程度的增强。

血清药理学方法观察氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞GES-1的影响

背景:氯吡格雷可引起胃肠道不良反心尤其是消化道出血,前期研究已证实氯吡格雷原药对人胃黏膜上皮细胞GES-1增殖具有抑制作用。然而,氯吡格雷经肝脏代谢后对胃黏膜上皮细胞是否具有损伤作用目前尚无报道。目的:通过血清药理学办法研究氯吡格雷含药血清体外对人胃黏膜上皮细胞侏GES-1的影响,以探讨氯吡格雷对人胃黏膜的损伤作用。方法:分离1例服用氯吡格雷(75 mg/d)一年而导致消化道出血患者的血清,并配置成浓度分别为5%、10%、15%、20%的含药血清,同时取该患者停用氯吡格雷10 d后的血清作为对照。与GES-1细胞共同培养24 h后,以倒置相差显微镜观察细胞形念学变化,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡情况。结果:与对照组相比,不同浓度的含药血清可使GES-1细胞变圆、核浓缩,对GES-1细胞均有抑制增殖、促进凋亡的效应,并呈一定的浓度依赖性。结论:氯吡格雷经肝脏代谢后的产物对人胃黏膜上皮细胞具有损伤作用。

莫沙比利通过p38/MAPK通路保护氯吡格雷所致胃黏膜上皮细胞损伤

目的:探讨莫沙比利对氯吡格雷所致人胃黏膜上皮细胞(gastric mucosal epithelium cells,GES-1)损伤的保护作用及其机制.方法:建立GES-1单层细胞模型,将细胞分为阴性对照组、氯吡格雷IC50浓度(0.36mmol/L)损伤组及不同浓度莫沙比利(0.4、0.5、0.6μmol/L)联合氯吡格雷IC50浓度组,噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡情况;采用Western blot检测各细胞组p-P38以及紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达量.结果:莫沙比利对氯吡格雷致GES-1细胞损伤有抑制作用(P<0.05);与阴性对照组相比,氯吡格雷损伤组p-P38表达显著增加,而莫沙比利组p-P38表达量较氯吡格雷损伤组减少(P<0.05);同时随着p-P38表达量的减少,Occludin、ZO-1表达量逐渐增加.结论:莫沙比利能够抑制氯吡格雷所致GES-1细胞损伤,可能是通过抑制p38MAPK的磷酸化、上调紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达,从而达到保护胃黏膜的作用.

人胃黏膜上皮细胞介电谱的实验研究

在0.01~100 MHz范围内,使用交流电阻抗方法测量了人胃上皮GES-1细胞悬浮液的介电谱,通过介电谱的实部和虚部以及复平面图的分析,观察体积分数对GES-1细胞介电谱特性的影响.结果表明GES-1细胞的介电行为具有3个特征：（1）频率依赖性,即随电场频率的增加,其介电常数增量（Δε=ε-εh）减小,电导率增量（Δκ=κ-κL）增加;（2）体积分数依存性,即当体积分数增加时,介电常数最大增量（Δεmax）、电导率最大增量（Δκmax）和峰值（P1、P2、P3）随之增加;（3）具有3个特征频率（f1、f2、f3）,分别来源于细胞膜（f1）、细胞核膜（f2）和细胞核仁（f3）.

安胃汤含药血清对胃黏膜肠上皮化生细胞内质网应激-自噬通路的影响

目的观察安胃汤(黄连、制半夏、白芍等)含药血清对胃黏膜肠上皮化生(GIM)细胞的影响,并基于内质网应激(ERS)-自噬通路探讨其作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组及安胃汤低、中、高剂量组(5.4、10.7、21.4 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组5只;每日1次,连续灌胃给药7 d,制备空白血清及安胃汤含药血清。采用150μmol·L^(-1)鹅去氧胆酸(CDCA)干预24 h,诱导人胃黏膜上皮细胞(GES-1),复制GIM细胞模型。将细胞分为正常对照组(未经CDCA干预的GES-1细胞)、模型组及安胃汤低、中、高剂量组,以10%空白血清及安胃汤低、中、高剂量含药血清干预24 h。采用Western Blot法检测肠上皮细胞的特异因子MUC2、VILLIN、CDX2蛋白表达情况;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;免疫荧光法检测细胞中ATF6蛋白表达水平;RT-qPCR法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达水平;Western Blot法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ及Beclin1蛋白表达水平。结果与正常对照组(0μmol·L^(-1))比较,CDCA 50、100、150、200μmol·L^(-1)浓度组GES-1细胞的MUC2、VILLIN、CDX2蛋白表达均显著上调(P<0.01);模型组细胞的增殖水平显著升高(P<0.01);细胞在G2/M期的细胞比例显著升高(P<0.01),在G0/G1期和S期的细胞比例明显降低(P<0.05,P<0.01);细胞的凋亡率显著降低(P<0.01);ATF6蛋白表达显著下调(P<0.01);GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达显著下调(P<0.01);GRP78、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,安胃汤含药血清低、中、高剂量组GIM细胞的增殖水平均显著降低(P<0.01);细胞在G2/M期的细胞比例显著降低(P<0.01),在G0/G1期和S期的细胞比例显著升高(P<0.01);细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);ATF6蛋白表达显著上调(P<0.01);GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达均明显上调(P<0.05,P<0.01);GRP78、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论安胃汤含药血清可将CDCA诱导的GIM细胞周期阻滞在S期,并抑制其增殖,诱导其凋亡,可能与其调控ERS途径,诱导细胞自噬相关。

六月雪水提取物对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的保护作用

前期研究发现六月雪[Serissa serissoides（DC.）Druce]对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤有良好的保护作用,因此进一步在细胞水平上探讨六月雪水提取物对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的保护作用。采用体外细胞培养人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞,将GES-1细胞用0～10%的乙醇孵育4～6 h,建立胃黏膜损伤模型。将参试GES-1细胞分为正常组、模型组、荆花胃康胶丸组、六月雪水提取物剂量组,正常组不做任何处理培养24 h,其他组加入一定浓度的乙醇处理一段时间后,加入含荆花胃康胶丸、六月雪水提取物各浓度剂量的培养基,正常组、模型组不加入药物,继续培养24 h,利用MTT检测各组GES-1细胞的活性。将MTT筛选后效果最佳的六月雪3个浓度以及荆花胃康胶丸组1个浓度分别定为高、中、低剂量组和阳性药物组,运用吖啶橙荧光染色法检测各组细胞凋亡情况,采用Western-Blot法检测各试验组碱性成纤维细胞生长因子（b FGF）蛋白的表达情况。结果表明,5%的乙醇孵育GES-1细胞4 h是造成胃黏膜损伤的最佳细胞模型,对GES-1细胞的抑制率达到40%。六月雪水提取物组中,60、70、80μg/m L 3个浓度效果最佳,与该组其他浓度比较差异显著（P〈0.05）;荆花胃康胶丸组中,在浓度为160μg/m L时细胞增殖最明显;均高于其他浓度的荆花胃康胶丸组;吖啶橙染色后显微镜下观察正常GES-1细胞形态均一、生长良好,而模型组大量细胞明显出现衰老或凋亡,荆花胃康胶丸组、六月雪水提取物组GES-1细胞生长情况明显好于模型组;模型组b FGF的蛋白表达水平明显高于正常组,差异显著（P〈0.05）;与模型组比较,六月雪水提取物组的b FGF蛋白表达水平明显增加,差异极显著（P〈0.01）;六月雪水提取物组与荆花胃康胶丸组比较,b FGF的表达水平差异也达极显著水平（P〈0.01）。说明六月雪水提取物可以保护乙醇损伤的人胃黏膜上皮系GES-1细胞,可以增加b FGF的蛋白表达水平,提高溃疡愈合速度。

康复新液对非甾体抗炎药诱导的人胃黏膜上皮细胞 GES-1细胞损伤的影响

目的:观察康复新液对非甾体抗炎药引起的GES-1细胞形态损伤和凋亡相关蛋白变化的影响,为其临床治疗胃溃疡提供科学依据。方法:采用非甾体抗炎药制备胃黏膜上皮细胞损伤模型,MTT法测定不同浓度康复新液对其增殖和形态变化影响;Hoechst/PI染色检测凋亡发生情况;Western blot测定细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果:浓度过高或过低的康复新液均会对GES-1细胞的生长有一定的抑制作用,适当浓度的康复新液能一定程度减轻非甾体抗炎药引起的细胞损伤,减少凋亡细胞和死细胞数量;与非甾体抗炎药组相比较,康复新液组和非甾体抗炎药+康复新液组Bcl-2和Bax水平比值升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:康复新液能抑制非甾体抗炎药引起的GES-1细胞损伤,其作用机制可能与减轻非甾体抗炎药引起的GES-1细胞凋亡有关。

泮托拉唑联合枫蓼肠胃康胶囊对乙醇损伤的人胃黏膜上皮GES-1细胞的保护作用

目的:观察泮托拉唑联合枫蓼肠胃康胶囊对乙醇损伤的人胃黏膜上皮GES-1细胞的保护作用。方法:用不同浓度的乙醇孵育体外培养的人胃黏膜上皮GES-1细胞,于不同的时间段中观察以建立稳定的胃黏膜损伤模型,将泮托拉唑、枫蓼肠胃康胶囊分别配制成不同浓度,MTT法观察两药单独及联用对GES-1细胞的干预。结果:人胃黏膜上皮GES-1细胞在7%的乙醇中孵育3 h细胞抑制率达到40%,是最佳的胃黏膜损伤细胞模型。对GES-1细胞的保护,各浓度泮托拉唑和枫蓼肠胃康胶囊均有一定作用,最佳浓度分别为60μg/m L和200μg/m L,两药联用后能够减少药物剂量,且可以提高对胃黏膜的保护作用。结论:泮托拉唑与枫蓼肠胃康胶囊联用后可以提高用药安全,减少用药剂量,在低剂量下即可保护损伤的人胃黏膜上皮GES-1细胞,临床上值得推广。

替格瑞洛含药血清对人胃黏膜上皮细胞GES-1的损伤作用

目的探讨替格瑞洛含药血清对人胃黏膜上皮细胞株GES-1的损伤作用。方法分离1例服用替格瑞洛（180mg／d）后2h的患者血清，并配制成不同浓度（5％、10％、15％、20％）的含药血清，同时取该患者服用替格瑞洛前的血清作为对照，培养GES-1细胞24、48、72h。采用MTT法检测细胞增殖，倒置相差显微镜观察各浓度组含替格瑞洛血清培养GES-1细胞后细胞形态学变化，流式细胞仪检测各浓度组细胞凋亡情况。结果MTr显示替格瑞洛含药血清对GES-1细胞的损伤随着浓度增加而增强，呈浓度依赖性（P〈0．05），而无时间依赖性（P〉0．05）。光镜下可见含药血清组的贴壁细胞数量减少，细胞变圆、悬浮，部分细胞核浓缩，细胞损伤随着含药血清浓度增加而加重。流式细胞术显示，替格瑞洛含药血清组细胞凋亡率增大，且随浓度增加而增强。结论替格瑞洛含药血清对人胃黏膜上皮细胞有损伤作用．

小麦肽通过抑制炎症和PI3K/mTOR通路改善乙醇诱导胃黏膜损伤

该研究的目的是探究小麦肽对乙醇造成的胃黏膜损伤的保护作用及其机制。使用小麦肽进行处理后,乙醇诱导小鼠胃黏膜损伤模型和人胃黏膜上皮细胞(human gastric mucosal epithelial cell,GES-1)细胞损伤模型,观察小鼠体重变化和胃组织损伤状况,评估氧化应激、炎症和自噬相关蛋白表达水平。小麦肽预处理显著改善了乙醇诱导的小鼠体重降低,提高了胃组织和GES-1细胞内抗氧化酶活力和一氧化氮(NO)含量,减少脂质过氧化发生。病理组织切片显示,小麦肽预处理后,胃组织损伤显著减少。此外,小麦肽降低了组织内促炎因子表达,并通过抑制GES-1细胞中PI3K/AKT/mTOR通路激活,提高了LC3-Ⅱ蛋白表达。小麦肽可以通过调节抗氧化能力和促炎因子表达,抑制PI3K/mTOR通路激活等方式,改善乙醇诱导的胃黏膜损伤。

1,25-二羟维生素D3对人胃黏膜上皮细胞恶性转化过程的影响

目的研究1,25-二羟维生素D3(骨化三醇)在化学致癌剂N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导的恶性转化过程中对人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞生长、凋亡及Shh、Gli1基因表达的影响。方法 MNNG诱导GES-1细胞作为对照组,诱导后用不同浓度(10-6,10-7,10-8,10-9mmol/L)1,25-二羟维生素D3干预(实验组),采取四甲基固氮唑盐(MTT)检测实验组和对照组细胞增殖并确定实验组最佳药物浓度。分为GES-1细胞组、对照组和实验组,流式细胞术(FCM)检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组细胞Shh、Gli1 mRNA基因的表达。结果 MTT法显示,对照组细胞出现大量死亡,实验组给予10-6,10-7,10-8,10-9mmol/L的1,25-二羟维生素D3干预后存活细胞较对照组增多(P<0.05)。取最佳药物作用浓度10-6mmol/L为实验组,FCM测各组细胞7 d的凋亡率分别为实验组(45.73±2.08)%、对照组(85.23±2.08)%、GES-1细胞组(4.9±0.91)%。与对照组相比,实验组细胞凋亡明显减少(P<0.05)。RT-PCR显示Shh mRNA在实验组(0.674 7±0.011 6)、对照组(0.661 6±0.009 5)均表达(P>0.05),Gli1 mRNA实验组(0.338 2±0.015 0)表达低于对照组(0.532 8±0.011 5)(P<0.05)。结论 1,25-二羟维生素D3有阻止GES-1细胞恶性转化的作用,从而可达到延缓或阻止细胞恶变的目的。其机制可能与通过阻断Sonic Hedgehog(SHH)信号通路有关。

大黄素对氯吡格雷损伤人胃黏膜上皮细胞的保护作用及机制研究

目的：探讨大黄素对氯吡格雷损伤人胃黏膜上皮细胞GES-1的保护作用及可能机制。方法：用氯吡格雷0.36 mmol/L处理GES-1细胞后,加入大黄素（15、30、60μmol/L）和JNK抑制剂SP600125 10μmol/L共培养。流式细胞术测细胞凋亡、MTT法测细胞增殖、比色法测乳酸脱氢酶（LDH）活性、Western Blot测细胞Bax、Bcl-2、p-JNK及t-JNK蛋白表达。结果：与对照组比较,氯吡格雷可促进GES-1细胞凋亡,抑制GES-1细胞增殖,增加GES-1细胞LDH活性,增加GES-1细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达（P〈0.01）;与氯吡格雷组比较,中、高剂量大黄素可减少GES-1细胞凋亡,促进GES-1细胞增殖,降低GES-1细胞LDH活性,降低GES-1细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达（P〈0.05或P〈0.01）;与大黄素高剂量组比较,SP600125可进一步减少GES-1细胞凋亡,促进GES-1细胞增殖,降低GES-1细胞LDH活性,降低GES-1细胞内p-JNK、Bax蛋白表达并增加.

奥美拉唑联合荆花胃康胶丸对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的保护作用

目的探讨奥美拉唑联合荆花胃康胶丸对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的保护作用。方法体外培养人胃黏膜上皮细胞GES-1,将GES-1细胞用4%～8%的乙醇孵育2～5 h建立稳定的胃黏膜损伤模型。将实验细胞分为正常组、模型组、奥美拉唑组、荆花胃康胶丸组、奥美拉唑联合荆花胃康胶丸组(联合用药组),正常组不做任何处理培养24 h,其他组加入一定浓度的乙醇处理一段时间后,奥美拉唑组、荆花胃康胶丸组、联合用药组再加相应的培养基,正常组、模型组不加入药物,继续培养24 h,利用MTT实验检测各组细胞活性。采用蛋白免疫印迹法检测各组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白的表达情况。结果 7%的乙醇孵育GES-1细胞3 h是造成胃黏膜损伤的最佳细胞模型,对细胞的抑制率达到40%。奥美拉唑组中,浓度为0～60μg/mL时细胞增殖呈剂量依赖性;荆花胃康胶丸组中,在浓度为200μg/mL时细胞增殖最明显;联合用药组细胞的活性均高于相应浓度的奥美拉唑组和荆花胃康胶丸组。模型组bFGF的蛋白表达水平明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,奥美拉唑组和荆花胃康胶丸组中bFGF的表达均明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,联合用药组bFGF的表达水平进一步增加(P<0.01)。结论奥美拉唑与荆花胃康胶丸联用后在低剂量情况下可以保护胃黏膜损伤的人胃黏膜上皮细胞,可以减少用药剂量,提高用药安全性。