人胎儿成骨细胞系hFOB1.19在骨组织工程中的应用

背景:现阶段广泛使用的动物成骨细胞模型的生物学特性与人细胞差距较大;原代人成骨细胞分离培养难提纯、培养代次有限;骨肉瘤细胞有异常生长的风险,都不能完全满足研究需求。1995年,有研究利用猴空泡病毒40转染了人胎儿四肢细胞,筛选得到一组具有分化为较早期成骨祖细胞——永生化人成骨细胞系hFOB1.19。目的:综述hFOB1.19的基本特性、培养方法及作为骨组织工程材料细胞模型的应用。方法:在中国知网、万方数据、SinoMed、PubMed、Web of Science、Medicine及Cochrane Library数据库中查找从1995年至2022年5月的相关文献,中文检索词为“人胎儿成骨细胞系1.19、人成骨细胞系、永生化细胞、猴空泡病毒40、骨组织工程、骨替代材料、生物材料研究”,英文检索词为“hFOB1.19,Human osteoblast cell line,Immortalized cells,Monkey vacuolating virus 40,Bone tissue engineering,Bone substitute materials,Biomaterials research”,筛选后得到73篇文献进行综述。结果与结论:(1)hFOB1.19在形态、表型、核型、生物学特性及分化潜能方面与体内成骨细胞高度相似,拥有快速且稳定的生长能力。(2)hFOB1.19已广泛应用于细胞黏附、增殖、分化、矿化、基因表达及蛋白合成方面,以检验骨组织工程材料的生物相容性及成骨性能。(3)hFOB1.19能够弥补动物细胞来源不同、骨肉瘤细胞异常增殖可能、原代成骨细胞分离难及传代次数少的缺点,在骨组织工程实验应用中性能稳定,增殖良好,但因培养条件特殊,细胞传代次数有限及生物安全性等方面的问题,目前在骨组织工程材料领域应用尚且不够广泛。(4)当前,骨组织工程材料发现速度快,但开发过程中缺乏系统全面的研究体系及统一的研究标准,文章总结hFOB1.19在不同研究中的应用,旨在为研究者们提供方法选择引导并推动相关标准完善。

醛固酮对人胎儿心脏成纤维细胞增殖以及胶原表达的影响

目的:探讨人胎儿心脏成纤维细胞(FCFS)经不同浓度的醛固酮(ALD)干预后增殖的变化以及对细胞中I、III型胶原表达的影响。方法:采用胶原酶II消化法、差速贴壁法、差速脱壁法获取并纯化FCFS,在不同浓度醛固酮作用下,应用CCK-8活细胞计数试剂盒检测细胞的增殖率。应用RT-PCR方法检测细胞中I型胶原前胶原A1(COL1A1)和III型胶原前胶原A1(COL3A1)mRNA的变化,应用Western blot检测COL1A1、COL3A1蛋白表达的变化。结果:ALD可浓度依赖性促-进FCFS增殖;低浓度的ALD(10-9、10-8、10-7mol/L)可明显促进FCFS中COL1A1、COL3A1表达,而10-6mol/L的ALD没有明显作用,10-5mol/L的ALD甚至起到抑制作用。结论:ALD可促进FCFS的细胞增殖,其增殖程度随浓度升高而升高;ALD在一定浓度范围内可以促进COL1A1和COL3A1表达,高浓度ALD对两种分子表达具有抑制作用。

突触素在人胎儿海马的表达与发育的研究

目的探讨突触素在不同周龄阶段人胎儿海马中的表达与胎儿海马发育的关系。方法采用免疫组织化学方法(S-P法),观察突触素在不同周龄的人胎儿海马中的表达水平,利用计算机图像分析技术测量不同周龄阶段海马突触素表达的平均光密度。结果光镜下突触素免疫反应产物主要以颗粒状、点状形式存在于海马各层,在各层中分布不均匀;16-20W胎儿海马中已出现了阳性产物,21-25W阳性产物表达增多明显(P<0.05),25-29W阳性产物表达有下降趋势(P<0.05),30-39W阳性产物表达又显著升高(P<0.05)。结论突触素的数量可以反映突触发育的程度,在人胎儿海马中突触素的数量随神经细胞的发育成熟而增加,其间突触素表达的波动可能与突触形成需经历的过度生长及重塑有关。

人胎儿脑膜淋巴孔的发现及其图像分析

应用扫描电镜和计算机图像处理技术，对人胎儿软脑膜和硬脑膜进行了研究。首次发现人软脑膜和硬脑膜有淋巴孔。脑膜淋巴孔位于脑膜间皮细胞之间，为圆形或椭圆形，直径为０．３３～２．９８μｍ。脑膜淋巴孔是脑膜上的一种固定存在的结构，呈散在或簇状分布。硬脑膜淋巴孔分布密度大于软脑膜（Ｐ＜０．０１），两者均呈正态分布。统计结果表明，硬脑膜和软脑膜淋巴孔的直径均数分别是１．３４μｍ和０．８８μｍ；密度均数分别为３８１．５５个／０．１ｍｍ２和１９５．０６个／０．１ｍｍ２。脑膜淋巴孔可能是脑的前淋巴管系统的一个组成部分。由于脑没有淋巴管，但存在淋巴引流，而脑的淋巴引流主要由前淋巴管系统承担，所以，脑膜淋巴孔可能与保持脑的正常生理功能有关，并参与脑脊液循环和脑组织液的吸收。

黄芩茎叶总黄酮对体外培养的人胎儿平滑肌细胞增殖的抑制作用

利用体外细胞培养技术，通过ＭＴＴ测定、细胞计数等方法，观察了黄芩茎叶总黄酮对人胎儿平滑肌细胞的保护作用。结果表明：黄岑茎叶总黄酮能抑制平滑肌细胞的增殖，呈明显的剂量依赖关系；可显著抑制高脂血清对平滑肌细胞（ＳＭＣ）的促增殖作用。提示：黄草茎叶总黄酮对动脉粥样硬化的防治可能具有一定的积极作用。

人胎儿雪旺氏细胞的体外培养及其纯化研究

本实验用酶消化法从孕１４～１９周人胎儿周围神经中分离培养雪旺氏细胞，结合差速贴壁和阿糖胞苷处理进行纯化，根据Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征，分析不同时期雪旺氏细胞的纯化程度。实验结果显示：培养４ｄ，倒置相差显微镜下观察，雪旺氏细胞呈典型的双极或三极形，端对端或旋涡状排列，Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色呈阳性反应，其比例约占９８％；在２～３周内，雪旺氏细胞的纯度维持在８５％～９０％；培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占８０％；单纯采用阿糖胞苷或差速贴壁处理，培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占７０％；原代培养９２ｄ，传代１１代细胞生长良好。实验结果表明，多种方法联合使用较单一方法所得的纯度高。本方法快速、简便，能为雪旺氏细胞作为移植材料提供足够的来源。

培养方法及胎牛血清浓度对人胎儿成纤维细胞体外生长的影响

采用单细胞培养法和组织块培养法从原代培养人胎儿成纤维细胞,并在不同体积分数胎牛血清(FBS)(0%、4%、8%、10%、12%)的条件下观察人胎儿成纤维细胞培养的状况并采用台盼蓝染色法进行活细胞计数.结果表明,早期由组织块培养法原代培养获取的细胞形态要比单细胞培养法原代培养获取的细胞稍好些,且在细胞传代后极少出现无法贴壁的死细胞.FBS对hFFs生长影响比较明显.在实际应用中,在体积分数8%FBS下,采用组织块培养法进行人胎儿成纤维细胞体外培养,效果良好.

人胎儿腭扁桃体隐窝上皮超微结构研究

以电镜观察第４～８月龄人胎儿腭扁桃体的超微结构。第４月龄扁桃体上皮开始形成上皮芽并长入其下的结缔组织形成隐窝；隐窝上皮内出现淋巴细胞、交错突细胞、巨噬细胞等浸润。随胎龄增长浸润细胞数量增多并渐扩展到上皮表层。第８月龄胎儿隐窝上皮表层有少数Ｍ细胞，具有较一般上皮细胞为多的微绒毛并以胞质突起包绕和覆盖淋巴细胞。隐窝上皮下结缔组织中常见淋巴细胞、巨噬细胞等；毛细血管较丰富，有的血管紧贴上皮基膜分布。扁桃体固有层中初级淋巴小结在第４月龄已渐形成，此后增大并成熟，小结间弥散淋巴组织区窄小，可见呈立方内皮的毛细血管后微静脉。

人胎儿骨髓基质干细胞的分离、体外培养和鉴定

目的 分离培养并鉴定人胚胎骨髓基质干细胞。方法 抽取流产胎儿股骨骨髓 ,Percoll离心纯化分离 ,取界面有核细胞培养。不同培养基培养对比 ,观察细胞生长曲线 ,免疫细胞化学鉴定细胞膜表面分子。结果 得到纯化率较高的骨髓基质干细胞 (MSCs) ,用αMED比DMEM和RPMI16 4 0原代培养生长速度快 ,第二代MSCs在上述三种培养基中倍增时间分别为 4 3h、5 4h、5 6h。免疫细胞化学结果 99%CD4 4 ( + )、98%Vim( + )、所有细胞CD34( - )、CD2 9( - )。结论 Percoll离心法成功地分离纯度较高的MSCs。MSCs在αMEM中培养增殖率比在DMEM和M 16 4

人胎儿小肠上皮内淋巴细胞分布及其计数

目的揭示人胎儿小肠上皮内淋巴细胞分布及其数量变化规律;方法采用HE染色的方法,观察62例10～38周人胎儿小肠上皮内淋巴细胞的分布并对其进行计数;结果绝大部分上皮内淋巴细胞分布在上皮细胞基底部,位于上皮细胞核下方,只有少数位于或超过上皮细胞核水平;上皮内淋巴细胞计数随胚胎发育而逐渐增多,从十二指肠到回肠,其数量逐渐减少。在35-38周胎龄时,十二指肠、空肠、回肠每100个绒毛上皮细胞范围内淋巴细胞的平均值分别达10.6、9.3和8.9;结论绝大多数上皮内淋巴细胞分布在上皮细胞核下方,其数量随胚胎发育而逐渐增多,从十二指肠到回肠,其数量逐渐减少。

碱性成纤维细胞生长因子在人胎儿肾脏发育中的表达及其调控作用

目的:观察人胎儿肾脏发育的形态变化,检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在胎儿肾脏发育中的表达,探讨bFGF在肾脏发育中的调控作用。方法:采用HE染色观察胎儿肾脏发育的形态变化,应用免疫组织化学SP法观察12、16、20、24、28周人胎儿肾脏组织内bFGF蛋白的表达。结果:HE染色显示,人胚12周时,肾小体大半为发育和成熟阶段肾小体,并有成熟肾小管形成;13～16周,成熟期肾小体进一步增多,肾小管数量也增多;17～24周,发育和成熟阶段肾小体所占比例明显增大,成熟期肾小体体积进一步增大,成熟期肾小管数量增多;至28周,大部分为成熟的肾小体和肾小管。免疫组化染色显示,bFGF于胎龄12周的胎儿肾脏开始有表达,不同胎龄均表达在肾小管和集合管上皮中,随着胎龄增加,肾脏发育的成熟及肾小管数量增加,表达逐渐增多,不同胎龄的部分肾小体也有表达。结论:bFGF可能对人胎儿肾脏的发育和成熟具有重要的调控作用。

人胎儿晶状体上皮细胞增殖及相关因子的动态研究

目的观察增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子（ＥＧＦ）在人胎儿晶状体上皮细胞的表达，并探讨其在晶状体发育中的作用。方法用ＳＰ免疫细胞化学法对４８例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行ＰＣＮＡ，ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ免疫细胞化学染色。结果ＰＣＮＡ，ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞内均有表达；免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少。ＰＣＮＡ阳性细胞核为桔黄色或棕黄色；ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状；经相关分析，ＴＧＦ－β１与ＥＧＦ以及ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ与ＰＣＮＡ均呈正相关。结论ＰＣＮＡ，ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞内均有表达；ＴＧＦ－β１，ＥＧＦ具有协同作用，共同促进晶状体上皮细胞的增殖。

人胎儿垂体生长激素的个体发生

目的 :了解人胎儿生长激素合成和分泌的个体发生。方法 :采用原位杂交化学方法测定 2 8例 16～ 32周胎儿垂体生长激素信使核糖核酸 (GHm RNA) ,用放射免疫分析法测定血清生长激素 ,甲状腺素、皮质醇和胰岛素的浓度。结果 :(1) GHm RNA的含量随胎龄逐渐增加 ,到 2 4～ 2 6周达高峰。(2 )血清生长激素的浓度不恒定 ,有随胎龄增加而上升的趋势。 (3)血清甲状腺素浓度和血清皮质醇的浓度与垂体生长激素 GHm RNA含量正相关 ,而与血清生长激素浓度无关。结论 :胎儿生长激素的合成和分泌在胎儿 2 4周左右较为成熟。皮质醇、甲状腺素在生长激素的个体发生中起一定作用。

人胎儿卵细胞凋亡及其凋亡蛋白Caspase-3表达的临床意义

目的 探讨人胎儿卵泡形成过程中卵细胞凋亡及其凋亡蛋白 Caspase- 3的表达意义。方法 收集13例行水囊引产终止妊娠的胎儿卵巢 ,其中孕中期 (2 0～ 2 8孕周 ) 7例 ,孕晚期 (2 9～ 38孕周 ) 6例。利用原位末端标记法 (TUNEL法 )和免疫组化法观察胎儿卵泡形成过程中卵细胞凋亡及其凋亡蛋白 Caspase- 3的表达。结果 部分胎儿卵细胞末端标记阳性 ,孕中期卵细胞凋亡指数 [(9.8± 1.2 ) % ]大于孕晚期 [(3.1± 1.0 ) % ],P<0 .0 1。凋亡相关蛋白 Caspase- 3在胎儿卵细胞内广泛表达 ,孕中期阳性单位 (36 .6± 3.1)大于孕晚期 (2 0 .2± 2 .6 ) ,P<0 .0 1。Caspase- 3表达与卵细胞凋亡呈正相关。结论 胎儿卵泡形成过程中卵细胞发生凋亡 ,导致生殖细胞丢失 ,凋亡蛋白 Caspase-

猴及人胎儿延髓内脏带的化学神经解剖学

本实验采用免疫组织化学ＡＢＣ法，观察儿茶酚胺类（以酪氨酸羟化酶－ＴＨ作标记物）、５－羟色胺及神经肽（Ｐ物质、亮氨酸－脑啡肽、胆囊收缩素、神经肽Ｙ、生长抑素）在猴及人胎儿延髓内脏带的分布及形态特点。结果发现，上述物质均程度不同地集中分布于猴及人胎儿延髓内脏带，即位于延髓中尾段的一条从背内侧至腹外侧的弧形带状区。这表明猴及人胎儿延髓内脏带是一个相对独立的机能结构区，其化学构筑具有独特特点。

人胎儿和新生儿脊髓和DRG内nNOS阳性神经元的表达和分布

目的 :观察 2 4～ 2 7w人胎儿和新生儿的脊髓和背根神经节 (DRG)内神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)阳性神经元的表达和分布。方法 :ABC免疫细胞化学方法。结果 :( 1 ) 2 4～ 2 7w人胎儿胸髓和腰 1～ 3节段的中间带外侧核和前角Ⅷ层和Ⅸ层内可观察到nNOS阳性神经元。颈、胸、腰各段DRG内nNOS免疫阳性神经元占DRG细胞总数的 84%～ 88%。 ( 2 )新生儿脊髓和DRG内nNOS免疫阳性神经元的分布情况与上述胎儿相似。但DRG内nNOS免疫阳性神经元的体积有所增加 ,数量明显减少 ,约占DRG细胞总数的 70 %～ 73 %。结论 :人胎儿脊髓和DRG在发育的 2 4～ 2 7w至出生时 ,nNOS阳性神经元的表达在定位分布上无差异 。

人胎儿中枢神经系统生长抑素与胃动素的发生及分布研究

应用ＲＩＡ法系统测定１５例胎儿中枢神经系统（ＣＮＳ）组织中的生长抑素（ＳＳ）和胃动素（ＭＴＬ）含量。发现人胚胎ＣＮＳ各组织中均有不同浓度的ＳＳ及ＭＴＬ存在，ＳＳ浓度普遍高于ＭＴＬ（Ｐ＜０．０１），其中ＳＳ含量以下丘脑最高（Ｐ＜０．０１），ＭＴＬ水平各组织间无显著性差异，在垂体ＭＴＬ出现早于１６周，ＳＳ晚于２２周，其它部位则ＳＳ出现早于１６周，ＭＴＬ晚于２２周。随胚胎发育，ＳＳ的发展呈不同趋势：①下丘脑ＳＳ浓度与胎龄呈正相关（ｒ＝０．７３４５，Ｐ＜０．０１）。②垂体、延髓与脊髓ＳＳ波动在一定水平，无显著变化。③大脑皮层和小脑ＳＳ呈先升高后下降趋势，ＭＴＬ的发展则随胎龄呈一致性升高。提示人胎儿的ＣＮＳ中ＳＳ与ＭＴＬ的发生，发展及分布存在不同规律。

人胎儿脾脏T细胞表型分析

本文研究了人胎儿脾脏T细胞的表型,结果显示:(1)胎儿脾脏T细胞比例偏低,TCRαβ+T细胞占CD 3+T细胞的84.5％;(2)CD4/CD8比值和胎龄成正相关,这提示抑制性T细胞在自身耐受形成中可能具有重要意义;(3)胎儿脾细胞的74％表达CD38抗原。

人胎儿呼吸道肥大细胞的组化特征及其与其它细胞的关系

用组织化学技术方法 ,我们对 5 0例不同胎龄人胎儿的鼻粘膜和气管的组织内的肥大细胞组织化学特征以及其与周围其它细胞的关系进行了研究。结果发现 :随着胎龄的增加 ,肥大细胞的颗粒甲苯胺蓝 (TB)染色时从浅紫色加深至深紫色 ,Alcian蓝·藏红 (AB· S)染色呈从蓝色到出现红色、红蓝混合染色的变化 ,临界电解质浓度 (CEC)值和硫酸小蘖碱荧光染色强度逐渐增高 ;多见肥大细胞与成纤维细胞、淋巴细胞和毛细血管内皮等密切接触 ,且出现在神经内、外膜之中。这提示 :1肥大细胞的发育成熟与胎儿呼吸道器官的发育是相关的。 2肥大细胞可能参与细胞、组织的分化成熟。

人胎儿胸腺内bc1－2基因表达与分布

采用免疫酶组织化学与地高辛标记的单链ｃＤＮＡ探针原位杂交技术，研究了抗凋亡基因ｂｃｌ－２在人胎儿胸腺组织中的表达与分布。结果ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ及其蛋白均优势定位于髓质区。提示胸腺中ｂｃｌ－２基因表达调控发生在转录水平；ｂｃｌ－２基因介导的细胞凋亡状态可能参与Ｔ淋巴细胞的成熟过程。