发酵黄芪对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖及衰老相关蛋白表达的影响

目的探讨发酵黄芪对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖及衰老相关蛋白表达的影响。方法体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(HDF),并根据代龄和加药情况分为青年组(30代前的HDF细胞),模型组(40代后的HDF细胞),对照组(用10%正常血清处理的40代后的HDF细胞),实验组(用10%发酵黄芪干预血清处理的40代后HDF细胞)。培养至40代时开始干预,光学倒置显微镜观察各组HDF细胞形态;采用活细胞计数(CCK-8)法检测各组HDF细胞增殖情况;采用分光光度法检测各组HDF细胞β-半乳糖苷酶(β-gal)活性;采用蛋白免疫印迹(Wb)法检测各组HDF细胞p16、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的蛋白表达。结果与青年组比较,模型组、对照组及实验组HDF细胞增殖能力及CDK4蛋白相对表达量均显著降低,且实验组高于模型组和对照组(P<0.05);HDF细胞β-gal活性及p16、CyclinD1蛋白相对表达量均显著升高,且实验组低于模型组和对照组(P<0.05),模型组与对照组间差异无显著性(P>0.05)。结论发酵黄芪可促进HDF细胞增殖,降低β-gal活性,同时抑制衰老相关蛋白的表达,进而发挥抗细胞衰老的作用。

淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞衰老的干预作用研究

目的观察淫羊藿苷对人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5)衰老的干预作用与机制,为明确淫羊藿苷作为有效干预衰老的候选中药单体提供实验依据。方法 MRC-5进行体外培养,利用淫羊藿苷进行干预,观察细胞的传代次数;利用β-半乳糖苷酶染色观察衰老细胞阳性率;MTT法检测细胞活力;分别使用单细胞凝胶电泳和流式细胞仪检测H2O2诱导细胞DNA损伤和凋亡变化。结果淫羊藿苷能够延缓MRC-5细胞的复制性衰老,促进细胞增殖,减轻H2O2诱导的细胞DNA损伤,促进受损细胞的凋亡。结论淫羊藿苷能够延缓二倍体细胞的复制性衰老,这可能与其能够减轻细胞DNA损伤有关。

烹调油烟挥发性有机物对人胚肺二倍体成纤维细胞活性氧水平的影响

目的:研究烹调油烟挥发性有机物(COF VOCs)对人胚肺二倍体成纤维细胞(HELF)活性氧(ROS)水平的影响。方法:用活性炭采集烹调油烟挥发性有机物,对HELF进行染毒,采用MTT试验测得半数抑制浓度(IC50),设计剂量和暴露时间,设立添加和不添加维生素C组,以2',7'-二氯双氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)和双氢罗丹明123(DHR123)进行标记,通过流式细胞术检测细胞ROS水平。结果:COFVOCs刺激HELF12、24、48h的IC50分别是104.9、111.9和127.2μg/mL;HELF胞质内ROS平均荧光强度随COFVOCs剂量增加而增高;线粒体内ROS24、48h暴露于0.8、4μg/mL剂量与阴性对照组相比有统计学差异;维生素C预处理后,ROS平均荧光强度较未预处理时均有所降低,100μg/mL剂量组前后差异有统计学意义。结论:COFVOCs可引起HELF内ROS水平升高,维生素C对细胞的ROS升高有一定的抑制作用。

含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞端粒酶活性的影响

目的观察含何首乌血清对人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)超氧化物歧化酶(SOD)活性、c-myc mRNA表达及端粒活性的影响。方法采用含何首乌血清对2BS细胞株进行处理,用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,RT-PCR检测c-myc mRNA表达,TRAP-ELISA检测端粒酶活性。结果与正常对照组相比,用药组2BS细胞SOD活性明显增加(P<0.05),c-myc mRNA表达无变化,端粒酶活性显著增加(P均<0.05)。结论含何首乌血清对2BS细胞具有抗衰老作用,其机理可能与促进自由基的清除和激活端粒酶活性有关。

喙尾琵琶甲乙醇提取物对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖的影响

目的:通过体外实验,初步研究喙尾琵琶甲乙醇提取物A、B、C对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖的抑制作用,并比较3种提取物的抑制效果。方法:用浓度为3.9～1 000.0μg/mL的A、B、C提取物作用于体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞,采用MTT(噻唑蓝)法检测3种喙尾琵琶甲乙醇提取物对细胞增殖的影响。结果:高浓度的3种喙尾琵琶甲乙醇提取物对人胚肺二倍体成纤维细胞的生长均有显著的抑制作用,并且呈时间-剂量-效应的依赖关系。在质量浓度为1 000.0μg/mL、72 h时,A、B、C对细胞的抑制率达到最大,分别为49.87%、50.13%、42.34%,A、B、C抑制细胞增殖的活性差异无统计学意义。结论:喙尾琵琶甲乙醇提取物可显著抑制人胚肺二倍体成纤维细胞的增殖,不同浓度乙醇提取物之间对细胞增殖的抑制作用相差不大。

不同pH值对人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5生长的影响

目的在不同pH值培养液中培养人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5),观察其生长情况,选出最有利于MRC-5细胞生长的pH值范围。方法采用细胞培养技术,分别在pH值为6.8,6.9,7.0,7.1,7.2,7.3,7.4,7.5,7.6的培养液中培养MRC-5细胞,通过显微技术观察细胞形态、对细胞进行计数,然后对MRC-5细胞的生长情况进行分析比较。结果在不同pH值的培养液中,MRC-5细胞的生长状况不同,细胞数量和细胞形态都有差异,当培养液的pH值为7.2-7.3时,细胞生长形态最好,细胞数量最高可达2.37×106/ml。结论研究表明,培养液的pH值为7.2-7.3时,MRC-5细胞的生长状况最佳。

固本健脑液对人胚肺二倍体成纤维细胞寿命及LPO含量的影响

固本健脑液系以恩施州道地中药材──中国板党为主，辅以健脾、补肾、安神、化瘀等中药加工而成的复方制剂。本实验观察了固本健脑液对人胚肺二倍体成纤维细胞传代次数（寿命）及过氧化脂质（LPO）含量的影响．结果表明；20～200ppm的固本健脑液能显著延长细胞寿命和降低细胞LPO的含量．且明显优于维生素E对照组的治疗作用。

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代。扫描电镜下可见细胞随增龄而由扁平长梭形变为圆球形,伪足、微绒毛递增,细胞胞体变小,细胞凹陷增多且逐步加深。透射电镜显示细胞增龄变化主要为细胞核逐渐变小,核进行性凹陷加深,核膜从部分融合到全部崩解;异染色质渐增,而常染色质递减;核仁变小且疏松;线粒体减少,嵴少,基质凝聚,肿胀,空泡化;粗面内质网减少,脱粒,游离核糖核蛋白体增多;高尔基复合体减少,其囊泡排列紊乱且肿胀;溶酶体递减;脂褐质递增.黄芪组细胞衰老过程中细胞器的变化与上述非黄芪组细胞的衰老变化规律基本相同;但其改变程度显然较轻,变化速率相对缓慢.特别是黄芪组细胞之高尔基复合体、中心体特别发达,虽细胞已衰老而它们却不甚衰老.研究证明黄芪具抗衰延寿的良好效应,以其做为抗衰老延寿命的药物值得高度重视和大力开发.

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞抗衰老作用的研究

近年来,由于世界人口年龄结构迅速趋于老化,衰老机理和抗衰老药物的研究日益为人们所重视,成为老年医学研究的重要课题之一。中药是祖国医学的宝库,有些药物已经在医疗实践中显示出了抗衰老效应。但究竟是个体自然长寿还是服药后寿命延长,目前尚缺乏有力的证据,同时它们的作用机理还有待于运用科学的方法进一步的探讨和证实。首都医学院宣武医院孙晓莉等对此项工作进行了研究和探讨。人胚肺二倍体成纤维细胞是研究衰老的理想的体外模型,其衰老特征和黄芪抗细胞衰老研究已有零星报道,但一般集中在细胞寿命方面,均缺乏多方面、动态系统的观察。

甘草酸对感染人巨细胞病毒的人胚肺成纤维细胞凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨甘草酸对感染人巨细胞病毒(HCMV)的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外培养MRC-5细胞,并将其分为对照组、病毒组、更昔洛韦组(50μg/mL)、甘草酸低剂量组(0.25 mg/mL)、甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)、甘草酸高剂量组(1.00 mg/mL)。接种HCMV不同时间后,分别使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)等蛋白表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 CCK8实验结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组增殖活性均低于对照组,更昔洛韦组、甘草酸中剂量组、甘草酸高剂量组增殖活性均高于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05);甘草酸中剂量组与甘草酸高剂量组增殖活性比较,差异无统计学意义(P>0.05),故选择甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)进行后续实验,并简称甘草酸组。流式细胞仪检测结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组细胞凋亡率均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,经HCMV感染48 h后,病毒组细胞中Cleaved-caspase3、TNF-α、IL-6蛋白相对表达量均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,经HCMV感染24、48、72 h时,病毒组MRC-5细胞TNF-α、IL-6水平均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 甘草酸具有体外抗HCMV效应,可促进感染HCMV的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖,并抑制HCMV感染诱导的细胞凋亡和细胞炎性反应。

大麻素受体2激动剂对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖和分化的影响及机制

目的探讨大麻素受体2(CB2)激动剂JWH133对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖、分化的影响及机制。方法取对数生长期HLF1细胞株,采用细胞计数试剂-8(CCK8)法检测不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00及20.00μmol/L)JWH133及CB2(0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L)拮抗剂AM630对HLF1的增殖能力影响;取对数生长期HLF1细胞分为正常(N)组、5μg/L转化生长因子β1(TGF-β1)组(即0μmol/L JWH133)、10.00μmol/L JWH133(J10)组及J10+5.0μmol/L AM630(AM630)组,培养48 h,采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中胶原蛋白1α1(Col1α1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白及Col1α1、α-SMA mRNA,采用细胞免疫荧光检测各组细胞中α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞百分比。结果随着JWH133浓度的增大,HLF1细胞的吸光度(OD)值逐渐降低,0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L AM630组HLF1存活率均在1附近(P>0.05);J10组HLF1细胞中Col1α1、α-SMA蛋白及p-AKT表达均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞Col1α1、α-SMA mRNA均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞占总细胞比值均较TGF-β1组减少(P<0.05),J10+AM630组则较J10组增多(P<0.05)。结论CB2受体激动剂JWH133可抑制HLF1细胞的增殖及分化,其机制可能与下调PI3K-AKT通路有关。

枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响

目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。

大蒜新素对HCMV主要即刻早期抗原IE72和IE86在人胚肺成纤维细胞中表达的影响

目的 :研究大蒜新素对人巨细胞病毒 (HCMV)即刻早期抗原 (IEAs)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响。方法 :建立HCMVAD16 9毒株 (MOI为 2.5和 0.2 5 )感染细胞模型和大蒜新素 (IC50 和MTC浓度 )干预模型。用WesternBlot检测药物处理后感染细胞中HCMV主要IEAs(IE72和IE86 )表达强度变化 ,并与相应浓度更昔洛韦(GCV)的作用效应相比较。结果 :在高MOI和低MOI感染时 ,不同浓度大蒜新素均能使HCMVIE72和IE86表达强度明显下降 ,对IE86表达的抑制率为IE72的 2倍左右。与GCV相比 ,大蒜新素对IE72的抑制率低于GCV ,而对IE86的抑制效应高于GCV。结论 :大蒜新素明显抑制HCMVIE72和IE86表达 ,对IE86的抑制尤为显著 。

人参皂甙Rb_1、Rg_1、Re和Rh_1对人胚肺成纤维细胞非程序DNA合成的影响

应用３Ｈ－ＴｄＲ和１４Ｃ－ＴｄＲ双标记法，液闪测定不同代龄人胚肺成纤维细胞（２ＢＳ）由丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）诱导的非程序ＤＭＡ合成（ＵＤＳ），以及人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｈ１和Ｒｅ对细胞ＵＤＳ的影响。结果表明，当ＭＭＣ剂量在１０ｎｇ／ｍｌ时，衰老细胞的ＵＤＳ水平下降，而年轻细胞的ＵＤＳ水平显著升高。人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｈ１、Ｒｅ均能显著提高衰老细胞的ＵＤＳ水平，且Ｒｂ１、Ｒｇ１作用更明显。

天然生物材料壳聚糖支架上人胚肺成纤维细胞的生长

采用不同粒度的硅胶粒子作为致孔剂 ,按硅胶和壳聚糖重量比 9∶1,制备了三组不同孔径的壳聚糖多孔支架 .以无孔壳聚糖支架为参照 ,对多孔支架的有效孔径、吸水性进行了比较 .结果表明 :孔径大小由硅胶尺寸控制 ,吸水性随孔径增大而增大 .为研究支架孔径大小对其生物相容性的影响 ,在系列支架上进行了人胚肺成纤维细胞的培养 .细胞种植 1d后 ,多孔支架上的细胞粘附较多 ,而无孔支架上的细胞伸展情况较好 ;细胞培养 5d后 ,所有支架上细胞伸展情况良好 ,孔径越大的支架上细胞增殖越多 .

青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL-I细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的进一步探讨青蒿琥酯的抗纤维化作用及机制。方法取对数生长期人胚肺成纤维细胞（HELF）系HFL-I细胞株，随机分为观察1—4组及对照组，观察1-4组分别加入质量浓度为4、8、16、32mg／L的青蒿琥酯，对照组加入等体积培养液后继续培养。用CCK-8法检测细胞增殖情况（A值），流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率，RT-PCR法测定Survivin mRNA表达。结果观察1-4组G0＋G1期细胞所占比例及细胞凋亡率均显著高于对照组，细胞A值及Survivin mRNA表达均显著低于对照组，且各观察组间亦有显著差异（P〈0．05）。结论青蒿琥酯具有抗肺纤维化作用，可能机制为通过下调Survivin mRNA表达抑制HFL-I细胞增殖、促进HFL-I细胞凋亡。

姜黄素对人胚肺成纤维细胞的生长抑制及细胞外基质合成的影响

目的:研究姜黄素对体外培养人胚肺成纤维细胞(HEF-5)MRC-5增殖、胶原表达和周期分布的影响。方法:体外培养MRC-5细胞,用姜黄素处理,分为正常对照组和10、20、30、40、50、60μmol/L姜黄素组。于37℃继续培养24 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用天狼猩红染色法测定细胞内胶原的表达,用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:姜黄素呈剂量和时间依赖性抑制MRC-5细胞的增生(P<0.05),并降低胶原的生成(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示,细胞主要停滞于G1期。结论:姜黄素能抑制MRC-5细胞的增殖和胶原的增加,并使细胞周期停滞在G1期,提示姜黄素可能通过抑制MRC-5细胞的增殖来减少细胞外基质积聚,从而发挥其抗肺纤维化的作用。

沙利度胺抑制TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞系转分化为肌成纤维细胞

目的研究沙利度胺(THD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-F)向肌成纤维细胞(MF)转分化和对已分化MF的作用。方法体外培养HFL-F,以TGF-β1(5μg/L)诱导HFL-F向MF转分化,通过碱水解法测定羟脯氨酸含量(HYP),免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,半定量RT-PCR测定α-SMAmRNA和Ⅲ型胶原(COLⅢ)mRNA,观察THD(50μg/L)对HFL-F向MF转分化的过程及已分化MF的影响。结果TGF-β1诱导HFL-F 96 h,诱导分化同时加入THD可抑制HYP含量增高和COLⅢ mRNA表达上调(P<0.05),可抑制α-SMA蛋白表达增加,但对于α-SMA mRNA表达没有影响。TGF-β1诱导HFL-F 96 h后再加入THD可抑制COLⅢ mRNA的表达(P<0.05),但对HYP含量、α-SMA蛋白表达量和α-SMA mRNA表达无明显影响。结论TGF-β1可诱导HFL-F向MF转分化,THD可抑制这一过程中α-SMA蛋白与胶原合成。对TGF-β1诱导下已分化的MF,THD可抑制其COLⅢ mRNA的表达。

Fas及FasL和Caspase-3在青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡中的表达(英文)

背景:青蒿琥酯具有减轻肺纤维化的作用,但相关机制的研究罕见报道。目的:探讨青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及其与Fas,FasL,Caspase-3表达的关系。方法:用1,10,100mg/L青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞。采用CCK-8法检测青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR法测定Fas,FasL,Caspase-3的mRNA的表达。结果与结论:青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖,细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P<0.05或P<0.01),Fas,FasL,Caspase-3mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05)。结果证实,青蒿琥酯可通过上调Fas,FasL,Caspase-3mRNA的表达抑制人胚肺成纤维细胞增殖、并促进细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用。

青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞系HFL-Ⅰ细胞胶原合成的影响及机制

目的进一步探讨青蒿琥酯对肺纤维化的治疗作用及机制。方法取对数生长期的人胚肺成纤维细胞(HELF)系HFL-Ⅰ细胞,随机分为观察1～3组及对照组,观察1～3组分别加入质量浓度为1、10、100 mg/L的青蒿琥酯,对照组加入等体积培养液继续培养。用天狼猩红染色法检测胶原蛋白的分泌水平,RT-PCR法测定Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达。结果观察1～3组胶原表达量、Ⅰ型、Ⅲ型前胶原蛋白mRNA表达均显著低于对照组,且各观察组间两两比较有显著差异(P均<0.05)。结论青蒿琥酯具有抗纤维化的作用,可在一定程度上降低胶原分泌,其机制可能为下调Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA表达。