五氯酚对人胎盘碱性磷酸酶抑制的研究

监测人胎盘碱性磷酸酶在不同浓度五氯酚溶液中活力与荧光光谱的变化 ;测定五氯酚对其抑制的类型及pH对其抑制的影响 .结果显示 :低浓度的五氯酚 (<1 0mmol/L)使酶活力及其荧光强度迅速下降 ,发射峰位明显红移 ;继续提高五氯酚浓度 ,其活力与荧光强度逐渐下降 ,发射峰位仍在红移 ;五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,荧光淬灭 ,但酶仍保留 5 1 4%的活力 ;五氯酚浓度高达 10 0mmol/L时 ,酶剩余活力为 30 0 % .进一步实验表明五氯酚使L 色氨酸的荧光强度降低 ,并伴有发射峰位的红移 ,当五氯酚浓度为 5 0mmol/L时 ,L 色氨酸的荧光淬灭 .五氯酚是人胎盘碱性磷酸酶的反竞争性抑制剂 ,其抑制常数 (Ki)为 3 86mmol/L .其抑制也受溶液 pH影响 ,pH <7 5时 ,对酶无抑制 ;pH为 7 5～ 10 5时 ,随 pH的增加 ,抑制作用逐渐增强 .提示五氯酚能够进入酶分子内部使其荧光淬灭 ,并抑制了酶活力 ;表明酶活力抑制与五氯酚的解离状态有关 .

温度对人胎盘碱性磷酸酶活性的影响

①目的 观察温度对人胎盘碱性磷酸酶 (HPAP)活性的影响。②方法 应用分光光度法测定不同温度时HPAP的活性。③结果 HPAP的最适温度为 6 5℃ ,对热稳定 ,- 2 5℃冷冻后 ,酶活性明显下降。④结论HPAP是一种耐热的碱性磷酸酶 ,但冷冻后不稳定。

GPI信号肽序列与B7-1基因的拼接及其真核表达载体的构建和序列分析

B7-1提供T细胞激活需要的辅助信号,大多数的肿瘤细胞表面并不表达B7-1分子,这可能是肿瘤逃避机体免疫攻击的原因之一。通过基因转染法,将B7-1基因导入肿瘤细胞中表达,能诱导抗肿瘤免疫反应,但基因转染有其局限性,因此有必要探寻更好的转染法。糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白是通过其羧基末端的GPI结构锚定于细胞膜表面的一类蛋白,人胎盘碱性磷酸酶-1(hPLAP-1)也是一种GPI锚定蛋白,指导蛋白锚定附着的信号是C末端信号肽。