氟致人胎肝细胞氧化应激与细胞凋亡关系的研究

目的研究氟致人胎肝细胞氧化应激和细胞凋亡之间的关系。方法体外培养的人胎肝细胞接触不同浓度的氟化钠24h后,检测人胎肝细胞凋亡百分率、细胞周期构成比、脂质过氧化物(LPO)、还原型谷胱甘肽(GSH)和培养液中LPO水平以及乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性。结果氟染毒组培养液中LDH和AST活性均显著高于对照组;细胞内和上清液中LPO水平升高,细胞内GSH则明显下降,并且二者均与氟浓度呈现明显的剂量-效应关系;氟可使人胎肝细胞凋亡百分率明显升高,S期细胞数增多。结论氟可致人胎肝细胞氧化应激,诱导细胞凋亡,一定浓度范围内的氟所诱导的氧化应激与细胞凋亡之间呈现明显的正相关关系。

汉防己甲素对成纤维细胞、人胎肝细胞DNA及胶原合成的影响

以小鼠胚胎３Ｔ３成纤维细胞株及人胎肝细胞株为细胞模型，以３Ｈ－脯氨酸掺入量及掺入抑制率为指标，观察具有钙拮抗剂作用的汉防已甲素对两种细胞增殖及胶原合成的影响。结果表明，１０～５０μｇ／ｍｌ浓度范围内，汉防已甲素能显著抑制两种细胞增殖及胶原合成，抑制作用与浓度呈正相关。

原代培养人胎肝细胞体外感染HBV的研究

目的 建立HBV感染人胎肝细胞体外培养系统。 方法 首先分离、培养人胎肝细胞,然后应用HBV阳性血清感染体外培养的人胎肝细胞;每隔2d收集上清液和肝细胞,应用ELISA、免疫组化法、原位杂交法和斑点杂交法检测上清液和细胞中HBsAg和HBV DNA。 结果 上清液中HBsAg在感染后2d～20d均可测出,以感染后4d～16d达高峰(A值在0.22左右)。免疫组化检测细胞中HBsAg呈阳性表达,原位杂交和斑点杂交检测细胞和上清液中HBV DNA也呈阳性表达。 结论 HBV在原代培养人胎肝细胞中能稳定复制和表达至少达16d。

HBV体外感染人胎肝细胞的鉴定方法研究

目的 通过HBV体外感染 2 2周龄原代培养人胎肝细胞 ,比较常用检测指标的敏感性和特异性。方法 利用HBV阳性血清感染体外培养的原代人胎肝细胞。应用ELISA法检测培养上清中的HBsAg和HBeAg ,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg ,荧光定量PCR法检测上清和细胞中HBVDNA ,巢式PCR法检测细胞中cccDNA。结果 胎肝细胞核中的HBcAg于感染后第 2天出现阳性 ,培养上清和细胞中HBVDNA定量自第 4天起检出 ,上清中HBsAg和HBeAg于第 5～ 6天出现阳性 ;细胞中HBVcccDNA自第 8～ 9天出现阳性。结论 HBV在原代培养人 2 2周龄的胎肝细胞中能够稳定复制和表达 ,各种检测指标的灵敏性和特异性不一 ,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg敏感性好 ,特异性可。

苦参碱联合DMSO大规模冻存人胎肝细胞的实验研究

目的观察苦参碱对大规模低温冻存人胎肝细胞功能的影响。方法改良肝细胞获取方法分离人胎肝细胞,经过1h预培养后。将5种不同浓度(1×107,2.5×107,5×107,7.5×107,10×107.mL-1)的胎肝细胞以6mg/L苦参碱+5%DMSO为冻存保护液置于骨髓干细胞冻存袋在液氮中冷冻保存1个月。1个月后复苏,进行活率、形态学及功能检测。结果5种不同浓度的细胞冻存1个月后,细胞浓度为2.5×107·mL-1组复苏后存活率与其余四组相比差异有显著性(P<0.05),且明显高于其余四组。复苏后细胞存活率和24h贴壁率分别为73%,69%,经过短期培养后,细胞功能逐渐恢复。结论(1)苦参碱对低温冻存的人胎肝细胞有保护作用,与二甲基亚砜联用可降低DMSO的浓度;(2)以5%DMSO+6mg/L苦参碱作为冻存保护剂,细胞浓度在2.5×107·mL-1冻存效果最佳。该大规模冻存方法基本上可以满足生物人工肝肝细胞应用的需求。

氟对人胎肝细胞细胞周期、凋亡及p53表达的影响

目的 研究氟对人胎肝细胞 (L 0 2细胞 )细胞周期、凋亡及p5 3表达的影响。方法 体外培养的人胎肝细胞接触 4 0、 80、 16 0 μg/ml氟化钠 2 4h后 ,MTT法检测L 0 2细胞存活率 ,流式细胞术检测细胞凋亡率和周期构成比 ,Westernblot检测P5 3蛋白的表达水平。结果 高剂量氟染毒组细胞存活率显著低于对照组 (P <0 0 1) ;各染氟组S期细胞数与对照组相比均明显增多 (P <0 0 1) ,中、高剂量氟染毒组细胞凋亡率和p5 3蛋白表达量均显著高于对照组 (P <0 0 1)。结论 氟可使L 0 2细胞S期细胞数增多 ,诱导人胎肝细胞凋亡和 p5 3表达 ,并呈剂量 效应关系。

人胎肝细胞体外感染丙型肝炎病毒的定位研究

为了证实人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒 (HCV)阳性血清共培养 2 4h是否能感染 HCV病毒而作定位研究。采用透射电镜、免疫电镜的手段对于 HCV阳性血清共培养的人胎肝细胞中病毒样颗粒进行定位研究 ,以测定细胞内是否有 HCV。结果发现在透视电镜下人胎肝细胞胞浆中有很多病毒样颗粒 ,直径约 45 nm。通过免疫电镜进一步证实在人胎肝细胞中这些病毒样颗粒含有 HCV基因表达产物 NS3及 NS5。此外 ,人胎肝细胞在体外与 HCV阳性血清共培养 2 4h并经多次洗涤后的培养上清加入到新鲜分离的正常人胎肝细胞培养基中继续培养 ,可以得出上述相同的结果。这些结果表明人胎肝细胞在体外培养情况下可以感染 HCV,并且感染了

人胎肝细胞体外感染HCV的定性研究

目的:通过定性研究探讨人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒(HCV)阳性血清共培养24h是否能感染HCV。方法:人胎肝细胞在体外与HCV阳性血清共培养24h后,采用原位RT-PCR技术对其进行HCV定性检测。结果:通过原位RT-PCR技术检测,发现人胎肝细胞内HCV正、负链RNA均为阳性。此外,将人胎肝细胞在体外与HCV阳性血清共培养24h并经多次洗涤后继续培养的上清液加入到新鲜分离的正常人胎肝细胞培养基中培养,可以得到上述相同的鲒果。结论:人胎肝细胞在体外培养情况下可以感染HCV,并支持HCV在其内复制,产生具有传染性的HCV颗粒分泌到培养液中。

纤维结合素对HBV感染原代培养人胎肝细胞的影响

目的 研究纤维结合素对HBV体外感染原代培养人胎肝细胞的影响。方法 用纤维结合素包被培养皿 ,利用从HBV阳性血清纯化的HBV病毒颗粒感染体外培养的人胎肝细胞。应用ELISA法检测培养上清中HBsAg和HBeAg,免疫组化法检测细胞核中HBcAg,荧光定量PCR法检测细胞中HBVDNA ,巢式PCR法检测细胞中cccDNA ,并和未包被的胎肝细胞进行对照。结果 未包被时上清中HBsAg和HBeAg于第 5日出现阳性 ,包被后自第 1日起出现阳性 ;未包被时胎肝细胞核中HBcAg于感染后第 2日起出现阳性 ,阳性率为 10 %～ 15 % ,包被后自第 1日起出现阳性 ,阳性率达 90 %以上 ;未包被时细胞中HBVDNA定量自第 4日起检出 ,包被后自第 1日起检出 ;未包被时细胞中HBVcccDNA自第 8日出现阳性 ,包被后自第 2日起出现阳性。结论 纤维结合素包被可以促进HBV体外感染原代培养人胎肝细胞 ,使HBV感染胎肝细胞的时间提前 。

HDV/HBV体外感染原代培养人胎肝细胞的实验研究

目的 :建立HDV /HBV感染人胎肝细胞体外培养系统。方法 :利用HDV/HBV阳性血清同时感染体外培养的人胎肝细胞 ;应用ELISA、免疫组化法、原位杂交法和斑点法检测上清液和细胞中HBsAg、HDAg、HBVDNA和HDVcDNA。 结果 :上清液和细胞中HBsAg、HDAg、HBVDNA和HDVcDNA在感染后第 2天至第 16天均可测出 ,其中上清液中HBsAg、HDAg以感染后第 4天至第 12天达高峰。 结论 :HDV在原代培养人胎肝细胞中能稳定复制和表达至少达 12d。

丹参对培养人胎肝细胞膜流动性的影响

利用稳态荧光偏振技术，观察丹参对培养人胎肝细胞膜流动性的影响。结果，ＣＣｌ４损伤肝细胞膜流动性下降，同时ＡＬＴ释放及丙二醛（ＭＤＡ）生成明显增多。预加丹参可明显减轻上述损伤变化，并使肝细胞膜流动性恢复接近正常对照组水平。提示丹参可抑制脂质过氧化反应，维护肝细胞膜流动性。

人胎肝细胞条件培养液对大鼠中毒性肝坏死的实验研究

为了研究肝细胞生长因子的来源,本文对人胎肝细胞条件培养液促肝细胞增生活性进行了研究。用D#氨基半乳糖造成大鼠肝坏死模型后,观察人胎肝细胞条件培养液的治疗效果。结果表明,此条件培养液能显著地促进肝细胞增生,改善实验性肝坏死的病理变化,并能提高实验动物的存活率。

人端粒酶逆转录酶转染人胎肝细胞生物学特性

目的探讨端粒酶逆转录酶基因转染人胎肝细胞以获得永生化肝细胞的可行性。方法四步灌流法分离人胎肝细胞,携端粒酶逆转录酶基因载体转染人胎肝细胞,光学显微镜观察转染细胞形态变化及增殖能力,免疫组织化学和流式细胞技术检测转染细胞白蛋白表达情况,同时鉴定转染细胞是否具有糖原合成、尿素氮合成等肝细胞功能。结果端粒酶逆转录酶基因转染人胎肝细胞可以重建人胎肝细胞的端粒活性。转染细胞培养5d时呈集落样生长,12d时增殖融合成片状,且具有表达肝脏特异性蛋白、白蛋白和具备糖原合成、尿素氮合成等肝细胞功能。结论采用端粒酶逆转录酶基因转染人胎肝细胞技术有望获得永生化肝细胞,这可能为细胞移植和生物人工肝治疗各种难治性肝病提供新的细胞来源。

人胎肝细胞悬液治疗重症肝炎25例初步观察

自1988年6月～1990年6月,我们采用人胎肝细胞悬液(以下简称FLC)静脉输注治疗重症肝炎25例(下称治疗组)。全部病例的诊断均符合1984年南宁全国病毒性肝炎会议修订的标准,部分病例经病理证实。以同期未用FLC治疗的重症肝炎10例作为对照(下称对照组)。现将结果报告如下。临床资料一、一般情况治疗组25例中,亚急性重症肝炎(下称亚重肝)12例、慢性重症肝炎(下称慢重肝)13例;男性24例,女性1例;年龄最小6岁,最大59岁。对照组10例中,亚重肝4例,慢重肝6例;男性7例,女性3例;年龄最小9个月,最大57岁。

丹参对培养人胎肝细胞脂质过氧化的影响及其作用机制探讨

利用四氯化碳造成原代培养人胎肝细胞脂质过氧化损伤模型,研究丹参的保肝作用机制。结果显示:丹参可明显减少受损肝细胞丙二醛生成及谷丙转氨酶释出,增强正常及受损肝细胞白蛋白合成及谷胱甘肽过氧化物酶活性,提示丹参具有过氧化作用,其机制与谷胱甘肽过氧化物酶活性增高有关。

人肝癌细胞系7721与原代人胎肝细胞用于体外培养HCV的对比研究

目的 研究丙型肝炎病毒 (HCV)在体外培养原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系 772 1中复制和表达的异同 ,探讨HCV体外培养条件。方法 原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系 772 1分别与HCV感染血清共孵育后 ,用逆转录 聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化检测细胞和培养上清中的HCVRNA和抗原表达。结果 从孵育的第 2～ 3天 ,即可在细胞内和 /或培养上清中间断地检出HCVRNA(其中HCV在 772 1细胞株中的复制至少可达 66d ,HCV在人胎肝细胞中的复制持续 2 5d) ;HCV抗原可在感染细胞内得到稳定表达 ,感染细胞内存在HCV负链RNA杂交信号 ,且多位于细胞浆。结论 两种肝细胞对HCV易感 ,尤其是 772 1细胞可以稳定地支持HCV体外复制 ,可用于HCV体外长期培养的靶细胞。

研究人胎肝细胞治疗肝炎的思考

1985年初,解放军184医院陈成伟大夫在第二军医大学长海医院血液病研究中心费瑞高的协助下,首开先河,用人胎肝细胞(FLC)悬液治疗重症肝炎,据称疗效不错。之后,FLC从仅仅用于抢救重症肝炎发展到治疗急性黄疸型肝炎、慢性活动型肝炎和肝硬化失代偿期患者;

人胎肝细胞治疗重症肝炎、慢活肝和肝硬化现状

现将1989年7月“全国人胎肝临床应用研讨会”有关胎肝治疗重症病毒性肝炎、慢性活动型肝炎和肝硬化的论文概述如下: 一、人胎肝细胞治疗肝病的临床应用(一)重症病毒性肝炎:由于肝细胞再生能力很强,如果是一种既能暂时替代肝细胞的功能,又能刺激肝细胞再生和调节机体免疫的方法,则有可能降低重症肝炎的病死率。近几年。

氟对人胎肝细胞脂质过氧化的影响

目的 研究氟对人胎肝细胞脂质过氧化的影响。方法 体外培养的人胎肝细胞接触不同浓度的氟化钠24小时后,检测人胎肝细胞脂质过氧化物(LPO)水平、还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中LPO、乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性。结果 各氟染毒组培养液中LDH和AST活性均显著高于对照组(P<0.05);细胞内和培养液中LPO水平升高(P<0.01),细胞内GSH含量则明显下降(P<0.01)。结论 氟可使人胎肝细胞脂质过氧化水平升高和CSH含量下降,并且二者均呈现明显的剂量-效应关系。

诱导人胎肝细胞修复损伤的非预定DNA合成的研究(摘要)

射线辐射、某些化学物质和自然环境中的有害因素作用于活体细胞,可以造成不同类型的DNA损伤,但细胞内存在或可诱导产生一系列的代谢修复酶系,以修复细胞所遭受的损伤。