重度子痫前期人胎盘绒毛膜板动脉中钙激活氯离子通道的表达情况

目的探讨在人胎盘绒毛膜板动脉中钙激活氯离子通道(CaCCs)的表达情况。方法采用实时荧光定量PCR法及蛋白免疫印记技术分别检测CaCCs的分子基础TMEM16A在妊娠期高血压疾病(HDCP)正常孕妇组、重度子痫前期组、早发型及晚发型重度子痫前期组中的表达情况。结果在正常组、重度子痫前期组中TMEM16A mRNA的△CT值分别为(15.15±0.81)、(13.86±0.54),两组差异有统计学有意义(P<0.05);在正常组和重度子痫前期组中TMEM16A的蛋白灰度值比值分别为(0.28±0.07)、(0.62±0.25),两组差异有统计学意义(P<0.05)。在早发型重度子痫前期组和晚发型重度子痫前期组中TMEM16A mRNA的△CT值分别为(14.11±0.70)、(12.99±0.46),两组差异有统计学意义(P<0.05);在早发型重度子痫前期组和晚发型重度子痫前期组中TMEM16A的蛋白灰度值比值分别为(0.47±0.18)、(0.75±0.29),两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论TMEM16A在人胎盘膜板动脉中的表达重度子痫前期高于正常妊娠,且在重度子痫前期中晚发型中明显高于早发型,为进一步揭示妊娠期高血压发病机制奠定理论基础,提供药物靶向治疗研究的新思路。

重度子痫前期人胎盘绒毛膜板动脉中经典瞬时受体电位通道6的表达情况

目的:主要研究重度子痫前期中人胎盘绒毛膜板动脉(human placental chorionic arteries,HPCA)经典瞬时受体电位通道6(transient receptor potential canonical 6,TRPC6)的表达情况,探讨TRPC6的表达与该疾病的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR法(qPCR)及蛋白免疫印记法(Western Blotting)来检测TRPC6在正常孕妇组、早发型重度子痫前期组及晚发型重度子痫前期组的mRNA及蛋白表达情况。结果:早发型重度子痫前期TRPC6的mRNA的相对表达量为2.820 0 ±1.028 7,晚发型重度子痫前期TRPC6的mRNA的相对表达量为1.918 3 ± 0.896 4,差异有统计学意义(P < 0.05)。在正常孕妇组TRPC6的蛋白表达量为0.510 4 ± 0.091 6,TRPC6在早发型重度子痫前期的蛋白表达量是1.373 0 ± 0.171 2,在晚发型重度子痫前期的表达量为0.911 4 ± 0.128 0,差异有统计学意义(P < 0.05)。结论:TRPC6在重度子痫前期孕妇组中的mRNA及蛋白表达水平高于正常孕妇组,故猜测TRPC6可能参与了重度子痫前期的发病过程,早发型重度子痫前期孕妇组的mRNA及蛋白表达水平高于晚发型重度子痫前期孕妇组,且重度子痫前期的发病时间越早,该通道的蛋白表达量越高。

Kv7通道对人胎盘绒毛膜板动脉血管环舒缩功能的影响及其机制

目的探讨Kv7通道对人胎盘绒毛膜板动脉(CPAs)血管环舒缩功能的影响及其可能的机制。方法取内皮完整或去内皮CPAs血管环,分别加入累积浓度递增的XE991、Linopirdine或二甲基亚砜(DMSO),计算收缩率。取去内皮CPAs血管环,经过或者不经过XE991孵育后加入累积浓度递增的U46619,计算收缩率。将去内皮CPAs血管环加入1×10^(-7)mol/L U46619进行预收缩处理,分别加入累积浓度递增的Kv7通道开放剂[Acrylamide(S)-1、Retigabine、BMS-204352、ML277]及DMSO,计算舒张率。取去内皮CPAs血管环,分别经硝苯地平、levcromakalim及无钙液处理后加入XE991(1×10^(-5)mol/L)或Linopirdine(1×10-4mol/L),计算处理前后收缩率。结果内皮完整CPAs血管环与去内皮CPAs血管环收缩率随着XE991、Linopirdine浓度的升高而升高,分别于5×10^(-5)、1×10^(-4)mol/L时收缩率最大。与加入同浓度DMSO作用后比较,内皮完整CPAs血管环与去内皮CPAs血管环加入XE991或Linopirdine作用后的收缩率均升高(P均<0.01)。内皮完整CPAs血管环与去内皮CPAs血管环加入同浓度XE991或Linopirdine作用后的收缩率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。随着U46619浓度的升高,经过或者不经过XE991孵育的去内皮CPAs血管环收缩率均逐渐升高,但经过孵育后升高更明显(P均<0.01)。U46619预收缩CPAs血管环加入1×10^(-4)mol/L Acrylamide(S)-1、Retigabine、BMS-204352作用后的舒张率均高于加入同浓度DMSO(P均<0.01),加入ML277作用后的舒张率无明显变化(P均>0.05)。XE991组和Linopirdine组经硝苯地平、levcromakalim及无钙台式液处理后的收缩率均低于处理前(P均<0.01)。结论 Kv7通道通过介导细胞膜静息K+电导和静息膜电位的改变而参与调节CPAs血管环的舒缩;阻断Kv7通道可引起CPAs平滑肌细胞去极化,激活L型钙离子通道,引起Ca2+内流和血管收缩。

机械敏感通道Piezo1在子痫前期患者胎盘绒毛膜板动脉血管中的表达及意义

目的探讨机械敏感离子通道Piezo1在子痫前期(pre-eclampsia,PE)患者胎盘绒毛膜板动脉(human placental chorionic arteries,HPCA)中的表达及其意义。方法收集西南医科大学附属医院产科剖宫产分娩的孕妇的HPCA组织,包括血压正常的对照(normal control,NC)组、子痫前期组及重度子痫前期(sever preeclampsia,SPE)组,每组各10例。采用免疫荧光染色法检测NC组、PE组、SPE组孕妇HPCA中Piezo1和内皮标志性分子CD31的表达情况。采用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qPCR)检测NC组、PE组、SPE组孕妇HPCA中Piezol的mRNA相对表达;蛋白免疫印记法(Western blotting,WB)检测NC组、PE组、SPE组孕妇HPCA中Piezol的蛋白相对表达。过氧化氢(H_(2)O_(2))模拟氧化应激作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),采用qPCR法检测NC组、H_(2)O_(2)处理6 h组、H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezol的mRNA相对表达;采用WB法检测NC组、H_(2)O_(2)处理6 h组、H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezol的蛋白相对表达。结果Piezo1与内皮标志性分子CD31在NC组、PE组和SPE组孕妇HPCA组织中均存在共定位。Piezol的mRNA表达在NC组、PE组和SPE组孕妇HPCA组织中呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。Piezol的蛋白表达在NC组、PE组和SPE组孕妇HPCA组织中呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。在对照组、H_(2)O_(2)处理6 h组和H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezo1的mRNA表达呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。在对照组、H_(2)O_(2)处理6 h组和H_(2)O_(2)处理12 h组HUVEC细胞中Piezo1的蛋白表达呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Piezo1表达于HPCA组织内皮细胞中。Piezo1的异常表达可能与子痫前期的病理生理改变有关。子痫前期发生发展过程中氧化应激反应可导致Piezol表达下降。