人胎儿真皮间充质干细胞对人恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用观察

目的 观察人胎儿真皮间充质干细胞(FDMSCs)对人恶性黑色素瘤细胞(A375细胞)增殖、迁移、侵袭的抑制作用。方法 通过酶消化法从16~20孕周的人意外流产健康胎儿的背部皮肤中提取FDMSCs,并进行鉴定。选取A375细胞并分为3组,F-CM组加入FDMSCs条件培养基,A-CM组加入成人真皮成纤维细胞条件培养基,Control组加入DMEM低糖空白培养基,利用CCK-8细胞增殖实验、划痕细胞迁移实验、细胞侵袭实验测算各组细胞相对活力、细胞迁移率、侵袭细胞数。结果 FDMSCs可以从人胎儿皮肤中成功提取并体外培养,阳性表达间充质干细胞(MSCs)特异性标记CD44、CD90、CD105及胚胎组织特异性标记SSEA-4、OCT-4,且具备成脂、成骨、成软骨的多向分化能力。与Control组比较,F-CM组细胞相对活力下降,细胞迁移率低,侵袭细胞数少(P均<0.05)。结论 FDMSCs可抑制A375细胞的增殖、迁移和侵袭。

胎儿附属物来源间充质干细胞应用于新生儿缺氧缺血性脑病的研究

与成人组织来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)相比,胎儿附属物来源间充质干细胞具有不可忽视的优势,如容易获得、无侵袭性、感染风险低、年龄相关性突变率低等。以脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC?MSCs)为代表的胎儿附属来源的MSCs具有来源丰富、容易提取、倍增时间短、免疫原性低、移植后长时间存活等多种优点,可以根据生物医学应用的要求,分化成各种细胞谱系,已广泛应用于临床各系统疾病。新生儿缺氧缺血性脑病(neonatal hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)是围生期窒息导致的缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD),是新生儿死亡和遗留神经系统后遗症的主要原因。目前的治疗方案除全身支持治疗外,尚无更有效的治疗方式。

胎鼠真皮间充质干细胞对小鼠巨噬细胞极化的影响

目的:探究胎鼠真皮间充质干细胞(Fetal mice dermal mesenchymal stem cells,FDMSCs)对M1/2型巨噬细胞极化的影响。方法:本研究提取FDMSCs,利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、γ干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)刺激RAW 264.7诱导为M1型巨噬细胞,利用白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)刺激RAW264.7诱导为M2型巨噬细胞,并建立了FDMSCs-RAW 264.7共培养体系。共培养24 h后,收集巨噬细胞,用实时定量PCR和流式细胞学检测M1/2型巨噬细胞特征性因子白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、诱导性一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD86、白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、精氨酸酶1(Arg-1)、CD206的表达变化。结果:FDMSCs使M1型巨噬细胞表达的IL-6、iNOS、CD86减少,IL-10、CD206增多;使M2型巨噬细胞表达的IL-10、Arg-1、CD206表达增多,iNOS表达减少。结论:FDMSCs可以通过调控巨噬细胞极化来调控伤口愈合,对于探索FDMSCs在创面治疗过程中的免疫调节机制有积极意义。

胎儿真皮间充质干细胞中的全能性相关转录因子的表达

背景:人真皮纤维母细胞或间充质干细胞可形成诱导性多能干细胞,但不同研究者所用的转录因子组合却并不相同。目的:分离人胎儿真皮间充质干细胞,检测其全能性相关转录因子的表达。方法:水囊引产5月龄胎儿,按照既往分离培养间充质干细胞的方法,得到胎儿真皮间充质干细胞。结果与结论:胎儿真皮间充质干细胞高表达Oct4和C-myc、中度表达Sox2,是形成诱导性多能干细胞较好的体细胞。

胎儿真皮间充质干细胞的生物学特征和多向分化的研究

近年来,间充质干细胞(MSCs)的研究已成为生物学领域的热点课题.目前已经在骨髓、肝、脾、肺、肌肉、脑组织中证实有MSCs的存在[1,2].皮肤作为人体最大的组织,可以提供大量的种子细胞,并且取材方便,但关于皮肤来源MSCs的研究报道很少.

胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状研究

为研究胎儿骨髓和肝脏间充质干细胞的表型和生物学性状 ,取胎龄为 4 - 5个月水囊引产胎儿 ,将骨髓和肝脏细胞在SF(含 2 %FCS)培养基中培养 ,进行电镜观察 ,测定生长曲线 ,用流式细胞术对培养细胞进行表型测定 ,细胞周期分析 ,用SA方法测定Ⅰ ,Ⅲ型胶原和vWF因子表达。结果表明 :从胎儿骨髓和肝脏培养出的间充质干细胞 ,两者在形态学、生长特性、免疫表型上是相似的 ,肝脏间充质干细胞有更好的支持造血的功能。结论提示 ,从胎儿骨髓和肝脏可分离培养出间充质干细胞 ,在体外有效扩增且保持其低分化状态。

血管内皮生长因子165基因修饰人骨髓间充质干细胞复合兔脱细胞真皮基质构建活性组织工程皮肤

背景:利用组织工程原理构建的人工皮肤替代物用于皮肤移植可有效解决供皮不足这一难题,但组织工程皮肤很大程度上受制于移植物血管网缺乏造成的细胞供养障碍而导致失效。目的:以血管内皮生长因子165基因修饰的人骨髓间充质干细胞复合兔脱细胞真皮基质,拟构建活性组织工程皮肤。设计、时间和地点:以基因工程为基础的组织构建实验,于2008-03/06在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。材料:普通级新西兰大白兔5只用于提取脱细胞真皮基质原料,由南昌大学医学院动物科学部提供,人骨髓间充质干细胞取自临床骨髓穿刺检查正常的患者,pShuttle-CMV/VEGF165质粒转化大肠杆菌菌种由武汉协和医院郜勇博士惠赠。方法:无菌条件下切取兔耳全层皮肤,将2cm×2cm皮片置于0.25%胰酶-EDTA消化液中去掉表皮,再置入曲拉通X-100溶液使真皮细胞完全脱净,磷酸盐缓冲液反复清洗,即为脱细胞真皮基质,4℃保存备用。采用密度梯度离心与贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,取传至第3代细胞,按5×105/孔密度接种,待细胞达80%融合时进行脂质体介导的pShuttle-CMV/VEGF165质粒转染,接种于制备好的脱细胞真皮基质上体外联合培养。主要观察指标:骨髓间充质干细胞与脱细胞真皮基质的形态观察,组织工程皮肤结构观察。结果:体外培养的骨髓间充质干细胞大部分呈梭形,基因转染后细胞形态及活性无明显影响;脱细胞真皮基质呈瓷白色,柔韧有弹性。血管内皮生长因子165基因修饰的骨髓间充质干细胞与脱细胞真皮基质共培养2d后,所构建的组织工程皮肤呈淡红色,质软,接种细胞生长状态正常,苏木精-伊红染色及扫描电镜观察可见在脱细胞真皮基质的间隙中有大量长梭形细胞附着生长。结论:血管内皮生长因子165基因转染的人骨髓间充质干细胞在兔脱细胞真皮基质中生长良好,可在体外联合构建活性组织工程皮肤。

大鼠真皮多能间充质干细胞的分离培养

目的 探讨发育成熟高等动物真皮组织中是否存在多能间充质干细胞 ,对其进行分离培养并初步研究其基本生物学性状。方法 以新生大鼠为研究对象 ,依据间充质干细胞的黏附特性采用酶消化法对其分离 ,通过传代培养进行筛选 ;流式细胞技术检测细胞周期 ,MTT法检测细胞对生长因子的反应性 ,免疫组织化学法检测细胞表面分子的表达。结果 早期贴壁的大鼠真皮细胞经过连续传代培养至第 3代 ,细胞形态较为均一 ,超过 88%的细胞处于G0 /G1期 ,细胞表面波形蛋白表达阳性 ,但Ⅷ因子和角蛋白表达阴性 ;体外培养细胞增殖旺盛 ,对bFGF有良好反应性 ,但对EGF和KGF反应不明显 ;地塞米松诱导分化实验证实该细胞可向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化 ,具有多向分化潜能。结论 本实验证实发育成熟大鼠真皮组织中存在多能干细胞 ,成功地分离得到真皮来源的间充质干细胞并通过其基本生物学特性进行了鉴定。上述结果提示真皮有可能是间充质干细胞的又一重要来源途径。这为深入研究真皮间充质干细胞在组织修复与再生中的意义与应用提供了基础。

干扰素-γ对人胎盘胎儿来源间充质干细胞免疫调节功能的影响

目的:从人胎盘组织中分离胎儿来源间充质干细胞(MSCs),并探讨干扰素-γ(IFN-γ)对人胎盘胎儿来源间充质干细胞(hfPMSCs)免疫调节功能的影响。方法:采用酶消化法分离人胎盘胎儿侧MSCs,通过流式细胞仪检测细胞表面分子CD73、CD90、CD105、CD14、CD34、CD45和HLA-DR,并利用D2S1399、D10S2325、D18S535和GATA198B05四个STR基因座对细胞属性进行鉴定分析;10 ng/mL IFN-γ诱导处理后,利用定量PCR(q-PCR)和ELISA分别测定对照组hfPM-SCs和IFN-γ处理后hfPMSCs IL-6、IL-8、IL-10和HGF基因及蛋白表达水平。结果:所分离细胞表达CD73、CD90和CD105,不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR,并分别具有来自亲本双方上述四个STR位点的等位基因。IFN-γ处理后,hfPMSCs IL-6 mRNA的表达水平显著提高(P<0.05),而IL-10和HGF的表达水平被下调(P<0.05)。ELISA结果表明IL-6蛋白表达水平显著升高,IL-8、IL-10和肝细胞生长因子的表达量降低(P<0.05)。结论:本研究成功的从人胎盘组织中分离和培养出hfPMSCs,且IFN-γ对其免疫抑制功能具有负调控效应。

重建端粒酶活性延长胎儿肌肉源间充质干细胞寿命并维持其成神经潜能

目的 :通过重建端粒酶活性延长胎儿肌肉源间充质干细胞寿命 ,并对其成神经潜能进行研究 ,为组织工程神经修复提供种子细胞。方法 :将人端粒酶催化亚基 (hTERT)基因通过脂质体转染法导入胎儿肌肉源间充质干细胞 ,RT PCR检测hTERTmRNA的表达 ,TRAP PCR检测细胞端粒酶活性。用bFGF诱导已重建端粒酶活性的肌肉源间充质干细胞向神经细胞分化 ,免疫荧光及免疫印迹法检测分化情况。结果 :转染hTERT的胎儿肌肉源间充质干细胞能稳定表达端粒酶活性。转染后传 75代的细胞经bFGF诱导仍维持着自我更新及向神经细胞分化的潜能 ,且无恶性转化倾向。结论 :重建端粒酶活性可延长胎儿肌肉源间充质干细胞寿命并维持自我更新及成神经潜能 。

早产胎儿脐血和脐带间充质干细胞分离培养的比较

目的对比早产胎儿脐血和脐带间充质干细胞(MSCs)的培养成功率,探讨早产胎儿MSCs获取的最佳途径。方法无菌条件下采集早产胎儿(不足37周)脐血,密度梯度离心法分离单个核细胞,采用贴壁培养法获得脐血MSCs;将脐带剪成1 mm3大小组织块,采用组织块贴壁法获得脐带MSCs;分别观察脐血和脐带MSCs的生物学特性,免疫荧光法检测MSCs表面标记物的表达情况。结果采用MesencultTM培养基,早产胎儿脐血MSCs培养成功率为100%,脐带MSCs培养成功率为67%,明显低于脐血MSCs;早产胎儿脐血和脐带MSCs均表达CD29、CD44和CD90,不表达造血干细胞表面标志CD34。结论早产胎儿脐血中较易获得MSCs,为临床移植治疗提供了理想的细胞来源。

密度梯度离心与贴壁筛选法体外分离培养胎儿骨髓间充质干细胞

背景:胎儿骨髓间充质干细胞与成人相比,具有更好的自我更新和分化能力,以及更低的免疫原性。目的:选择更适应胎儿骨髓间充质干细胞体外分离培养的方法。设计、时间及地点:单一样本细胞学观察,于2005-06/12在中山大学附属第三医院中心实验室完成。材料:16～24周胎龄的流产胎儿由中山大学附属第三医院妇产科提供,产妇及家属均签署知情同意书。方法:无菌条件下截取流产胎儿双侧四肢骨,PBS冲洗髓腔,离心去脂肪及上清液,L-DMEM重悬细胞,沿管壁缓慢滴加至底部有等量1.073g/mLPercoll分离液的离心管中,离心后吸取中间界面白膜层,加入含体积分数为10%的胎牛血清、青霉素钠、链霉素的L-DMEM完全培养基,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱内培养。48h后换液,去除未贴壁细胞,以后每2d换液一次。待细胞达到80%～90%融合时,胰酶-EDTA消化传代。主要观察指标:倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力。结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力。胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆少,染色质较疏松,表现出早期细胞的特点,传至第20代细胞超微结构仍无明显改变。细胞表面抗原CD29,CD44,CD105呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达。骨髓间充质干细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原均呈阳性。结论:利用密度梯度离心+贴壁筛选法可成功分离培养胎儿骨髓间充质干细胞,所获细胞能够向成骨细胞及软骨细胞分化,该方法为体外培养扩增胎儿骨髓间充质干细胞的简单、稳定、高效的手段。

人胎儿骨髓间充质干细胞的分离及生物学鉴定

通过原代细胞培养,从引产胎儿骨髓组织中分离干细胞,然后进行生物学鉴定,旨在体外建立培养胎儿骨髓干细胞的有效方法,为进一步研究干细胞奠定基础．本研究对四个月的引产胎儿骨髓组织进行原代细胞培养,采用贴壁筛选法,在含有15％胎牛血清的L-DMEM／IMDM(1:1)混和培养液中培养,7 d后细胞可长满瓶底．显微镜下观察,细胞形态均一,呈长梭形．传代后,在8代以内的细胞贴壁能力较强,生长速度较快．将其命名为BMMS-03．在第3代时,对培养的细胞进行了于细胞标志物的生物学鉴定,采用流式细胞仪对经免疫荧光染色的细胞进行检测．结果显示:97．2％的细胞呈CD105阳性反应,66．0％的细胞呈CD106阳性反应, 9．2％的细胞呈CD34阳性反应．阴性对照组阳性反应为0．5％．生物学鉴定的初步结果提示,从胎儿骨髓组织中分离培养成功的细胞为骨髓间充质干细胞,其细胞形态学特征、CD105+、CD106+和CD34-的检测结果均符合间充质干细胞的特征．本研究成功地建立了体外培养胎儿骨髓间充质干细胞的有效方法,所获得的间充质干细胞纯度较高,增殖较快,适用于干细胞生物学和组织工程学的研究．

胎儿肠壁结缔组织诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞(英文)

背景:间充质干细胞具有多向分化能力,在体外能诱导分化为上皮细胞,而胚胎原始消化管上皮的分化受肠壁间充质的诱导。肠壁结缔组织能否诱导骨髓间充质干细胞分化形成上皮细胞,尚不明确。目的:观察胎儿肠壁结缔组织能否诱导骨髓间充质干细胞分化形成上皮细胞。设计:体外培养,对比观察。单位:实验于2004-07/2006-07在重庆医科大学组织胚胎学教研室完成。材料:表皮生长因子为Sigma公司产品;CK,CK20为中山生物有限公司产品。收集四五个月流产胎儿标本6例的四肢骨髓,Ficoll离心,分离、培养、扩增获取骨髓间充质干细胞。取胎儿十二指肠乳头以下肠段,剥去肌层和外膜,酶消化去除上皮,剪成约15 mm×5 mm的组织块。胎儿标本由临床学院妇产科提供,产妇同意提供胎儿用于实验,实验经医院伦理委员会批准。方法:实验分4组进行:干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组分别将DAPI标记的第3代骨髓间充质干细胞(3×104)个移植于肠壁结缔组织块的黏膜下层表面;干细胞组和干细胞+表皮生长因子组为骨髓间充质干细胞爬片;其中干细胞移植+表皮生长因子组和干细胞+表皮生长因子组加入终浓度为10μg/L表皮生长因子;4组均体外培养12 d。主要观察指标:①用荧光显微镜观察DAPI标记的骨髓间充质干细胞的形态及分布。②干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组组织块培养12 d后,采用苏木精-伊红染色观察与荧光显微镜观察同一肠壁结缔组织表面细胞形态。③免疫组化染色检测标记细胞CK及CK20的表达,以及肠壁结缔组织是否表达表皮生长因子。④高碘酸-希夫反应(PAS反应)检测DAPI标记细胞与结缔组织间有无基膜样物质产生。结果:①荧光显微镜下干细胞移植组和干细胞移植+表皮生长因子组的组织块表面均有DAPI标记的荧光阳性细胞,苏木精-伊红染色显示该部位细胞呈上皮样形态,而且在培养时经多次换液未被洗去为长在结缔组织表面的细胞。②免疫组织化学染色显示两组组织块表面的细胞均可表达CK及CK20。③免疫荧光染色显示组织块表面的细胞同时有标记细胞核的DAPI蓝色荧光与标记CK的红色荧光,表明DAPI标记的骨髓间充质干细胞已经分化为上皮细胞。④干细胞组细胞CK及CK20阴性,而干细胞+表皮生长因子组则为阳性,提示表皮生长因子有诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞的作用。⑤PAS反应显示在标记细胞与结缔组织之间有基膜样结构糖蛋白出现。未经培养的结缔组织组织块内有表皮生长因子表达。结论:表皮生长因子和胎儿肠壁结缔组织在体外均能诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞;肠壁结缔组织中的表皮生长因子可能是结缔组织诱导骨髓间充质干细胞分化为上皮细胞的因素之一。

真皮来源间充质干细胞的分离培养及成神经分化的研究

目的:研究真皮来源间充质干细胞的分离培养方法及其向神经细胞分化的条件及可行性。方法:取大鼠真皮组织,采用贴壁传代培养筛选法,分离培养真皮间充质干细胞,流式细胞术检测细胞周期,经β-巯基乙醇诱导,倒置显微镜下观察细胞形态变化,免疫细胞化学方法对分化细胞进行鉴定。结果:分离的早期贴壁的真皮来源间充质干细胞经过连续传代培养至第4代,细胞形态较为均一,86%的细胞处于G0/G1期,细胞表面波形蛋白表达阳性,但因子Ⅷ和角蛋白表达阴性。经β-巯基乙醇诱导,真皮间充质干细胞可向神经细胞分化,细胞突起增多,具有神经元的形态学特征,分化后的细胞表达神经元标志物——神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经微丝(NF-200)。结论:大鼠真皮组织中存在着成体多能干细胞,一定条件下可分化为神经元。提示真皮可能是成体多能干细胞的又一来源,有望在神经组织修复和再生中发挥作用。

胎儿肺脏来源间充质干细胞的鉴定与损伤修复的实验研究

目的 :为研究胎儿肺脏来源间充质干细胞的生物学性状 ,表型和多向分化能力。方法 :取胎龄为 4～ 5个月水囊引产胎儿 ,将肺脏细胞在SF(含 2 %FBS)培养基中培养。测定生长曲线、利用流式细胞仪对培养细胞进行表型测定 ,细胞周期分析 ,体外诱导分化实验。NOD SCID鼠放射损伤后 ,尾静脉输入经PKH2 6染色的间充质干细胞 ,两个月后检测外源细胞在肺脏的定植情况。结果 :从胎儿肺脏可培养出间充质干细胞 ,并可诱导成骨、软骨和脂肪细胞分化 ;移植两个月后可以检测到外源细胞在肺脏的定植。结论 :从胎儿肺脏可分离培养出间充质干细胞 ,在体外有效扩增且保持其低分化状态 ;间充质干细胞可以在肺脏长时间定植。

骨髓间充质干细胞复合组织工程化脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤

目的:体外培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),复合组织工程化脱细胞真皮基质构建组织工程皮肤,为进一步临床应用奠定基础。方法:将SD大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养扩增后,以生长状态良好的骨髓间充质干细胞接种于制备好的组织工程化脱细胞真皮支架上,进行体外联合培养,构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及组织工程皮肤结构。结果:体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞生长良好,传代扩增容易,组织工程化脱细胞真皮基质去细胞完全,骨髓间充质干细胞在脱细胞真皮基质中生长良好,可体外构建组织工程皮肤。结论:利用体外扩增培养的骨髓间充质干细胞及制备的组织工程化脱细胞真皮基质可以体外联合构建组织工程皮肤。

真皮多能间充质干细胞对毛囊生长的影响

目的:了解真皮多能间充质干细胞对毛囊生长的作用及可能的作用机制。方法:去真皮成分毛囊与真皮多能间充质干细胞共同培养,每天检测毛囊的生长长度,以毛乳头细胞及真皮成纤维细胞分别为阳性及阴性对照组,并用免疫组化检测真皮多能间充质干细胞表达的细胞生长因子。结果:在两周内,真皮多能间充质干细胞及毛乳头细胞组毛囊生长净长度分别0.92,0.89mm,而成纤维细胞组为0.29mm;统计学显示干细胞组和毛乳头细胞组之间差异无显著性意义(χ2=1.38P>0.05),与成纤维细胞组之间有明显差异(χ2=7.34P<0.01);免疫组化显示真皮多能间充质干细胞表达肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮细胞生长因子。结论:真皮多能间充质干细胞能支持毛囊的生长,具有毛乳头细胞促进毛囊生长的功能,其作用基础可能与分泌多种细胞生长因子有关。

人脱细胞真皮复合骨髓间充质干细胞构建组织工程皮肤修复皮肤创面缺损

背景:构建组织工程皮肤的种子细胞和支架材料多种多样,探索更为合适的构建方法亦是国内外专家学者争相研究的热点。目的:探讨组织工程皮肤促进大鼠皮肤缺损创面愈合的可行性。方法:选用6-8周龄SD大鼠,采用全骨髓贴壁培养法分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞。利用人包皮为材料,采用酶消化法制作脱细胞真皮。以骨髓间充质干细胞为种子细胞,脱细胞真皮为支架材料,构建组织工程皮肤,将其覆盖于SD大鼠皮肤缺损创面,另设置单纯移植脱细胞真皮组和空白对照组。记录创面愈合时间并计算创面闭合指数。移植2周后创面取材行苏木精-伊红染色,CK19及Brd U免疫组织化学染色,以评价创面的愈合情况。结果与结论:(1)3组创面闭合指数:组织工程皮肤组>脱细胞真皮组>空白对照组,组间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);(2)3组创面愈合时间:组织工程皮肤组<脱细胞真皮组<空白对照组,组间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);(3)组织工程皮肤组有Brd U阳性细胞表达,组织工程皮肤组CK19表达显著高于脱细胞真皮组、空白对照组;(4)结果表明,应用骨髓间充质干细胞与脱细胞真皮构建的组织工程皮肤对全层皮肤缺损创面具有很好的促进愈合作用。

胎儿骨髓间充质干细胞生物学特征及荧光标记

目的:探讨分离、培养、扩增和荧光标记胎儿骨髓间充质干细胞(Bore mesenchymal stem cell,BMSCs)的方法及其生物学特征。方法:取4～5个月胎儿四肢骨骨髓,Ficoll离心、贴壁筛选法分离BMSCs,体外扩增,传至第12代。检测BMSCs的生长曲线,细胞周期和细胞表型,酶活性及糖原含量,以及DAPI标记BMSCs的标记率。结果:(1)BMSCs主要呈长梭形,漩涡状排列。传代细胞生长快于原代细胞,12代后的细胞出现衰老征象;(2)流式细胞术检测第3、8代细胞表达CD29、CD71,不表达CD34、HLA-DR;G0和G1期细胞约为93.73%,S、M和G2期为6.27%;(3)第5代细胞的非特异性酯酶及糖原均为阳性,碱性磷酸酶为弱阳性;(4)DAPI标记后的BMSCs生长正常,标记率为100%,后逐渐减弱,3周时标记率仅15%。结论:分离获得的胎儿BMSCs具有MSCs的特征。DAPI标记是短期示踪BMSCs的有效方法。