生长抑素类似物诱导人胆管癌SK-ChA-1细胞调亡及调亡相关基因表达的研究

目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)抑制人胆管癌生长时对SK ChA 1细胞调亡调控基因bcl 2和bax的作用。方法 用DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测AnnexinV标记凋亡细胞技术研究SMS诱导细胞凋亡的情况 ;用免疫组化和原位杂交分析SMS凋亡调控基因bcl 2和bax的影响。结果 SMS处理SK ChA 1细胞后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞增多 ,DNA凝胶电泳显示典型的凋亡梯状图谱 ,同时SMS可使细胞bcl 2蛋白表达下降 ,使bax蛋白和mRNA表达升高。结论 SMS能诱导SK ChA 1细胞发生凋亡 ,bax和bcl 2凋亡基因介导了SMS对SK ChA

IDH1基因在肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其初步机制

目的探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在肝内胆管癌(iCCA)细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其可能的分子机制。方法采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IDH1基因敲除的HuCCT1细胞(HuCCT1^(IDH1-/-));CCK-8法和克隆形成实验检测IDH1野生型HuCCT1(HuCCT1^(WT))细胞和HuCCT1^(IDH1-/-)细胞的增殖能力;细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。生物信息学方法分析上述两种HuCCT1细胞的转录组测序结果,Western blotting验证转录组信息通路相关蛋白的表达。结果与HuCCT1细胞比较,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞增殖和克隆形成数目明显减少(P<0.05),阻滞在G_(2)/M期细胞的比例明显增加(P<0.01),划痕愈合率明显降低(P<0.01),迁移细胞数目(P<0.001)和侵袭细胞数目(P<0.05)明显减少;q RT-PCR检测结果显示,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞IDH1、Vimentin、MMP-9和调控G_(2)/M期增殖相关基因Cyclin A2、Cyclin B1及CDK1 mRNA表达水平降低(P<0.05),编码E-cadherin的CDH1 mRNA表达水平升高(P<0.01);Western blotting检测结果显示,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞中E-cadherin表达水平升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin及MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。转录组测序结果显示,HuCCT1^(WT)与HuCCT1^(IDH1-/-)存在1476个差异表达基因(DEGs);基因本体论(GO)分析显示上述DEGs显著富集在炎症反应、细胞信号转导和细胞代谢等生物学过程;KEGG通路分析显示上述DEGs显著富集在Wnt、MAPK、Rap1、Hippo、TNF等与肿瘤细胞增殖和侵袭转移密切相关的信号通路。Western blotting验证结果显示,与HuCCT1^(WT)比较,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞Wnt信号通路的Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论IDH1基因参与调控iCCA细胞HuCCT1的迁移、侵袭及EMT过程,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

慢病毒介导RNA干扰抑制RRS1基因表达对胆管癌RBE细胞增殖的影响

研究慢病毒介导RNAi干扰技术抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞表达后对胆管癌RBE细胞增殖产生的影响。方法 运用RT-PCR检测手术切除的胆管癌与癌旁胆管组织标本RRS1 mRNA基因水平的表达。通过慢病毒载体介导RNA干扰技术,从转录水平沉默RRS1基因表达,RT-PCR检测抑制RRS1后在胆管癌mRNA基因水平的表达;体外实验观察抑制RRS1基因后对胆管癌RBE细胞增殖的影响,初步探讨抑制RRS1基因表达后对胆管癌细胞增殖的影响。结果 RT-PCR检测结果发现在胆管癌组织中的RRS1 mRNA基因表达水平较癌旁胆管组织明显升高,RNA干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中表达后,胆管癌RBE细胞的增殖能力受到了明显下降。结论 (1)胆管癌组织中RRS1基因表达上调。(2)慢病毒RNAi干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中的表达后,RRS1会促进胆管癌细胞的增殖能力。

生长抑素类似物对胆管癌SK-ChA-1细胞株及其相关基因表达的影响

目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995抑制人胆管癌增殖时对SK ChA 1细胞细胞周期及cyclinD1 和p16蛋白的影响。方法 采用血清饥饿法将SK ChA 1细胞同步化 ,同步化释放后SMS2 0 1 995处理 48h收取不同时相细胞 ,以流式细胞仪 (flowcytometer)分析细胞周期相分布 ;并同时用免疫组化和原位杂交检测cyclinD1 和p16基因表达水平。结果 SMS处理SK ChA 1细胞后 6、12h可抑制SK ChA 1细胞经血刺激由G0 G1 进入S期。CyclinD1 蛋白表达在SMS处理SK ChA 1细胞后 6h明显减弱。p16蛋白在细胞周期各时相呈稳定性低表达。SK ChA 1细胞cyclinD1 和p16mRNA各时相表达无明显变化。结论 SMS诱导的cyclinD1 蛋白量降低可能与SMS干扰细胞G1 S期转换 ,阻遏SK ChA

奥曲肽对人胆管癌SK-ChA-1细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 研究奥曲肽对胆管癌SK ChA 1细胞增殖和侵袭能力的作用。方法 用噻唑蓝比色法 (MTT)和3H 胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H TdR)掺入法检测奥曲肽对胆管癌细胞株SK ChA 1生长的影响 ;侵袭能力为肿瘤细胞穿透被覆Matrigel胶的聚碳酸脂膜 (膜孔直径 1 2 μm)之细胞数。结果 奥曲肽在 0 .1～ 1 0 0 0 .0 μg/L浓度范围内能抑制SK ChA 1细胞生长和DNA合成 ;高浓度奥曲肽 (1 0 0 .0 μg/L和 1 0 0 0 .0 μg/L)作用后 ,SK ChA 1细胞穿过基底膜能力分别降低 (2 8.2±1 .3) %和 (2 9.3± 1 .7) % (P <0 .0 5)。结论 奥曲肽不仅具有抑制胆管癌细胞生长的作用 。

CCK对胆管癌细胞增殖及P21^(WAF1)、P27^(KIP1)基因表达的影响

目的 探讨胆囊收缩素 (Cholecystokinin ,CCK)促进胆管癌细胞增殖的可能机制。方法 采用细胞增殖计数法及流式细胞仪分析CCK对胆管癌细胞生长、增殖及细胞周期的影响 ,RT PCR、Western印迹法检测CCK对P2 1WAF1 、P2 7KIP1 基因表达的影响。结果 CCK具有显著促进无血清培养的胆管癌细胞的生长和增殖 ,加速细胞周期的进程 ,P2 1WAF1 、P2 7KIP1 mRNA和蛋白水平表达明显降低。结论 CCK促进胆管癌细胞增殖可能与下调细胞周期相关蛋白P2 1WAF1 、P2 7KIP1

淋巴增强因子1及细胞周期蛋白D1在肝门部胆管癌中的表达及其临床意义

目的:研究淋巴增强因子1(lymphoid enhancer factor-1,LEF-1)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)在肝门部胆管癌(hilar cholangiocarcinoma,HC)中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测43例HC及对应癌旁正常组织中LEF-1及CCND1的表达,分析两者表达情况及其与临床病理参数的相关性。结果:LEF1在HC组织中的吸光度(OD)值为9 156±1 014,明显高于正常组织(2 132±906;P<0.05);LEF1的表达与HC的肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(均P<0.05);CCND1在胆管癌组织中的OD值为11 204±9 075,明显高于正常组织(7 012±2 743;P<0.05);CCND1的表达与HC的肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(均P<0.05);Spearman相关分析显示LEF-1与CCND1蛋白表达呈正相关(r=0.338,P=0.005)。结论:LEF-1和CCND1在HC组织中高表达,LEF-1/CCND1信号通路可能在HC的发生发展中发挥重要作用。

细胞周期素D_1及相关基因在胆管癌中的进展

细胞周期素D1(cyclin D1)在肿瘤中的作用日益受到人们的重视,本文研究cyclinD1及其相关基因其在胆管癌中的作用。

LncRNA ZFPM2-AS1靶向miR-515-5p调控胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA ZFPM2反义RNA1(ZFPM2-AS1)对miR-515-5p的靶向调控作用以及对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic和3种胆管癌细胞(RBE、HuCCT1、TFK1)中ZFPM2-AS1和miR-515-5p的表达。将ZFPM2-AS小干扰RNA(si-ZFPM2-AS1)、miR-515-5p模拟物(miR-515-5p mimics)分别转染胆管癌细胞RBE,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验、Transwell实验检测干扰ZFPM2-AS1或过表达miR-515-5p后RBE细胞增殖、迁移侵袭能力变化。蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9蛋白的表达变化。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证ZFPM2-AS1对miR-515-5p的调控作用。将si-ZFPM2-AS1与miR-515-5p抑制物(anti-miR-515-5p)共转染RBE细胞,采用上述方法检测RBE细胞增殖、迁移侵袭能力变化。Western blot检测干扰ZFPM2-AS1表达对β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达的影响。结果与HIBEpic细胞比较,3种胆管癌细胞ZFPM2-AS1的表达显著升高,miR-515-5p的表达显著降低(P<0.05)。干扰ZFPM2-AS1或过表达miR-515-5p后RBE细胞CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达显著降低,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。ZFPM2-AS1靶向miR-515-5p并负调控其表达。干扰ZFPM2-AS1可抑制β-catenin蛋白表达(P<0.05)。抑制miR-515-5p表达可减弱干扰ZFPM2-AS1对RBE细胞增殖、迁移、侵袭以及β-catenin蛋白的影响(P<0.05)。结论干扰ZFPM2-AS1通过靶向miR-515-5p可抑制胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。

ICAM-1、MMP-9及NF-κB在胆管癌中的表达及与外周血免疫抑制细胞的关系

目的探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及NF-κB在胆管癌中的表达及外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)髓源性抑制细胞(MDSC)的关系。方法选取昆明医科大学附属甘美医院2017年12月至2019年12月收治的胆管癌患者60例研究对象。采用免疫组化法测定胆管癌组织与癌旁正常组织ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白;采用流式细胞术检测患者外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DRMDSC比例。比较胆管癌组织与癌旁组织ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达;不同病理特征ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达及外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例;ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达与外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例相关性。结果胆管癌组织ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达阳性率均高于癌旁正常组(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和淋巴结转移ICAM-1蛋白表达比较无明显差异(P>0.05);III~IV期ICAM-1蛋白表达阳性率高于I~II期(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和临床分期MMP-9蛋白表达比较无明显差异(P>0.05);淋巴结转移MMP-9蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和淋巴结转移NF-κB蛋白表达比较无明显差异(P>0.05);III~IV期NF-κB蛋白表达阳性率高于I~II期(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和淋巴结转移CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例比较无明显差异(P>0.05);III~IV期CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例高于I~II期(P<0.05)。ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白表达与CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例呈线性正相关。结论ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白表在胆管癌中高表达,外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例升高,且ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白表达与CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例呈线性正相关。

SNHG1在胆管癌组织及细胞中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene 1,SNHG1)在胆管癌组织和细胞中的表达及临床意义。方法:RT-PCR检测64例胆管癌组织及其配对的癌旁组织、胆管癌细胞(RBE和QBC939)和正常肝内胆管上皮细胞(HIBE)中SNHG1的相对表达水平。分析SNHG1与胆管癌临床病理特征的关系,COX多因素分析和Kaplan-Meier生存曲线分析SNHG1与胆管癌患者生存预后的关系。LipofectAMINE;2000将SNHG1过表达质粒(过表达组)、SNHG1敲降质粒(沉默组)和阴性对照质粒(对照组)转入RBE细胞,CCK8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell检测细胞侵袭。结果:癌组织中SNHG1相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.05),与HIBE细胞比较,RBE和QBC939细胞的SNHG1相对表达量较高(P均<0.05)。SNHG1与TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、肿瘤部位和分化程度无关(P均>0.05)。COX多因素分析结果显示,TNM分期、淋巴结转移和SNHG1高表达是胆管癌患者不良生存预后的独立影响因素(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,SNHG1高表达组中位生存时间(17个月)低于低表达组(42个月),差异有统计学意义(χ^(2)=6.698,P=0.003)。与对照组比较,沉默组SNHG1相对表达量,细胞增殖和侵袭活力明显降低(P均<0.05),细胞周期停滞在G1期;而过表达组上述指标明显增高(P均<0.05),细胞周期更多进入G2期。结论:SNHG1可能参与胆管癌的发生和发展,并且与生存预后有关。

生长抑素类似物诱导人胆管癌细胞株凋亡及对胞内游离钙的影响

目的 探讨生长抑素类似物SMS2 0 1 995 (SMS)是否通过诱导人胆管癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长 ,以及与细胞内游离钙的关系。方法 采用人胆管癌细胞系SK ChA 1,应用MMT比色法 ,AnnexinV FITC技术及激光共聚焦显微镜技术等方法进行检测和观察。结果 在SMS作用下SK ChA 1细胞生长受抑制。SMS处理SK ChA 1细胞后 ,AnnexinV标记的凋亡细胞增多。细胞凋亡的同时细胞内游离钙浓度升高。结论 SMS可能通过诱导SK ChA 1细胞 [Ca2 + ]i依赖性细胞凋亡 ,抑制胆管癌生长。

奥曲肽通过G_0/G_1期阻滞抑制胆管癌细胞的增殖

为观察四种胆管癌细胞系 (RBE、NEC、QBC939、SSP 2 5 )是否能够表达生长抑素受体 (SSTR) ,以及八肽生长抑素类似物奥曲肽 (OCT)对胆管癌细胞的抑制作用 ,采用逆转录 聚合酶链反应方法检测四种细胞系 2 ,3型SSTR的表达 ;四氮唑蓝法检测不同浓度OCT (10、 1、 0 1、 0 0 1和 0 0 0 1mg L)在体外对胆管癌细胞增殖的影响。并应用碘化丙啶 (PI)及AnnexinV PI染色后于流式细胞仪检测经OCT作用后胆管癌细胞的细胞周期和凋亡情况。结果显示四种胆管癌细胞系均可以表达SSTR2 mRNA ,但未检测到SSTR3mRNA的表达。体外 10、 1和0 1mg LOCT明显抑制四种胆管癌细胞的增殖 (与各自对照组相比 ,P <0 0 5 ) ;1mg LOCT作用 4 8h后流式细胞分析表现为G0 G1 期细胞增加 ,S期和G2 M细胞减少 (与各自对照组相比 ,P <0 0 1) ,但没有明显凋亡发生。从而证明OCT抑制胆管癌细胞增殖的机制主要与引起细胞周期阻滞有关 ,而不是促进凋亡。对于表达生长抑素受体的胆管癌 。

吡非尼酮与仑伐替尼联合应用对人胆管癌细胞系HuCCT1的增殖克隆抑制作用及其机制

目的观察吡非尼酮(PFD)联合仑伐替尼(Len)对人胆管癌HuCCT1细胞增殖、克隆形成、自噬的影响,并探讨其可能机制。方法人胆管癌HuCCT1细胞经PFD、Len或PFD联合Len处理后,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,免疫荧光染色检测细胞自噬体数目,蛋白免疫印迹检测AMPK、mTOR、S6蛋白磷酸化水平及自噬标记蛋白LC3-Ⅱ蛋白水平。结果与PFD单药组和Len单药组相比,联合组的细胞增殖活力、克隆形成数目、LC3-Ⅱ表达水平及自噬体形成数目都显著降低,P均<0.05;与PFD单药组和Len单药组相比,联合组的AMPK蛋白磷酸化水平升高,mTOR、S6蛋白磷酸化水平降低,P均<0.05。结论PFD联合Len可抑制HuCCT1细胞增殖、克隆形成,机制可能是其通过上调AMPK磷酸化水平,下调mTOR的磷酸化水平,进而抑制mTOR信号通路,促进细胞自噬。

IL-17通过JAK2/STAT3信号通路诱导PD-L1在肝内胆管癌细胞中的表达

目的:探讨白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)对人肝内胆管癌细胞程序性细胞死亡蛋白配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)表达水平的影响及其潜在机制。方法:使用不同浓度(0 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL)的IL-17作用于人肝内胆管癌细胞系RBE和HCCC9810,Western blot检测PD-L1的表达情况,并筛选出IL-17的最佳作用浓度。使用最佳作用浓度处理RBE和HCCC9810细胞,收集mRNA、蛋白质。实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PD-L1在mRNA水平的表达情况。Western blot检测JAK2/STAT3信号通路的活化情况,并使用AG490阻断信号通路,Westernblot检测通路被阻断后,IL-17对RBE及HCCC9810细胞PD-L1表达水平的影响。结果:IL-17诱导了PD-L1在RBE和HCCC9810细胞中的表达,并且PD-L1的上调幅度与IL-17的浓度相关,当浓度为50 ng/mL和100 ng/mL时,对PD-L1的诱导作用最为显著。与对照组相比,50 ng/mL的IL-17可显著刺激PD-L1在mRNA水平的表达(P<0.01)。同对照组相比,50 ng/mL的IL-17促进了STAT3和JAK2蛋白的磷酸化水平(P<0.01),但并不影响STAT3和JAK2总蛋白的表达水平(P>0.05)。在使用AG490阻断JAK2/STAT3信号通路后,IL-17诱导PD-L1蛋白表达的能力明显减弱(P<0.05)。结论:IL-17可诱导PD-L1在人肝内胆管癌细胞系RBE和HCCC9810中的表达,其机制可能与促进JAK2/STAT3信号通路蛋白的磷酸化水平有关。

circ_0000615通过靶向miR-432-5p调控胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨circ_0000615在胆管癌细胞中的表达及其对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响和可能的调控机制。方法:通过qPCR检测circ_0000615在正常胆管上皮HIBEC细胞和胆管癌CCLP-1、QBC939、TFK-1和RBE细胞中的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000615与miR-432-5p的靶向关系。将si-NC、si-circ_0000615(si-circ-1、si-circ-2)、inhibitor-NC和inhibitor-miR-432-5p转染至CCLP-1和QBC939细胞,转染细胞分为si-NC组、si-circ-1组、si-circ-2组、si-NC+inh-NC组、si-NC+inh-miR-432-5p组和si-circ-1+inh-miR-432-5p组,通过CCK-8、EdU和Transwell实验检测各转染组胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果:在胆管癌细胞中circ_0000615呈高表达而miR-432-5p呈低表达(P<0.05或P<0.01);双荧光素酶报告基因实验证实circ_0000615与miR-432-5p之间存在靶向关系(P<0.01);敲减circ_0000615可明显抑制CCLP-1、QBC939细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05或P<0.01);下调miR-432-5p可部分逆转敲减circ_0000615对胆管癌CCLP-1和QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论:circ_0000615通过靶向miR-432-5p调控胆管癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

circAGFG1靶向miR-4429对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其可能的机制

目的:探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的33例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR法检测组织中circAGFG1和miR-4429表达水平。体外培养胆管癌QBC939细胞,分别转染si-circAGFG1、miR-4429 mimic、共转染si-circAGFG1与anti-miR-4429后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell法分别检测对细胞迁移和侵袭的影响,WB法检测对细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-4429之间的靶向调控关系。结果:胆管癌组织中circAGFG1的表达量高于癌旁组织(3.89±0.26 vs 1.00±0.08,P<0.05),而miR-4429的表达量低于癌旁组织(0.28±0.03 vs 1.00±0.05,P<0.05)。干扰circAGFG1或过表达miR-4429后,QBC939细胞增殖水平、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及细胞中N-cadherin蛋白表达均显著降低(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circAGFG1可靶向结合miR-4429,且干扰circAGFG1会促进QBC939细胞中miR-4429表达(均P<0.05)。下调miR-4429表达能够逆转干扰circAGFG1对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响(均P<0.05)。结论:circAGFG1在胆管癌组织中表达升高,其可能通过靶向抑制miR-4429促进胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭。

HSP90在胆管癌组织与细胞中的表达及17-AAG对胆管癌细胞株的影响

目的 :探讨HSP90在胆管癌组织与细胞中的表达情况及17-AAG对胆管癌TE-1细胞株的影响。方法:选择我院2015年7月—2016年7月收治的40例胆管癌患者作为研究对象,分别检测患者胆管癌组织、癌旁组织及正常组织的HSP90α表达情况,应用不同浓度的17-AAG对胆管癌TE-1细胞株进行处理并检测HSP90及其效应蛋白HIF-1α的表达情况。结果:胆管癌组织的总阳性率为82.5%,高于癌旁组织的35.0%与正常组织的20.0%(均P<0.05)。胆管癌组织的强阳性表达率为37.5%,高于癌旁组织的10.0%与正常组织的5.0%(均P<0.05)。患者胆管癌组织的HSP90α表达与浸润深度、淋巴结转移无关(P>0.05),但与TNM分期及肿瘤直径有明显相关性(P<0.05)。随着17-AAG处理浓度的升高,HSP90α/β-actin、HIF-1α/β-actin降低,不同处理浓度下胆管癌TE-1细胞株HSP90α及其效应蛋白HIF-1α表达均有统计学意义(P<0.05)。结论:HSP90在胆管癌组织及细胞中高表达,且表达情况与临床分期及肿瘤直径有关。17-AAG可下调胆管癌TE-1细胞株中HSP90α及HIF-1α表达,对于临床治疗有一定指导作用。