人胎盘绒毛膜滋养层细胞的培养(英文)

目的 建立纯度较高的适于试验研究的人绒毛膜滋养层细胞 .方法 胰蛋白酶 - DNase联合消化法培养人绒毛膜滋养层细胞 ,间接免疫染色进行细胞鉴定 ,透射电镜观察细胞内部结构 .结果 倒置显微镜下 ,可见细胞呈不规则多角形 ,核大卵圆形 ,胞质透明 ,呈片状铺展生长 .角蛋白染色阳性率超过 95 % ,未检测到波型蛋白阳性细胞 ,表明不含污染细胞 .透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构 .结论 该法简便易行 。

低氧预处理人胎盘绒毛膜间充质干细胞环状RNA筛选

目的探讨环状RNA在人胎盘绒毛膜间充质干细胞低氧预处理和常氧培养中表达谱的差异。方法利用芯片技术检测3例低氧预处理人胎盘绒毛膜间充质干细胞及其相应对照的常氧培养细胞的环状RNA表达,分析两者差异表达的环状RNA及其结合mi RNA。结果在检测的13 617条环状RNA中,有分析结果的环状RNA12 114条,低氧和常氧培养人胎盘间充质干细胞差异表达环状RNA共102条,其中低氧中表达上调的85条,下调的17条(倍数变化>1.5倍且P<0.05),而表达差异倍数变化大于2倍以上的环状RNA有27条,且均为上调表达。每个环状RNA预测到5个结合mi RNA。结论低氧预处理使得人胎盘绒毛膜间充质干细胞的环状RNA表达谱发生了显著变化,这些环状RNA可能和低氧预处理有关。

重度子痫前期人胎盘绒毛膜板动脉中钙激活氯离子通道的表达情况

目的探讨在人胎盘绒毛膜板动脉中钙激活氯离子通道(CaCCs)的表达情况。方法采用实时荧光定量PCR法及蛋白免疫印记技术分别检测CaCCs的分子基础TMEM16A在妊娠期高血压疾病(HDCP)正常孕妇组、重度子痫前期组、早发型及晚发型重度子痫前期组中的表达情况。结果在正常组、重度子痫前期组中TMEM16A mRNA的△CT值分别为(15.15±0.81)、(13.86±0.54),两组差异有统计学有意义(P<0.05);在正常组和重度子痫前期组中TMEM16A的蛋白灰度值比值分别为(0.28±0.07)、(0.62±0.25),两组差异有统计学意义(P<0.05)。在早发型重度子痫前期组和晚发型重度子痫前期组中TMEM16A mRNA的△CT值分别为(14.11±0.70)、(12.99±0.46),两组差异有统计学意义(P<0.05);在早发型重度子痫前期组和晚发型重度子痫前期组中TMEM16A的蛋白灰度值比值分别为(0.47±0.18)、(0.75±0.29),两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论TMEM16A在人胎盘膜板动脉中的表达重度子痫前期高于正常妊娠,且在重度子痫前期中晚发型中明显高于早发型,为进一步揭示妊娠期高血压发病机制奠定理论基础,提供药物靶向治疗研究的新思路。

重度子痫前期人胎盘绒毛膜板动脉中经典瞬时受体电位通道6的表达情况

目的:主要研究重度子痫前期中人胎盘绒毛膜板动脉(human placental chorionic arteries,HPCA)经典瞬时受体电位通道6(transient receptor potential canonical 6,TRPC6)的表达情况,探讨TRPC6的表达与该疾病的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR法(qPCR)及蛋白免疫印记法(Western Blotting)来检测TRPC6在正常孕妇组、早发型重度子痫前期组及晚发型重度子痫前期组的mRNA及蛋白表达情况。结果:早发型重度子痫前期TRPC6的mRNA的相对表达量为2.820 0 ±1.028 7,晚发型重度子痫前期TRPC6的mRNA的相对表达量为1.918 3 ± 0.896 4,差异有统计学意义(P < 0.05)。在正常孕妇组TRPC6的蛋白表达量为0.510 4 ± 0.091 6,TRPC6在早发型重度子痫前期的蛋白表达量是1.373 0 ± 0.171 2,在晚发型重度子痫前期的表达量为0.911 4 ± 0.128 0,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论:TRPC6在重度子痫前期孕妇组中的mRNA及蛋白表达水平高于正常孕妇组,故猜测TRPC6可能参与了重度子痫前期的发病过程,早发型重度子痫前期孕妇组的mRNA及蛋白表达水平高于晚发型重度子痫前期孕妇组,且重度子痫前期的发病时间越早,该通道的蛋白表达量越高。

Kv7通道对人胎盘绒毛膜板动脉血管环舒缩功能的影响及其机制

目的探讨Kv7通道对人胎盘绒毛膜板动脉(CPAs)血管环舒缩功能的影响及其可能的机制。方法取内皮完整或去内皮CPAs血管环,分别加入累积浓度递增的XE991、Linopirdine或二甲基亚砜(DMSO),计算收缩率。取去内皮CPAs血管环,经过或者不经过XE991孵育后加入累积浓度递增的U46619,计算收缩率。将去内皮CPAs血管环加入1×10^(-7)mol/L U46619进行预收缩处理,分别加入累积浓度递增的Kv7通道开放剂[Acrylamide(S)-1、Retigabine、BMS-204352、ML277]及DMSO,计算舒张率。取去内皮CPAs血管环,分别经硝苯地平、levcromakalim及无钙液处理后加入XE991(1×10^(-5)mol/L)或Linopirdine(1×10-4mol/L),计算处理前后收缩率。结果内皮完整CPAs血管环与去内皮CPAs血管环收缩率随着XE991、Linopirdine浓度的升高而升高,分别于5×10^(-5)、1×10^(-4)mol/L时收缩率最大。与加入同浓度DMSO作用后比较,内皮完整CPAs血管环与去内皮CPAs血管环加入XE991或Linopirdine作用后的收缩率均升高(P均<0.01)。内皮完整CPAs血管环与去内皮CPAs血管环加入同浓度XE991或Linopirdine作用后的收缩率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。随着U46619浓度的升高,经过或者不经过XE991孵育的去内皮CPAs血管环收缩率均逐渐升高,但经过孵育后升高更明显(P均<0.01)。U46619预收缩CPAs血管环加入1×10^(-4)mol/L Acrylamide(S)-1、Retigabine、BMS-204352作用后的舒张率均高于加入同浓度DMSO(P均<0.01),加入ML277作用后的舒张率无明显变化(P均>0.05)。XE991组和Linopirdine组经硝苯地平、levcromakalim及无钙台式液处理后的收缩率均低于处理前(P均<0.01)。结论 Kv7通道通过介导细胞膜静息K+电导和静息膜电位的改变而参与调节CPAs血管环的舒缩;阻断Kv7通道可引起CPAs平滑肌细胞去极化,激活L型钙离子通道,引起Ca2+内流和血管收缩。

机械敏感通道Piezo1在子痫前期患者胎盘绒毛膜板动脉血管中的表达及意义

目的探讨机械敏感离子通道Piezo1在子痫前期(pre-eclampsia,PE)患者胎盘绒毛膜板动脉(human placental chorionic arteries,HPCA)中的表达及其意义。方法收集西南医科大学附属医院产科剖宫产分娩的孕妇的HPCA组织,包括血压正常的对照(normal control,NC)组、子痫前期组及重度子痫前期(sever preeclampsia,SPE)组,每组各10例。采用免疫荧光染色法检测NC组、PE组、SPE组孕妇HPCA中Piezo1和内皮标志性分子CD31的表达情况。采用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qPCR)检测NC组、PE组、SPE组孕妇HPCA中Piezol的mRNA相对表达;蛋白免疫印记法(Western blotting,WB)检测NC组、PE组、SPE组孕妇HPCA中Piezol的蛋白相对表达。过氧化氢(H_(2)O_(2))模拟氧化应激作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),采用qPCR法检测NC组、H_(2)O_(2)处理6 h组、H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezol的mRNA相对表达;采用WB法检测NC组、H_(2)O_(2)处理6 h组、H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezol的蛋白相对表达。结果Piezo1与内皮标志性分子CD31在NC组、PE组和SPE组孕妇HPCA组织中均存在共定位。Piezol的mRNA表达在NC组、PE组和SPE组孕妇HPCA组织中呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。Piezol的蛋白表达在NC组、PE组和SPE组孕妇HPCA组织中呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。在对照组、H_(2)O_(2)处理6 h组和H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezo1的mRNA表达呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。在对照组、H_(2)O_(2)处理6 h组和H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezo1的蛋白表达呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Piezo1表达于HPCA组织内皮细胞中。Piezo1的异常表达可能与子痫前期的病理生理改变有关。子痫前期发生发展过程中氧化应激反应可导致Piezol表达下降。

低氧诱导因子-3α对胎盘滋养层细胞生长的影响

目的研究低氧诱导因子-3α(HIF-3α)对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)生物学行为的影响。方法构建人HIF-3α过表达载体(pcDNA3.1-HIF-3α),并筛选HIF-3α抑制剂(HIF-3αsiRNA)最佳靶序列;用2.5μg的pcDNA3.1-HIF-3α质粒和75 pmol/L的HIF-3αsiRNA分别转染HTR8/SVneo细胞作为转染组,同时各自设立阴性转染组。采用EdU法和MTT法检测细胞增殖和细胞活力水平;用细胞流式法检测细胞凋亡水平;并用细胞培养小室(Transwell)法检测细胞浸润和迁移的能力。结果蛋白质印迹法(Western Blot)结果表明成功构建了过表达载体pcDNA3.1-HIF-3α,并筛选到HIF-3αsiRNA#2是最佳抑制靶序列(P<0.05)。EdU实验结果显示,过表达HIF-3α使细胞的增殖显著增强(P<0.05),敲低HIF-3α则使细胞的增殖显著下降(P<0.05)。MTT法检测发现,过表达HIF-3α后细胞活力无显著差异(P>0.05);敲低HIF-3α后细胞活力显著升高(P<0.05)。细胞流式法检测发现,HIF-3α过表达有降低HTR8/SVneo细胞早期凋亡的趋势,但无显著差异(P>0.05);HIF-3α敲低后细胞凋亡无显著差异(P>0.05)。Transwell小室法检测发现,HIF-3α过表达使细胞的迁移以及浸润显著增强(P<0.05),而HIF-3α敲低后细胞的迁移以及浸润显著下降(P<0.05)。结论HIF-3α是调节HTR8/SVneo细胞增殖、迁移和浸润能力的重要因子。

59例异位妊娠的β-HCG定性、定量与血清孕酮检测结果分析

目的分析人胎盘绒毛膜促性腺激素(β-HCG)定性、定量与孕酮(P)联合检测在异位妊娠的诊断和治疗中的应用价值。方法对于异位妊娠的59例患者首先使用金标准早早孕试纸对其血浆和尿液进行β-HCG定性分析,随后采用全自动化学发光分析仪测定其血清中β-HCG和P含量,并与正常妊娠者血清中β-HCG和P含量进行比较分析。结果血浆β-HCG定性测定59例均为阳性,阳性率为100.00%;尿液β-HCG定性检测有51例阳性,阳性率为86.44%,定量检测的异位妊娠者血清中β-HCG和P含量均低于正常妊娠者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论对于临床急诊疑为异位妊娠患者进行血浆和尿液β-HCG定性分析,可以迅速提供支持性初步诊断报告,定量联合检测β-HCG和P含量对于异位妊娠的诊断和治疗有着非常重要的临床意义。