人胎盘源性间充质干细胞体外分离培养及多向分化潜能的研究

为体外分离培养人胎盘源性的间充质干细胞,并对其生物学特性进行研究。采用组织块贴壁培养法分离培养获取胎盘源性间充质干细胞.通过培养扩增后用流式细胞仪检测细胞周期及免疫表型,在体外诱导其向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞方向分化,并通过特异性染色鉴定其分化能力。结果显示采用组织块贴壁法能成功获得贴壁生长的成纤维样人胎盘源性间充质干细胞;流式细胞术分析结果示,人胎盘源性间充质干细胞高表达CD29、CD44,阴性表达CD34、CD133、HLA-DR及vWF,细胞周期结果示,G0/G1期细胞约占77%;经向脂肪细胞诱导后油红O染色阳性,向成骨细胞诱导后茜素红染色为阳性,向神经细胞诱导后,NSE表达阳性。由此可知,人胎盘中富含间充质干细胞,与其他来源的间充质干细胞的生物学特征相似。

TGF-β信号通路对牙源性黏液瘤来源的间充质干细胞成骨分化的影响分析

目的探究转化生长因子-β(TGF-β)信号通路对牙源性黏液瘤(OM)来源的间充质干细胞(OMMSC)成骨分化的影响。方法选择2018年至2020年南京大学医学院附属口腔医院收治的OM患者2例,经手术取部分病灶标本进行OMMSC分离培养。另外选择于该院接受牙种植治疗的年轻患者5例,抽取颌骨骨髓进行颌骨骨髓来源的间充质干细胞(JBMSC)分离培养。通过细胞增殖实验、流式细胞术检测、茜素红S染色进行细胞鉴定。成骨培养7 d后通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β信号通路以及成骨相关基因的表达情况。观察小分子药物SB431542及TGF-β1干预对OMMSC、JBMSC成骨分化能力的影响。结果经分离获得的OMMSC、JBMSC具有梭形形态,表达间充质干细胞表面标志物,并具有成骨分化能力,符合间充质干细胞的特征。与JBMSC相比,OMMSC具有更强的增殖能力。RT-PCR检测结果显示,TGF-β/Smad信号相关因子在OMMSC中呈高表达(P<0.05),成骨相关因子骨桥蛋白(OPN)表达降低(P<0.05)。茜素红S染色结果显示SB431542可显著促进OMMSC成骨分化,而TGF-β1对OMMSC成骨分化有抑制作用。结论该研究成功对OMMSC进行了分离,发现TGF-β信号相关因子在OMMSC中呈高表达,抑制TGF-β信号转导通路可增强OMMSC的成骨能力,为改善OM患者骨缺陷提供参考。

胎盘间充质干细胞促进大鼠急性皮肤创面修复

背景:目前已有多种间充质干细胞被证实具有促进创面修复的作用,但胎盘间充质干细胞是否可促进急性皮肤创面愈合目前尚缺乏相关研究。目的:探讨胎盘间充质干细胞移植对大鼠急性皮肤损伤愈合的影响。方法:20只SD大鼠采用随机数字表法分为PBS组、干细胞组,每组10只。所有大鼠建立全层皮肤缺损模型,PBS组、干细胞组于建模后即刻和第8天在创面及创缘分别注射PBS、胎盘间充质干细胞。建模后即刻及2,4,6,8,10,12,14 d观察创面愈合情况,在14 d时取大鼠创面处皮肤组织,进行苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组织化学染色及免疫荧光染色。结果与结论:①各组大鼠创面均随治疗时间延长而缩小,干细胞组14 d时创面愈合率、创面上皮化率高于PBS组(P<0.01),创面挛缩比率低于PBS组(P<0.01);②苏木精-伊红染色结果显示,干细胞组皮肤创面修复优于PBS组,创面上皮化程度更高,胶原纤维形态更接近正常皮肤;③Masson染色结果显示,与PBS组相比,干细胞组皮肤创面组织中胶原纤维明显增多且粗大,新生组织内胶原纤维含量更多(P<0.01);④免疫组化染色显示,干细胞组新生毛细血管数量多于PBS组(P<0.01),而肿瘤坏死因子α与白细胞介素6的表达低于PBS组(P<0.01);⑤免疫荧光染色显示,干细胞组新生创面内的M2型巨噬细胞数多于PBS组(P<0.01),M1型巨噬细胞数少于PBS组(P<0.01)。结果表明,胎盘间充质干细胞可加速皮肤创面修复、促进创面上皮化、减轻创面挛缩,可能与促进创面内毛细血管新生、调节胶原纤维生成、抑制炎症、调控巨噬细胞向M2型极化有关。

牙源性间充质干细胞外泌体在牙髓再生中的作用机制

牙髓再生是一种基于组织工程治疗牙髓坏死的新策略,应用种子细胞结合支架和生长因子,实现牙本质、血管和神经的新生。外泌体是一类直径约为30~150 nm的细胞外囊泡,在调控细胞间信息和物质传递中发挥重要作用。2016年以来,牙源性间充质干细胞分泌的外泌体因其在牙髓组织再生领域展现出的巨大潜力而备受瞩目。本文介绍了牙源性间充质干细胞来源外泌体的种类和培养环境,并对牙源性间充质干细胞外泌体调控细胞成牙本质向分化、血管生成、神经再生和成骨向分化的作用和机制作一综述。

牙源性间充质干细胞外泌体在组织再生中的研究进展

再生医学致力于研究如何促进创伤后组织再生和功能重建,主要利用干细胞疗法和组织工程技术来维持、修复、再生或改善受损组织和器官的功能。间充质干细胞是一种具有多向分化和再生能力的祖细胞,被广泛应用于再生医学和组织工程领域。特别是牙源性间充质干细胞,由于获取方便且不存在复杂的伦理问题,已成为研究的热点。牙源性间充质干细胞具有多种分化潜能,被视为组织再生工程的种子细胞,广泛应用于组织工程和再生医学领域。此外,间充质干细胞可通过旁分泌途径促进受损组织再生修复,外泌体是其主要分泌物之一。越来越多的证据表明,牙源性间充质干细胞外泌体在多种疾病和损伤模型中能促进组织再生。

牙源性间充质干细胞来源的外泌体在牙周免疫调节的研究进展

外泌体(exosomes,EXOs)是细胞间通讯的重要介质,其内含有多种物质,包括miRNA、mRNA、DNA和蛋白质等,可通过多种方式作用于靶细胞。外泌体作为“无细胞治疗”手段,具有广阔的医学应用前景。EXOs的内含物随供体细胞及其状态的变化而变化,因此来自不同类型细胞的EXOs可能表现出不同的生物学效应。牙源性间充质干细胞来源的EXOs因其在组织再生医学和免疫调节领域表现出的生物学特性而受到越来越多的关注。在牙周免疫调节过程中促炎型(M1型)/抗炎型(M2型)巨噬细胞以及辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)之间的平衡转化是研究热点。现有研究表明,牙源性间充质干细胞来源的EXOs能够促进巨噬细胞和T细胞的转化并且这种功能可能取决于周围微环境以及干细胞的组织来源等因素,如牙髓间充质干细胞来源的EXOs中的miR-1246通过抑制NF-κB P65从而促进M2型巨噬细胞的极化;根尖牙乳头间充质干细胞来源的EXOs通过促进DNA去甲基化酶Tet2(Tet methylcytosine dioxygenase 2,Tet2)介导的FoxP3的去甲基化,维持FoxP3的稳定表达,促进Treg转化,从而缓解牙周炎局部炎症。此外炎症相关因子可以影响牙源性间充质干细胞来源的EXOs的免疫调节活性,如脂多糖预处理的牙囊间充质干细胞来源的EXOs可通过ROS/JNK信号通路降低RANKL/OPG比例,并通过ROS/ERK信号通路促进巨噬细胞向M2型极化;肿瘤坏死因子-α和干扰素-α两种促炎细胞因子预处理的牙龈间充质干细胞来源的EXOs通过高表达CD73和CD5L从而促进M2型巨噬细胞的极化;牙周炎患者牙周膜间充质干细胞来源的EXOs促进巨噬细胞向M1表型极化。本文综述牙源性间充质干细胞来源的EXOs在牙周免疫调节过程中对两种细胞平衡转化影响的研究进展,为EXOs治疗牙周炎提供参考。

间充质干细胞源性外泌体在创伤性脑损伤治疗中的研究进展

间充质干细胞是具有自我更新和分化成多种类型细胞潜能的多能干细胞,其分泌的含有遗传信息的外泌体以旁分泌方式安全、高效地促进组织器官的发育、修复和再生,可避免直接移植干细胞所带来的风险。在创伤性脑损伤的治疗中,间充质干细胞源性外泌体可穿过血-脑脊液屏障,促进神经修复和再生,极大地改善患者预后。本文就间充质干细胞源性外泌体的结构、功能及其在创伤性脑损伤治疗中的研究进展作一综述,为间充质干细胞源性外泌体的临床应用提供依据。

富血小板血浆联合人脐带间充质干细胞治疗3期及以上压力性损伤患者的护理经验总结

总结2例富血小板血浆(PRP)联合人脐带间充质干细胞(huMSCs)治疗3期及以上压力性损伤(PI)患者的护理经验,旨在明确PRP联合huMSCs在压力性损伤修复过程中的重要作用,为干细胞治疗压力性损伤的临床应用提供理论依据。护理要点如下:成立干细胞移植团队,明确职责;huMSCs培养、PRP凝胶制备过程;干细胞移植术治疗全程;移植术后安全性评估;PRP凝胶在伤口愈合过程中的作用机制;PRP联合huMSCs的促进作用;创面换药管理;进行营养筛查,制订营养支持计划;实施个性化体位变换;及时评估心理状态,进行个体化心理疏导。经过精心的治疗及护理,2例患者创面均痊愈。

右归丸辅助骨髓间充质干细胞对家兔骨质疏松性骨折愈合的影响及机制初探

目的探讨右归丸辅助骨髓间充质干细胞对家兔骨质疏松性骨折愈合的影响及可能机制。方法研究时间为2023年1月至6月。将50只家兔分为正常对照组、模型对照组、右归丸组、骨髓间充质干细胞组、联合治疗组,各10只。除正常对照组外其余各组建立骨质疏松性骨折模型,并予以相应药物治疗。治疗结束后,测定家兔股骨骨密度(bone mineral density,BMD)、骨小梁数量、骨小梁厚度、骨小梁分散度以及股骨弹性模量、刚度、最大应力、最大承载力;实时聚合酶链式反应及蛋白印迹法测定股骨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活子3(Janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)基因与蛋白水平。采用单因素方差分析及LSD-t检验进行数据分析。结果模型对照组家兔股骨BMD、骨小梁数量、骨小梁厚度,股骨弹性模量、刚度、最大应力、最大承载力,股骨JAK2、STAT3 mRNA和蛋白水平均低于正常对照组(均P<0.05),骨小梁分散度高于正常对照组(P<0.05);右归丸组、骨髓间充质干细胞组、联合治疗组家兔股骨BMD、骨小梁数量、骨小梁厚度、股骨弹性模量、刚度、最大应力、最大承载力、股骨JAK2、STAT3 mRNA和蛋白水平均高于模型对照组(均P<0.05),骨小梁分散度低于模型对照组(均P<0.05);联合治疗组股骨BMD[(1.76±0.13)g/cm^(3)]、骨小梁数量[(5.87±0.24)个/mm]、骨小梁厚度[(0.14±0.03)mm],股骨弹性模量[(343.27±21.04)MPa]、刚度[(904.25±73.25)N/mm]、最大应力[(32.63±3.17)N/mm^(2)]、最大承载力[(358.85±13.02)N],股骨JAK2、STAT3 mRNA[(3.45±0.26)、(3.60±0.28)]和蛋白[(0.82±0.05)、(0.84±0.05)]水平高于右归丸组[(1.41±0.15)g/cm^(3)、(3.88±0.28)个/mm、(0.10±0.02)mm、(304.62±20.41)MPa、(698.52±69.55)N/mm、(25.34±3.22)N/mm^(2)、(297.34±13.24)N、(2.58±0.26)、(2.29±0.23)、(0.60±0.05)、(0.53±0.07)]、骨髓间充质干细胞组[(1.47±0.14)g/cm^(3)、(3.89±0.28)个/mm、(0.09±0.03)mm、(299.54±16.94)MPa、(720.33±69.48)N/mm、(23.24±3.13)N/mm^(2)、(289.38±13.13)N、(2.63±0.25)、(2.30±0.24)、(0.59±0.06)、(0.53±0.08)](均P<0.05),骨小梁分散度[(0.34±0.02)mm]低于右归丸组[(0.42±0.03)mm]、骨髓间充质干细胞组[(0.43±0.03)mm](均P<0.05)。结论右归丸辅助骨髓间充质干细胞能明显促进家兔骨质疏松性骨折愈合,其机制可能与右归丸辅助骨髓间充质干细胞治疗能激活骨质疏松性骨折家兔股骨JAK2/STAT3信号通路有关。

人脐带间充质干细胞培养上清对米非司酮处理的人子宫内膜基质细胞存活、凋亡和子宫内膜容受性的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞培养上清(hUCMSCs-Sup)对米非司酮(Ms)处理的人子宫内膜基质细胞(hEndoSCs)增殖、凋亡和子宫内膜容受性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:体外培养hEndoSCs,分为对照组和40、60、80及100μmol·L-1 Ms组,MTT法检测各组细胞存活率。hEndoSCs分为对照组、40μmol·L-1 Ms组和60μmol·L-1 Ms组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平并计算Bcl-2/Bax比值。hUCMSCs-Sup作用后,hEndoSCs分为对照组、Ms组、Ms+hUCMSCs-Sup组和Ms+hUCMSCs-Sup+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)蛋白表达水平并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中子宫内膜容受性标志分子mRNA表达水平。结果:与对照组比较,40、60、80和100μmol·L-1 Ms组细胞存活率明显降低(P<0.05),且具有时间和剂量依赖性。与对照组比较,40和60μmol·L-1 Ms组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05)。hUCMSCs-Sup作用后,与对照组比较,Ms组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中同源框基因A10 (HOXA10)、白血病抑制因子(LIF)和整合素亚基β3 (ITGB3) mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与Ms组比较,Ms+hUCMSCs-Sup组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞中HOXA10、LIF和ITGb3 mRNA表达水平表达明显升高(P<0.05);与Ms+hUCMSCs-Sup组比较,Ms+hUCMSCs-Sup+3-MA组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显降低(P<0.05)。结论:hUCMSCs-Sup可提高Ms处理后hEndoSCs的存活率,降低其凋亡率,提高子宫内膜容受性,其机制可能与hUCMSCs-Sup激活hEndoSCs自噬有关。

二补助育汤对高龄小鼠子宫内膜容受性及子宫内膜间充质干细胞衰老的影响

目的 探讨二补助育汤对高龄小鼠子宫内膜容受性及子宫内膜间充质干细胞(endometrial mesenchymal stem cells, EMSCs)衰老的影响。方法 将8~9月龄妊娠小鼠随机分为模型组、阿司匹林组、补佳乐组和二补助育汤低、中、高剂量组,另选择6~8周龄妊娠小鼠为空白组,每组10只。空白组和模型组小鼠每日灌服0.5%羧甲基纤维素钠溶液,其余各组小鼠每日灌服相应药物,连续灌胃5天。于妊娠第5天下午脱颈处死。裸眼观察各组小鼠子宫形态,统计妊娠率及平均胚胎着床位点数。取各组小鼠子宫内膜组织,实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法检测同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)、整合素αvβ3 mRNA及蛋白的表达;分离、提取各组小鼠EMSCs细胞,免疫荧光法进行细胞鉴定,Real-time PCR、蛋白免疫印迹法检测EMSCs衰老指标P53、P21、P16 mRNA及蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠子宫颜色淡黯,着床部位宫体较细;妊娠率下降,但差异无统计学意义(P>0.05);平均胚胎着床位点数减少(P<0.05);子宫内膜HOXA10、LIF、整合素αvβ3 mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。与模型组比较,不同剂量的二补助育汤组小鼠子宫色泽红润,着床部位宫体明显膨大,妊娠率升高,但差异无统计学意义(P>0.05);平均胚胎着床位点数增加(P<0.05);子宫内膜HOXA10、LIF、整合素αvβ3 mRNA及蛋白表达均呈上升趋势(P>0.05)。分离、提取各组小鼠EMSCs,免疫荧光显示细胞高表达CD29、CD44,低表达CD34、CD45,提示成功获得EMSCs。与空白组比较,模型组EMSCs衰老指标P53、P21、P16 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,二补助育汤中、高剂量组及各西药组P53、P21、P16 mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 二补助育汤可上调高龄小鼠子宫内膜HOXA10、LIF、整合素αvβ3的表达,降低EMSCs衰老指标P53、P21、P16的表达,延缓EMSCs衰老,从而改善子宫内膜容受性。

骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎大鼠相关肺损伤的实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤中ZO-1、Occludin表达的影响。方法将105只雄性SD大鼠随机分成假手术组(SO组)、SAP组和BMMSCs干预组;后两组再按处死时间不同分为6 h、12 h和24 h组,观察各组间肺的病理变化及肺毛细血管通透性改变情况;通过Western blot、RT-PCR检测各组间ZO-1、Occludin蛋白和mRNA的改变情况。结果与SO组相比,SAP组各时间点肺、胰腺的病理改变明显,肺毛细血管的通透性明显增加(P<0.05),肺湿干比值增加(P<0.05),肺ZO-1、Occludin蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05);与SAP组比较,BMMSCs干预组各时间点肺、胰腺的病理改变减轻,肺毛细血管通透性改变减轻,肺组织湿干比值降低,肺ZO-1、Occludin蛋白和mRNA表达升高,12 h和24 h时间点表现的更为明显(P<0.05)。结论BMMSCs可使肺中ZO-1、Occludin的表达增加,这可能在减轻SAP相关肺损伤和改善肺毛细血管通透性方面发挥重要作用。

富血小板血浆联合间充质干细胞治疗兔膝关节骨性关节炎的机制研究

目的探讨富血小板血浆(PRP)联合间充质干细胞(MSC)对兔膝关节骨性关节炎的治疗作用及潜在机制。方法PRP处理MSC,蛋白印迹实验观察MSC中Mg^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1δ(Wip1)蛋白表达;MSC通过转染法构建Wip1过表达细胞;将30只新西兰大白兔分为对照组、模型组、MSC组、Wip1-MSC组、PRP+MSC组,每组6只;采用改良Hulth法构建兔左膝关节骨关节炎模型;肉眼观察关节软骨形态变化并行Pelletier JP评分;以Mankin评分进行病理评估;CCK-8法检测关节软骨细胞增殖能力;ELISA法检测关节液中炎症因子水平。结果PRP与DMEM培养基按1∶3、1∶2、1∶1比例混合均可诱导MSC中Wip1蛋白表达上调(P<0.01);与对照组相比,模型组Pelletier JP和Mankin评分明显升高(P<0.01);与模型组相比,MSC组、Wip1-MSC组和PRP+MSC组Pelletier JP和Mankin评分均明显降低(P<0.05,P<0.01);而与MSC组相比,Wip1-MSC组和PRP+MSC组Pelletier JP和Mankin评分明显降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组细胞活力、增殖能力及炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)均明显升高;与模型组相比,MSC组、Wip1-MSC组、PRP+MSC组细胞活力、增殖能力及炎症因子显著降低(P<0.05或P<0.01);而与MSC组相比,Wip1-MSC组和PRP+MSC组细胞活力和增殖能力及炎症因子水平明显降低(P<0.01)。结论PRP可诱导MSC中Wip1表达而增强MSC对兔膝关节骨性关节炎的治疗作用。

间充质干细胞在原发性胆汁性胆管炎中的研究

原发性胆汁性胆管炎是一种慢性自身免疫性胆汁淤积性肝病。近年来研究发现,鉴于间充质干细胞具有免疫调节、抗纤维化和肝细胞分化的特性,正在成为治疗肝脏疾病的新方式,并且越来越多的证据表明间充质干细胞对原发性胆汁性胆管炎的治疗有积极作用。本文从原发性胆汁性胆管炎的发病机制以及间充质干细胞治疗原发性胆汁性胆管炎的作用机制、研究进展等方面展开叙述。间充质干细胞治疗原发性胆汁性胆管炎的前景十分广阔,值得进一步研究。

人脐带间充质干细胞源胞外囊泡对屋尘螨诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞源胞外囊泡(human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles, hUCMSC-EVs)对屋尘螨(house dust mite, HDM)诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:超高速离心法提取hUCMSC-EVs;透射电镜观察hUCMSC-EVs形态;蛋白质印迹法检测胞外囊泡标志物肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达。将15只雌性BALB/C小鼠随机均分为3组,每组5只,分别为对照组(不做任何处理)、HDM组(HDM处理)和HDM+EVs组(HDM+hUCMSC-EVs处理);苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色法分别观察各组小鼠肺脏气道炎性细胞浸润和杯状细胞化生;收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)并对总细胞和嗜酸性粒细胞进行计数;ELISA法检测BALF中IL-4和IL-13含量;蛋白质印迹法检测肺脏中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和闭锁连接蛋白1(ZO-1)表达。将人支气管上皮BEAS-2B细胞株分为对照组和EVs组(DIO标记的hUCMSC-EVs处理),共聚焦显微镜观察细胞对DIO标记的hUCMSC-EVs的内吞情况。另将BEAS-2B细胞分为3组:对照组、HDM组(HDM处理)、HDM+EVs组(HDM+hUCMSC-EVs处理),蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和ZO-1表达。结果:hUCMSC-EVs呈杯托样膜性结构且表达HSP70和TSG101。与HDM组相比,HDM+EVs组小鼠气道炎性评分、PAS评分、BALF中总细胞和嗜酸性粒细胞数、IL-4和IL-13含量均显著下调(P均<0.01),而肺脏组织中E-cadherin和ZO-1表达明显增加(P<0.05)。体外实验显示hUCMSC-EVs可被人支气管上皮BEAS-2B细胞内吞;与HDM组相比,HDM+EVs组BEAS-2B细胞中E-cadherin和ZO-1表达明显增加(P<0.01或<0.05)。结论:hUCMSC-EVs可显著改善HDM诱导的小鼠气道周围炎性细胞浸润和气道杯状细胞化生。

胎盘间充质干细胞外泌体通过调控NF-κB信号通路抑制矽肺肺纤维化的进展

目的探讨人胎盘间充质干细胞外泌体(hPMSCs-Exo)对二氧化硅(SiO_(2))诱导小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)肺纤维化(PF)的作用机制。方法采用差速超速离心法提取外泌体,采用蛋白质免疫印迹实验(Western blot)、透射电镜、纳米粒径追踪鉴定外泌体。用MTT实验检测24 h不同浓度SiO_(2)干预MH-S增殖细胞活力影响,结合实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测在MH-S细胞中胶原蛋白Ⅰ型(COL-Ⅰ)和α-平滑肌(α-SMA)的表达,选择SiO_(2)最佳刺激质量浓度进行后续实验。将MH-S细胞分为正常对照(Control)组、SiO_(2)组、SiO_(2)+DMSO组、SiO_(2)+PDTC组,SiO_(2)+DMSO+hPMSCs组、SiO_(2)+PDTC+hPMSCs组、SiO_(2)+DMSO+hPMSCs-Exo组、SiO_(2)+PDTC+hPMSCs-Exo组,采用RT-qPCR检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α相对转录水平;采用Western blot检测各组NF-κB信号通路及细胞凋亡相关蛋白表达。结果SiO_(2)刺激MH-S细胞后PF相关基因COL-Ⅰ、α-SMA表达增高,炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达增加,NF-κB通路被激活,其相关蛋白表达量上调,细胞凋亡因子表达量上调(P均<0.01),促进了纤维化的发生;在加入抑制NF-κB信号通路抑制剂PDTC后,NF-κB通路被抑制,其相关蛋白表达量降低,炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达降低,PF相关基因COL-Ⅰ、α-SMA表达减弱,细胞凋亡率降低(P均<0.05),PF的发展被抑制。抑制NF-κB通路后移植hPMSCs细胞和hPMSCs-Exo,PF相关基因表达降低,炎症因子释放减少(P均<0.05),抑制了细胞凋亡,PF的发生被有效干预。结论hPMSCs-Exo可能通过调控NF-κB信号通路来抑制矽肺PF的进展。

旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响

背景:生物反应器内球形体培养是既能维持间充质干细胞干性又能大规模扩增的体外培养方法,明确其对干细胞免疫调节作用的影响有利于指导临床应用。目的:探讨旋转生物反应器内球形体培养对人胎盘间充质干细胞炎症因子分泌的影响。方法:从人胎盘组织中分离培养人胎盘间充质干细胞,分别进行二维培养和旋转生物反应器培养,利用倒置相差显微镜、免疫组化染色和CCK-8实验观察细胞形态与增殖能力,RT-qPCR和流式荧光法检测多种炎症因子基因表达与蛋白分泌量。结果与结论:①旋转生物反应器内培养的人胎盘间充质干细胞聚集成多细胞球形体,数量与体积逐渐增加;②苏木精-伊红染色可见旋转生物反应器内培养4 d的人胎盘间充质干细胞在球形体内分布均匀,形态正常;③免疫组化染色显示球形体内有大量人胎盘间充质干细胞的细胞核Ki-67阳性;④CCK-8实验结果显示,生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞活力显著高于二维培养的细胞;⑤RT-qPCR和流式免疫荧光法检测结果显示,旋转生物反应器内球形体培养的人胎盘间充质干细胞中白细胞介素1β、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素8、白细胞介素10、白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和干扰素α的基因表达量和蛋白分泌量显著高于二维培养的细胞;⑥结果表明,旋转生物反应器内球形体培养能显著提高人胎盘间充质干细胞分泌多种炎症因子的能力,加强人胎盘间充质干细胞的免疫调节作用。

TGM2过表达的骨髓间充质干细胞外泌体抑制乳酸介导的髓核细胞氧化应激性凋亡

目的探究转谷氨酰胺酶2(transglutaminase2,TGM2)过表达的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源外泌体在乳酸介导的髓核细胞氧化应激性凋亡中的作用及机制。方法选用20只6周龄雄性SD大鼠[体质量(350±50)g]用于提取髓核细胞。利用乳酸构建原代髓核细胞氧化应激性凋亡模型;利用慢病毒载体在BMSCs中过表达TGM2蛋白,提取外泌体并进行鉴定;后为验证TGM2过表达的外泌体抗髓核细胞氧化应激性凋亡潜在机制,利用流式细胞术对髓核细胞活性氧水平进行检测,Western blot、免疫荧光对髓核细胞Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3、磷酸化PI3K、磷酸化Akt、核内Nrf2、胞质Nrf2、HO-1蛋白表达水平及Nrf2核内荧光表达情况进行检测,分为4组(n=3):对照组、乳酸处理组、乳酸+对照外泌体组、乳酸+TGM2过表达外泌体组,评估髓核细胞的氧化应激性凋亡程度及PI3K/Akt/Nrf2通路变化情况。结果10 mmol/L乳酸能够更好的诱导髓核细胞氧化应激性凋亡(P<0.05);对照BMSCs组和TGM2过表达BMSCs组均可产生外泌体且能够稳定过表达TGM2(P<0.05,P<0.01);且相较于乳酸处理组,乳酸+TGM2过表达外泌体组和乳酸+对照外泌体组的髓核细胞均表现为凋亡率降低(P<0.05),活性氧水平下降(P<0.05),乳酸+TGM2过表达外泌体组抗凋亡、活性氧蓄积效果更好(P<0.05),髓核细胞内Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达均下降(P<0.05),Bcl-2蛋白水平均增高(P<0.05),PI3K、Akt磷酸化程度均增强(P<0.05),Nrf2核内表达均增加,抗氧化应激因子HO-1表达均增多,乳酸+TGM2过表达外泌体组抗凋亡及PI3K/Akt/Nrf2通路激活程度更强(P<0.05)。结论TGM2过表达的BMSCs外泌体可抑制乳酸介导的髓核细胞氧化应激性凋亡,其机制可能与PI3K/Akt/Nrf2通路激活有关。

间充质干细胞在特应性皮炎中的研究进展

特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一种复杂的慢性炎症性疾病,其发病机制复杂,严重影响人类生活质量。间充质干细胞因其具有独特的自我更新、分化和组织修复潜力,通过调节先天和适应性免疫系统的免疫细胞的增殖、募集功能,被誉为“免疫系统的强大调节剂”。本文对特应性皮炎的发病机理,间充质干细胞对T细胞、B细胞、巨噬细胞、树突状细胞和肥大细胞等免疫细胞的调节干预作用、促进皮肤再生和修复以及在特应性皮炎临床研究结果进行简要综述,引起对于相关领域更进一步的关注,为进一步深入、系统了解和探索打下基础。

PRP联合骨髓间充质干细胞在慢性难愈性创面治疗中的应用研究

对比BMSCs、PRP及BMSCs联合PRP在慢性难愈性创面的上的治疗修复效果。方法 (1)模型研究组的建立:选新西兰大耳兔12只,随机分成4组,每组3只,手术在兔膝小腿中造创面损伤模型。将造好创面缺损模型的兔子分为A、B、C、D四组。A组为空白组,仅造创面缺损模型。B组为造模后单独BMSCs创面注射组。C组为造模后单独PRP创面注射组。D组为造模后BMSCs联合PRP创面注射组。(2)BMSCs细胞的提取、鉴定:在创面造模的同时,在兔大腿健侧骨干用骨穿针抽取部分骨髓,体外消化获取BMSCs,进行体外培养,并进行鉴定。(3)PRP的制取:待BMSCs体外培养到相应数量后,抽取兔子一定量静脉血,离心制备RPR备用。(4)按分组,将BMSCs和PRP注射到创面的表面,注射治疗1、2和3周后,观察创面的修复情况,根据创面闭合指数进行评分;结果 (1)骨髓干细胞呈长梭形或多角形。BMSCs表面抗原CD44、CD90和CD105检测阳性率分别为92.32%、95.62%和96.35%,CD34检测0.5%,具备干细胞的性质。(2)血小板计数示PRP中血小板浓度约为外周血的6倍。PRP中PDGF、TGF-β和VEGF的浓度分别约为外周血中的5、6、7倍。(3)1周时B、C、D组对于创面的闭合指数无明显统计学差别(P<0.05),但均优于空白A组;D组的创面闭合指数较B、C组明显升高,且均高于A组(P<0.05);3周时,D组的创面闭合指数较B、C组明显升高,且均高于A组(P<0.05)。结论 BMSCs联合PRP对于兔小腿的慢性难愈性创面修复效果明显优于单独进行PRP和单独BMSCs的治疗,且均优于未进行治疗情况,说明BMSCs联合PRP能够显著提高慢性难愈性创面的愈合的效果。