Hedgehog信号通路介导白藜芦醇对人胆囊癌GBC-SD细胞株凋亡和侵袭的影响

目的 探讨白藜芦醇(RSV)对人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡、侵袭能力和上皮间充质转化(EMT)的影响及其发生机制。方法 体外培养GBC-SD细胞,随机分成空白组和RSV低、中、高剂量组(0,20,50,100μmol·L-1RSV)。通过Annexin V FITC/PI双染流式分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3 (Caspase 3)mRNA表达水平,Transwell侵袭实验检测GBC-SD细胞侵袭能力,Western blotting检测EMT标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达水平和Hedgehog信号通路成员神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(Gli1)、Gli2、音猬因子(Shh)的表达。再将GBC-SD细胞随机分为空质粒组、Gli1过表达质粒组、Gli1过表达质粒+RSV组,通过Western blotting检测Gli1蛋白过表达情况,Annexin V-FITC/PI双染流式和Transwell侵袭实验分别检测上述各组的凋亡水平和侵袭能力。结果 与空白组相比,RSV各剂量组细胞凋亡率、Bax和Caspase 3 mRNA表达显著升高(P <0.05或P <0.01),细胞侵袭能力显著降低(P <0.01);RSV中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P <0.01)。与空白组相比,RSV高剂量组E-cadherin蛋白表达水平显著升高,N-cadherin、Vimentin、Gli1、Gli2和Shh蛋白表达水平显著降低(P <0.01)。与转染空质粒+RSV组相比,Gli1过表达质粒+RSV组细胞的凋亡率降低,侵袭能力增加(P<0.001)。结论 RSV促进GBC-SD细胞凋亡、抑制GBC-SD细胞侵袭及EMT,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号相关。

二十二碳六烯酸对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响。方法采用体外细胞培养的方法,在处于指数生长期的GBC-SD细胞培养剂RPMI 1640中分别添加12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的DHA,培养24～72小时后,采用噻唑蓝法(MTT法)检测GBC-SD细胞的增殖情况,光镜下观察细胞形态变化。采用DNA琼脂糖凝胶电泳、Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜检测GBC-SD细胞的凋亡情况。结果经12.5μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05),光镜下细胞形态无明显改变.经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05),光镜下见细胞皱缩、核染色质凝聚、边集。细胞经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现阶梯状条带,经Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜下观察与对照组比较见较多绿色荧光。结论DHA可以抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。

人胆囊癌GBC-SD细胞系中干细胞样SP细胞群的分离及其ABCG2的表达

目的探索在人胆囊癌GBC-SD细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞（side population cells）群。方法采用荧光激活细胞分选技术（FACS）分选出人胆囊癌SP细胞、非SP细胞。培养3～5周后再次进行FACS，用以检测SP细胞的分化情况。利用流式细胞术检测ABCG2蛋白在SP细胞的表达。结果SP细胞群在人胆囊癌GBC-SD细胞中占（0．64±0．08）％，分离出的SP细胞在培养3～5周后会产生SP细胞和非SP细胞，而非SP细胞则不具备此特性；并且ABCG2在胆囊癌SP细胞群中呈现出高表达状态[（89．56±3．86）％]，在非SP细胞中几乎不表达[（1．32±0．49）％]，两者之间的差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着很少量的干细胞样SP细胞群，并且高表达ABCG2。

选择性Cox-2抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的探讨选择性环氧合酶-2(Cox-2)抑制剂Celebrex对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖的影响。方法采用MTT比色法检测Celebrex对细胞系生长的影响;TUNEL染色法观察细胞凋亡指数,并用流式细胞仪定量分析;透射电镜和荧光显微镜检测细胞凋亡。结果Celebrex抑制GBC-SD细胞系的生长呈剂量依赖性;4 0,8 0,1 2 0,1 6 0μmol/L浓度的Celebrex对GBC-SD细胞的生长抑制率分别是1 8.7 7%,2 5.3 2%,4 6.5 8%和5 2.1 9%(P<0.0 1)。流式细胞仪定量分析在4 0,8 0,1 2 0,1 6 0μmol/L浓度下的细胞凋亡率分别为(8.5 1±1.4 4)%,(1 2.4 0±0.8 7)%,(2 6.3 7±1.7 2)%和(4 3.2 1±0.3 9)%,与对照组(4.8 7±0.5 5)%比较有显著的统计学差异;各组间两两比较差异亦有显著性(均P<0.0 1)。透射电镜和荧光显微镜下能观察到胞核浓缩、碎裂以及凋亡小体的形成。结论Celebrex可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。

基于STAT3通路探讨沉默星形胶质上调基因-1对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨沉默星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖、凋亡及STAT3信号通路的影响。方法实验分为空白对照组(仅有空质粒,无任何阴性或阳性干扰序列)、阴性对照组(携带AEG-1阴性序列)、RNA干扰组(携带AEG-1基因干扰序列),将人GBC-SD细胞接种于培养板内,按要求进行质粒载体转染细胞操作,采用qPCR法检测各组AEG-1 mRNA表达水平,采用Western blot法检测STAT3、p-STAT3和AEG-1蛋白表达水平,采用MTT法检测各组GBC-SD细胞增殖情况,采用Hoechst 33342染色法检测各组GBC-SD细胞凋亡情况,采用ELISA法检测各组GBC-SD细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。结果与空白对照组和阴性对照组比较,RNA干扰组AEG-1 mRNA及蛋白表达水平和p-STAT3蛋白表达水平均明显降低,GBC-SD细胞增殖明显下降,凋亡率明显增高,MMP-2和MMP-9水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论沉默AEG-1可以通过STAT3信号通路抑制人GBC-SD细胞的增殖和诱导其凋亡。

沉默FAT10基因抑制人胆囊癌GBC-SD细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究电转法沉默FAT10基因的表达对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭、增殖及迁移的影响.方法设计及合成靶向FAT10的siRNA序列(FAT10-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),电转法转染至人胆囊癌GBC-SD细胞,分别形成FAT10-GBC-SD、NC-siRNA-GBC-SD细胞.通过RT-PCR、Western blotting检测电转后细胞中FAT10 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检验细胞凋亡及周期,迁移,细胞侵袭实验分别测定细胞增殖,划痕愈合实验,CCK-8增殖实验,以及侵袭的能力.结果FAT10-GBC-SD细胞中FAT10 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-GBC-SD细胞和空载组(Ctrl-GBC-SD细胞组)显著降低.FAT10-GBC-SD细胞的成长速度显著减慢,细胞周期阻止在G0/G1期,S期细胞数减少;与空载组相比,FAT10-GBC-SD细胞的凋亡率显然升高(P<0.05),迁移、增殖、侵袭能力明显下降(P<0.05).结论电转法沉默FAT10基因的表达可抑制胆囊癌细胞的迁移、侵袭及增殖能力.

Cx43基因修饰对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖和迁移能力的影响

胆囊癌恶性程度较高,其早期症状无明显特异性,发病率又呈现逐年升高的趋势[1,2]。肿瘤的增殖、迁移均存在着基因水平的调控参与,从而提示了一种新的控制肿瘤的方法[3]。Cx43是一种重要的缝隙连接蛋白,表达与多种细胞中,Cx43具有功能多样化,在细胞间传递信息和能量,调控细胞的生长、增殖分化及内环境的稳定,因此推断如果阻断肿瘤细胞中Cx43的表达能有效抑制肿瘤[4]。

虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著降低,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PD-H组比较,PD+SC79组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著升高,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著降低(P<0.05);虎杖苷干预治疗后,小鼠移植瘤的生长速度显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可以通过调节Akt/MDM2/p53信号通路使细胞周期阻滞,抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。

紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌SD细胞生物学行为的影响实验研究

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后检测细胞存活率。将GBC-SD细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养GBC-SD细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,GBC-SD细胞存活率逐渐降低(均P<0.05)。与对照组比较,PTS组细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均P<0.05)。沉默miR-340-5p可逆转PTS对GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均P<0.05)。miR-340-5p与MCL-1存在靶向调控关系。PTS能抑制裸鼠肿瘤生长和MCL-1 mRNA和蛋白表达,促进miR-340-5p表达(均P<0.05)。结论:PTS可通过上调miR-340-5p表达下调MCL-1表达,抑制GBC-SD细胞增殖、迁移和侵袭,促进GBC-SD细胞凋亡。

胆囊梭形细胞型未分化癌一例及文献复习

本文报道一例胆囊梭形细胞型未分化癌;患者,男,63岁,20天前因间断性上腹部疼痛就诊于当地医院,行B超提示:胆囊占位;为求进一步治疗于我院就诊;影像检查提示胆囊癌可能,术前考虑胆囊癌(T3期)可能,术中冰冻提示恶性梭形细胞肿瘤,故行胆囊癌根治术及肝部分切除术。大体示肿瘤位于胆囊腔内,呈息肉样生长,切面灰白灰红色,实性,质中;部分肝脏切面灰红色,质软,未见明显异常。镜下,肿瘤主要由梭形细胞组成,局部见少量高分化腺癌成分,核分裂象易见;免疫组化染色:梭形细胞同时表达波形蛋白(Vimentin)和细胞角蛋白(cytokeratin, CK)。胆囊梭形细胞型未分化癌是一种相对罕见的胆囊原发恶性肿瘤,临床症状不典型,发病率较低,术前诊断困难,明确诊断依赖于病理,恶性程度高,需予以重视。

M2型巨噬细胞通过分泌白细胞介素-10调控胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨M2型巨噬细胞通过调控白细胞介素-10(IL-10)表达影响胆囊癌(gallbladder cancer,GBC)细胞增殖、迁移、侵袭的研究。方法:将人单核细胞株THP-1在体外诱导成M2型巨噬细胞,利用RTqPCR检测相应标记物和IL-10的表达情况;利用ELISA检测细胞上清液中IL-10的表达情况。将GBC细胞株NOZ和GBC-SD分组为Control组(无血清培养基)、M2-CM组(M2型巨噬细胞条件培养基)、M2-CM+anti-IL-10组(含IL-10中和抗体的M2-CM)和M2-CM+IgG组(含IL-10同型对照抗体的M2-CM)。采用CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭变化状况,再用Western blot实验检测各组细胞的上皮间质转化标志物(E-cadherin和Vimentin)的表达量。结果:M2型巨噬细胞在体外诱导成功;与诱导前的THP-1相比,IL-10在M2型巨噬细胞内和上清液中表达明显升高(P<0.05);M2型巨噬细胞可促进GBC细胞增殖、迁移和侵袭,以及能抑制E-cadherin表达和促进Vimentin表达,阻断IL-10可抑制M2型巨噬细胞的这一影响(P<0.05)。结论:M2型巨噬细胞可通过分泌IL-10促进GBC细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化。

胆囊癌相关性成纤维细胞促进裸鼠足垫肿瘤淋巴结转移的体内研究

目的构建体内裸鼠足垫肿瘤转移模型,探讨肿瘤相关性成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)对胆囊癌淋巴转移的影响。方法收集病人胆囊癌和正常胆囊组织标本,通过酶消化法提取原代CAF和正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF)。利用免疫荧光实验和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定CAF和NF;构建裸鼠足垫肿瘤转移模型,随机分为两组:CAF+NOZ组和NF+NOZ组,将相应的细胞植入小鼠足垫,通过活体动物成像系统定期观察记录同侧腘窝淋巴结转移情况。4周后,获取淋巴结并进行苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和免疫组化分析肿瘤淋巴结转移情况。结果从病人组织中成功提取出CAF和NF。免疫荧光结果显示α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在CAF中显著高表达,并且Western blot结果提示CAF中标志蛋白α-SMA和FAP明显高表达。在裸鼠足垫肿瘤模型中发现,相较于NF组,CAF组腘窝淋巴结明显肿大,差异具有统计学意义(P<0.05)。HF染色和细胞角蛋白-7(cytokeratin 7,CK7)的免疫组化染色发现,CAF组阳性淋巴结比率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05),并且CK7表达明显增高。结论通过构建裸鼠足垫肿瘤转移模型,证实CAF可以促进胆囊癌的淋巴转移。

胆囊印戒细胞癌并肾透明细胞癌1例并文献复习

胆囊印戒细胞癌(Signet Ring Cell Carcinoma)是胆囊腺癌的罕见类型,其发病率低,侵袭性高,早期远处转移,临床症状不典型,大多为胆囊切除后偶发肿瘤,已知文献多为个案报道,也少有合并多种肿瘤的情况。本文介绍1例因肾肿瘤入院治疗同时行胆囊切除,偶发胆囊印戒细胞癌患者的诊疗经过,并结合文献进行复习,以期提高对该肿瘤的认识[1]。

去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖及侵袭的影响

目的 探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞系增殖、侵袭的影响及其机制。方法 应用细胞培养技术培养GBC SD细胞 ;以MTT法检测NCTD对GBC SD细胞的杀伤抑制率 ;以Matrigel侵袭实验、过河实验和SABC法检测NCTD对GBC SD细胞的侵袭力和对PCNA、Ki 6 7、MMP2 、TIMP2 蛋白表达的影响。结果 NCTD可明显抑制GBC SD细胞的增殖和生长 ,且随浓度提高或时间延长作用增强 ,呈剂量 时间效应关系 ;IC50 为 5 6 .18μg/ml,最强抑制作用时间为第 4 8小时。Matrigel侵袭、过河实验显示 ,NCTD在 5 μg/ml时 ,即能抑制GBC SD细胞的体外侵袭和运动能力 ,随浓度提高 ,过膜细胞减少 ,过膜死亡细胞增多 ,过河时间延长 (P <0 .0 1)。免疫组化测定显示 ,NCTD(IC50 )作用 4 8h后 ,GBC SD细胞PCNA、Ki 6 7、MMP2 表达下降 ,TIMP2 表达上升 ,MMP2 /TIMP2 比值下降 (P <0 .0 5 )。结论 NCTD可抑制人胆囊癌GBC SD细胞的生长 ,低浓度下也能抑制其体外侵袭能力 ;其机制可能与直接抑制GBC SD细胞迁移运动 ,干扰GBC SD细胞增殖相关基因蛋白PCNA、Ki 6 7和细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2 、TIMP2 的表达有关。

去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC-SD细胞系MMP_2、TIMP_2和MMP_2/TIMP_2的影响

胆囊癌是一种浸润转移早、预后差的恶性肿瘤.目前的治疗方法如手术、化放疗,疗效均不甚满意.本研究探讨中药斑蝥的低毒提取物去甲斑蝥素对人原发性胆囊癌GBC-SD细胞的基质溶解相关基因蛋白MMP2、TIMP2和MMP2/TIMP2的影响,以探讨其抗侵袭转移机制.

去甲斑蝥素对原发性胆囊癌GBC-SD细胞系增殖和凋亡的影响

目的 研究去甲斑蝥素 (norcantharidin ,NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 将NCTD作用于经体外培养的人胆囊癌GBC SD细胞 ,采用四氮唑盐比色 (MTT)法进行体外细胞杀伤实验 ,测定NCTD对GBC SD细胞生长的抑制率与剂量效应、时间效应的关系 ;采用流式细胞术测定NCTD处理后的GBC SD细胞的细胞周期及凋亡率 ;并通过光电显微镜观察其细胞形态学改变。结果 NCTD浓度为 10 μg/ml时 ,对GBC SD细胞的生长有抑制作用 ,且随药物浓度升高其抑制作用增强 ,呈剂量效应关系 ,NCTD对GBC SD细胞的半数抑制浓度 (IC50 )为 60 μg/ml;NCTD作用 6h后对GBC SD细胞生长具有抑制作用 ,48h时抑制作用最明显 ,呈时间效应关系。经NCTD作用后 ,流式细胞仪显示 :G2 +M期的细胞明显增多 ,S期细胞明显减少 ,细胞凋亡率上升 ;光镜检查显示 :GBC SD细胞可出现细胞固缩 ,胞膜突出 ,核碎裂等现象 ,并出现凋亡小体 ;电镜显示 :细胞微绒毛卷缩、高尔基体、线粒体等细胞器衰退 ,并可见典型的凋亡细胞。结论 NCTD能抑制人胆囊癌GBC SD细胞的生长 ,其作用呈剂量 /时间效应关系。其机制可能与NCTD诱导GBC SD细胞凋亡 ,抑制GBC SD细胞增殖 ,干扰细胞生长周期 。

胆囊癌细胞系GBC-SD的生物学行为研究

目的：建立人体胆囊癌细胞系，研究胆囊癌细胞的生物学行为。方法：应用组织块法建立细胞系，通过细胞形态学、增殖动力学、染色体分析、细胞上清液ＣＥＡ、ＣＡ１９－９检测及异种种植等对其生物行为进行研究。结果：ＧＢＣ－ＳＤ细胞以方形、多角形和梭形为主，倍增时间约２１．４ｈ，染色体３７～１４５条，众数８１条，具维持分泌ＣＥＡ、ＣＡ１９－９的功能，裸鼠种植肿瘤与来源肿瘤组织类型相似。结论：ＧＢＣ－ＳＤ是一新的人体胆囊癌细胞系，可作为研究胆囊癌的实验模型。

人胆囊癌细胞系GBC-SD p53基因突变的研究

目的:从蛋白质和分子水平研究人胆囊癌细胞系GBC-SDp53基因状况。方法:对体外培养的GBC-SD细胞,应用免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;用PCR技术扩增GBC-SD细胞p53基因4～9外显子,对所得产物进行直接测序分析。结果:GBC-SD细胞P53蛋白过表达;PCR产物第5外显子126位密码子有TAC→AAC的碱基颠换,因而使其编码的氨基酸从酪氨酸→天冬酰胺,产生错义突变。结论:人胆囊癌细胞系GBC-SD表达突变型P53蛋白,点突变是其p53基因功能失活的主要原因。

无血清培养胆囊癌GBC-SD细胞形成肿瘤细胞球的鉴定

目的:分离扩增肿瘤干细胞,并鉴定其生物学性质.方法:用无血清培养基培养人胆囊癌GBC-SD细胞得到肿瘤细胞球.将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;将肿瘤球和普通GBC-SD细胞分别种入96孔板,MTT检测增殖能力,并将肿瘤球和普通GBC-SD细胞分别植入裸鼠皮下,观察移植瘤的形成;流式细胞术检测CD15s和CD24在肿瘤球细胞和普通GBC-SD细胞中的表达,筛选细胞表面标志物.结果:在无血清培养基中,胆囊癌细胞可以形成少量的肿瘤细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长;在动物实验中,肿瘤球细胞较普通GBC-SD细胞显示更强的致瘤能力(80.00%vs10.00%,P<0.05);标志物CD15s在肿瘤球的表达较普通GBC-SD细胞明显增高(2.56%±0.38%vs10.77%±0.93%,t=18.25,P<0.05).结论:人胆囊癌细胞GBC-SD的肿瘤干细胞可以通过无血清培养环境来分离和扩增,CD15s可能为其细胞表面标志物.