5-氮-2′-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响

目的 研究甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响,初步探讨其应用于临床治疗的可能性。方法 应用MTT法检测不同浓度的5-氮-2’-脱氧胞苷对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响,应用流式细胞术检测5-氮-2’-脱氧胞苷对QBC939细胞生长周期及凋亡率的影响。结果 5-氮-2’-脱氧胞苷在浓度为0.5μmol/L时即可以抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,24 h半数致死量为5.0 μmol/L,细胞周期中处于G0/G1期的细胞比例增多,凋亡的发生率增高,而且以上作用与药物浓度及作用时间在一定范围内呈正相关。结论 5-氮-2’-脱氧胞苷可能通过消除某些抑癌基因的启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制胆管癌细胞的生长,并促进其凋亡。

反义CD147分子对人胆管癌细胞株侵袭性影响的实验研究

目的探讨反义CD147分子对人胆管癌细胞株QBC939侵袭性的影响。方法构建含反义CD147分子片段的重组真核表达质粒,将人胆管癌细胞株QBC939分为三组:(1)反义CD147组,运用重组真核表达质粒as CD147-pc DNA3.1(-)转染QBC939细胞;(2)空质粒组,运用pc DNA3.1(-)空质粒转染QBC939细胞;(3)对照组,运用DMEM常规处理细胞。采用MTT法检测各组QBC939细胞的生长情况,RT-PCR和Western blotting法分别对三组QBC939细胞中的CD147、MMP-2、MMP-9、TIMP-2的m RNA表达水平及其对应蛋白的表达水平进行检测。结果成功构建了携带反义CD147分子片段的重组真核表达质粒。MTT法检测显示:三组QBC939细胞的生长曲线及对数生长期情况无统计学差异(P>0.05)。RT-PCR法检测显示:反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的m RNA表达均低于空质粒组和对照组(P<0.05),且空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);反义CD147组QBC939细胞中MMP-9和TIMP-2分子的m RNA表达与空质粒组和对照组相比无统计学差异(P>0.05)。Western blotting检测发现:与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞中CD147和MMP-2分子的蛋白表达明显降低(P<0.05),空质粒组与对照组相比无统计学差异(P>0.05);与空质粒组和对照组相比,反义CD147组QBC939细胞株中MMP-9和TIMP-2分子的蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论 (1)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939的生长无影响;(2)反义CD147对胆管癌细胞株QBC939中MMP-9和TIMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达无影响;(3)反义CD147降低胆管癌细胞株QBC939中CD147和MMP-2的m RNA表达及对应蛋白表达,可能会降低胆管癌细胞株的侵袭性。

丙型肝炎病毒核心蛋白对胆管癌细胞NFAT1基因表达的影响

目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)是否通过调控转录因子NFAT1的表达参与肝内胆管癌的发展及恶性生物学行为。方法构建表达HCV C核心蛋白的真核表达质粒pEGFP-N3-HCV C,通过瞬时转染pEGFP-N3-HCV C质粒,RT-PCR检测肝内胆管癌RBE细胞中NFAT1 mRNA的表达情况,Western blot检测NFAT1蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果转染HCV C后胆管癌细胞NFAT1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,差异具有显著性(P<0.05);HCV C能够促进细胞向G2/M期进展及使细胞增殖能力增加。结论 HCV C可上调胆管癌细胞中NFAT1基因的表达,促进细胞周期进展及胆管癌细胞增殖,可能与肝内胆管癌的发展有关。

沙利度胺不同浓度对人胆管癌耐药细胞株增殖及凋亡的影响

目的:考察沙利度胺(THD)不同浓度体外对人胆管癌耐药细胞株(RBE)增殖及凋亡的影响。方法:将RBE株分为6组(A组、B组、C组、D组、E组和F组)分别加入THD 0.0,12.5,25.0,50.0,100.0和200.0μg/m L,并设立阴性对照组,采用MTT法检测上述各组药物加入后24.0、48.0和72.0 h的细胞生存率,并采用流式细胞仪及Annexin V-FITC检测上述各组药物加入后48 h的细胞周期分布和细胞的凋亡率。结果:经MTT法检测结果显示,随着THD浓度的上升,各组细胞存活率下降,且C组、D组、E组和F组药物加入后48 h和72 h的细胞生存率低于药物加入后24 h的细胞生存率(P<0.05);经流式细胞术检测结果显示,随着THD浓度的上升,药物加入后48 h各组细胞G_0/G_1期细胞和细胞凋亡率上升而S期下降(P<0.05)。结论:沙利度胺可抑制RBE株的增殖,将RBE株阻滞在G_0/G_1期,并诱导RBE株细胞的凋亡。

siRNA下调NF-κB p65 基因表达影响人胆管癌QBC939细胞凋亡

目的运用RNA干扰技术下调胆管癌细胞株QBC939中核转录因子κB(NF-κB)p65基因表达对其肿瘤细胞生长的抑制作用。方法以阳离子脂质体Lipofectamine TM 2000作为转染试剂,将体外合成的人NF-κB p65的siRNA转染入胆管癌细胞QBC939。RT-PCR测定细胞内NF-κB p65 mRNA的表达。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB亚单位p65的DNA结合活性的改变。运用免疫组化、流式细胞仪、激光共聚焦法检测p65基因表达下调对QBC939细胞凋亡的影响。结果体外合成的人NF-κB p65 siRNA有效抑制了QBC939细胞中NF-κB p65 mRNA的表达(P<0.01),同时ELISA结果显示,靶向NF-κB p65 siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于对照组(P<0.05),免疫组化DAPI核染色、流式细胞仪及激光共聚焦检测观察显示下调p65基因表达能够诱导QBC939细胞凋亡。结论 NF-κB p65的siRNA在胆管癌细胞QBC939调控方面起重要作用,通过沉默其表达可诱导胆管癌细胞凋亡抑制其生长增殖。

Wnt通路关键因子在人胆管癌细胞株QBC939中的表达及其意义

目的 以人胆管癌细胞株QBC939为基础,观察Wnt通路关键因子的表达,探讨Wnt信号通路在胆管癌发生、发展中的作用.方法 体外培养人胆管癌细胞株QBC939,利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot分别从mRNA水平、蛋白水平检测Wnt、β-catenin因子的表达.结果 Wnt、β-catenin在体外培养人胆管癌细胞株QBC939中有较高水平表达.结论 人胆管癌细胞株QBC939中存在Wnt通路关键因子的高表达,提示Wnt可能在胆管癌发生、发展中起了重要作用.

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对胆管癌细胞株QBC939的抑制作用

NS-398是一种选择性环氧合酶．2（COX-2）的抑制剂，其抗肿瘤作用与其抑制COX-2的活性，减少前列腺素生成有关。本研究旨在探讨NS-398对人胆管癌细胞QBC939的作用机制。一。

姜黄素增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨敏感性的研究

目的探讨姜黄素对人胆管癌细胞株QBC939吉西他滨的增敏作用及其机制研究。方法将人胆管癌细胞QBC939培养后分为对照组、5μg／m1单药姜黄素组、0．625μg／m1单药吉西他滨组及5μg／m1姜黄素联合0．625μg／m1吉西他滨组，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化，同时用Westernblot法检测相关蛋白核因子±κB（NF±κB）、细胞周期蛋白（Cyclin）B1、凋亡抑制蛋白（1AP）-1的表达改变。结果姜黄素联合吉西他滨处理人胆管癌细胞QBC939后12、24、48、72h的抑制率分别为（10．00±0．02）％、（23．10±0．03）％、（33．234±0．01）％、（48．304±0．05）％，显著高于对照组及单药组（P=0．001、0．000、0．000、0．000）。两药联合作用后能使（28．75±3．23）％的人胆管癌细胞QBC939被阻滞在G2／M期，显著高于单药姜黄素组及单药吉西他滨组[（14．494±2．20）％、（11．824±2．10）％；P=0．000]，且细胞凋亡率为（13．644±3．40）％，显著高于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组[（4．534±0．56）％、（6．47±0．98）％、（9．874±1．12）％，P=0．000]；姜黄素联合吉西他滨作用于人胆管癌细胞株QBC939后NF±κB及下游分子CyclinB1和IAP±1蛋白的相对表达量分别为0．3004±0．001、0．4074±0．036、0．4754±0．032，显著低于对照组、单药姜黄素组及单药吉西他滨组（P=0．000、0．001、0．003）。结论姜黄素可增强人胆管癌细胞株QBC939对吉西他滨的敏感性，其机制可能与NF±κB信号通路的抑制相关。

Bcl-2反义寡核苷酸对人胆管癌细胞株QBC939中Bcl-2表达的影响

胆管癌对放疗、化疗不敏感，手术效果差，如何提高其治疗效果，一直是困扰临床医师的难题。作者既往的实验显示胆管癌组织中Bcl-2高表达，胆管癌细胞株QBC939中Bcl-2阳性表达，Bcl-2反义寡核苷酸（ASODN）可抑制QBC939细胞增殖。本研究将Bcl-2 ASODN作用于人胆管癌细胞株QBC939，旨在探索Bcl-2 ASODN作用的分子机制，为胆管癌反义基因治疗提供实验依据。

索拉非尼对胆管癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

索拉非尼能抑制细胞转化分裂介质（Raf-1）、B-Raf、B-RafV600E、血管内皮生长因子受体（VEGFR）、血小板源性生长因子受体（PDGFR）-h、Fh-3和c-Kit等多种激酶活性，已被美国食品药品监督管理局批准用于晚期肾癌及肝癌的治疗。国外临床前试验发现索拉非尼对胆管细胞癌也具有抗瘤活性，但确切机制尚不清楚。本实验旨在观察在体外条件下索拉非尼对胆管细胞癌增殖及凋亡的影响，并探讨其机制。

鱼藤素抗人胆管癌细胞株TFK-1增殖及其机制

胆管癌是一种高度恶性的消化道肿瘤,具有早期诊断困难、病程进展快、耐药性强、预后差等特点.尽管临床上采取了积极的手术治疗,但仍有80％以上的患者在短期内复发和发生转移[1].有研究表明,吉西他滨、卡培他滨、5-氟尿嘧啶、铂类、紫杉醇等可用于胆管癌的化学治疗,但总体效果不佳[2].因此,寻找更为理想的化疗药物和化疗辅助用药一直是国内外学者研究的热点.

基于新型光敏剂的光动力治疗在胆管癌中的应用

目的验证新型叶绿素类光敏剂——2-1-己氧乙基-2-去乙烯基卟吩e6三钠盐(HCE6),光动力疗法对于QBC939系胆管癌细胞的光动力治疗作用,并探讨其量效关系。方法 CCK-8检测652 nm不同激光光强度下不同浓度(0、0.3、0.5、1.0、15、2.0 mg·L-1)光敏剂HCE6光动力处理下细胞的增殖率,得出最适光动力剂量。建立QBC939系胆管癌细胞荷瘤裸鼠模型,光敏剂尾静脉注射0.5 mg·kg-1,24 h后接受激光治疗(激光剂量:120 J·cm-2,功率0.2 W,治疗20 min),激光治疗后1、3、5、7、10 d观察实验组和对照组瘤体体积变化差异,并对比观察瘤体病理变化。结果在最适光照强度2.7 J·cm-2(功率0.9 W,PDT处理5 min)剂量,随着光敏剂浓度升高,细胞增殖率逐渐下降,最适完全抑制浓度为1.5 mg·L-1;超过这个浓度,细胞增值率变化无差异。荷瘤裸鼠模型实验中实验组和对照组有明显肿瘤体积差异(P<0.05),光动力治疗第10天,实验组与对照组体积差异明显(P<0.05),实验组瘤块体积(0.5±0.010)cm3,而对照组(2.25±0.015)cm3。接受PDT组与对照组比较肿瘤生长速度明显受限。结论体内外实验表明光敏剂HCE6对QBC939系人胆管癌细胞生长具有明显的抑制作用。

小泛素样修饰物特异性蛋白酶1促进人胆管癌细胞株QBC939的增殖与侵袭

本研究旨在观察小泛素样修饰物特异性蛋白酶1（SENP1）对人胆管癌细胞株QBC939增殖与侵袭能力的影响。

胆管癌细胞神经转移与其基质金属蛋白酶-9的表达及其意义

我们采用双抗体夹心式酶联免疫吸附法（ELISA）检测人胆管癌细胞株（QBC939）在神经、淋巴组织中基质金属蛋白酶（MMP）的表达，探索MMP在胆管癌的特异性神经、淋巴结转移中的分子生物学机制。

大黄素对胆管癌QBC939细胞凋亡及丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径表达的影响

目的 观察大黄素在体外对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用及信号转导通路丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的影响.方法 用大黄素作为干预因素,剂量效应组分别用不同浓度大黄素的培养液与QBC939细胞共培养;检测细胞增殖、凋亡,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中c-myc mRNA表达,Western blot检测细胞中c-myc、MAPK、p-MAPK蛋白质的表达.结果 大黄素抑制QBC939细胞增殖,0、20、40、80 μmol/L大黄素对QBC939细胞增殖抑制率分别为（4.73±0.88）％、（21.27±4.04）％、（38.68±4.57）％、（62.45±6.12）％ （P ＜0.05）,c-myc、p-MAPK蛋白明显下降,MAPK蛋白表达无变化.结论 大黄素可能通过抑制MAPK信号转导途径抑制QBC939细胞增殖.

肝肿瘤

9707113 由白介素2诱发的肝局灶性脂肪浸润可以类似转移/Lilenbaum R C//JNat Cancer Inst.-1995,87(8).-609～610重医图9707114 建立一个新的人肝外胆管癌细胞株(Ocuch-LM1)和试验性肝转移模型/Yamada N//Br J Cancer.-1995,71(3).-