人胚肺细胞系(MU-L1)生物学特性研究

目的:对新建人胚肺细胞系(MU-L1)的生物学特性进行评价,以期建立可用于疫苗生产的人二倍体细胞株.方法:使用不同培养基及血清、不同血清浓度和传代比例培养MU-L1细胞,通过细胞形态、增殖速率和生长动力学等进行比较分析,筛选出较适宜的培养条件,用适宜的培养条件连续培养细胞至生命周期结束.传代过程中检查无菌、支原体和外源病毒因子,并进行染色体核型分析.结果:在常用培养基(MEM、DMEM、M199、DME/F12和PRMI1640)、胎牛血清和新生牛血清中MU-L1细胞均良好生长;按1∶4传代比例,使用含10%新生牛血清的MEM培养基培养,可培养至67代(世代),在生命周期的不同阶段经液氮冻存,复苏活率在91.56%~98.92%,生长良好.染色体核型为正常人二倍体核型,2n=46,无菌、支原体和外源病毒因子检查均为阴性.结论:MU-L1为正常人二倍体细胞系,具备作为病毒性疫苗基质进一步研究和生产应用的价值.

西安市采暖季与非采暖季PM2.5染毒的人胚肺细胞基因差异表达研究

目的寻找与大气污染致病相关的相关基因,为阐明大气污染致病的生物学机制提供科学依据。方法采用mRNA斑点杂交鉴定技术,克隆经采暖季≥75μg/m3 PM2.5与非采暖季<75μg/m3 PM2.5染毒的WI-38人胚肺细胞,分析其间的基因表达差异。放免法测定炎性因子TNF-α、IL-2、IL-6和IL-8。结果与对照组比较,PM2.5>100μg/mL染毒24h后,WI-38人胚肺细胞细胞因子TNF-α、IL-6和IL-8明显升高,IL-2明显减低(P<0.05)。不同浓度PM2.5处理的WI-38人胚肺细胞间差异表达的基因片段,可见48份基因样本在350bp处出现清晰条带;该48份基因样本经斑点杂交后,Tester cDNA杂交的48个斑点中,41份可见黑褐色斑点,而同样样本与Driver cDNA杂交的该48份样本均未见明显显色。结论 PM2.5能诱导WI-38人胚肺细胞产生炎性损伤,≥75μg/m3 PM2.5染毒的WI-38人胚肺细胞存在明显的基因损伤。

苯并(a)芘、预热及其联合作用对人胚肺细胞HSP70合成的影响

用 Western blot方法探讨苯并 (a)芘、预热及其联合作用对人胚肺 (HEL)二倍体细胞热应激蛋白 70(HSP70 )合成的影响。结果表明未经 S9活化的 HEL 细胞 ,在不同剂量的 Ba P处理后 ,可轻度诱导 HSP70的表达 ;经 S9活化的 Ba P作用 HEL 细胞 3h,HSP70表达抑制 ,呈剂量 -反应关系 ,在较高浓度染毒时抑制作用表现明显 (P<0 .0 5 ) ;预热应激的 HEL 细胞 HSP70表达增加 ,但 Ba P染毒 3h后 HSP70表达并不规律 ,具体表现为低剂量 (10～ 5 0 ) μmol/ L诱导 ,而高剂量 (5 0～ 2 0 0 ) μmol/ L 呈抑制趋势。结果提示 ,体外未经代谢活化的 Ba P可以作为应激原诱导热休克反应 ;HSP70表达降低可能是 Ba P代谢活化产物作用的结果 ,预热诱导 HSP70表达增加很可能掩盖了低浓度时 Ba P对

六价铬对人胚肺细胞的毒性及绿茶对其拮抗作用的研究

采用RT-PCR技术检测细胞内p53及bcl-2基因的改变,以观察六价铬[Cr(VI)]对人胚肺细胞(HEL)内癌基因和抑癌基因的影响及绿茶对其的拮抗作用。结果显示,不同浓度的Cr(VI)溶液和绿茶浸泡液处理HEL细胞24h后,5μmol/L及10μmol/L Cr(VI)单独处理组细胞内p53 mRNA和bcl-2 mRNA含量显著高于阴性对照组(P<0·05)。绿茶浸泡液处理组与Cr(VI)单独处理组相比,细胞内p53 mRNA和bcl-2 mRNA含量降低(P<0·05)。提示六价铬可引起p53及bcl-2 mRNA水平升高,绿茶浸泡液可以降低其表达水平。

石棉表面改性对石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度改变的抑制作用

为了探讨研究温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠预处理的温石棉对人胚肺(HEL)细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响。用Flou3/AM标记体外培养的HEL细胞内Ca2+后,将不同浓度的温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡过的温石棉与HEL细胞作用1h,荧光分光光度计测定细胞内[Ca2+]i。结果显示,20、40、80μg/ml温石棉单独作用于HEL细胞1h,可使HEL细胞内[Ca2+]i浓度分别升高3.0%、53.1%和116.7%,且具有明显的剂量-效应关系(r=0·976,P=0·024)。经三种化合物预处理的温石棉组HEL细胞内[Ca2+]i浓度均明显低于未处理温石棉组。得出结论,温石棉可致人胚肺细胞内游离钙离子浓度升高,但用三种化合物预处理温石棉,均可抑制温石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度的升高。

甲基丙烯酸环氧丙酯诱导人胚肺细胞恶性转化机制的研究

[目的 ]研究甲基丙烯酸环氧丙酯 (GMA)诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化的机制。 [方法 ]本研究在建立GMA体外诱导的人胚肺成纤维细胞 (HELF)恶性转化模型的基础上 ,采用mR NA差异显示 (DD PCR)技术 ,对恶性转化细胞同正常细胞之间基因的差异表达状况进行比较分析。 [结果 ]实验结果显示 ,两种细胞在基因表达方面存在明显差异。在转化细胞中克隆到的 5个差异表达基因片段 ,其中 3个高表达基因片段 (cDNA)分别与人核糖体蛋白 (RP)L41、RPL15、RPS16基因高度同源 ;2个差异表达基因片段分别与人促分裂原活化的蛋白激酶激酶激酶 11(MAPKKK 11)和转化生长因子 β诱导的蛋白 (TGFBI)基因高度同源 ,它们在转化细胞中分别呈明显的上调和下调表达。[结论 ]包括上述RP、MAPKKK11和TGFBI多个基因的激活与失活可能与GMA诱导的细胞恶性转化过程有关。GMA在诱导人胚肺成纤维细胞恶性转化过程中。使MAPK及TGF β信号传导通路功能异常 。

纳米二氧化钛暴露人胚肺细胞差异表达基因分析

为探讨纳米二氧化钛(Nano-TiO2)颗粒对人胚肺(HPF)细胞基因表达和基因功能的影响,使用粒径10nmTiO2暴露体外培养的人胚肺细胞24h,提取RNA,应用基因芯片方法,寻找差异表达基因,并对差异基因进行基因本体(GeneOntology,GO)分类.结果表明,纳米TiO2暴露人胚肺细胞,导致514条肺中表达的基因发生差异表达,基因分类显示400条基因涉及生物学过程;415条基因涉及分子学功能;391条基因涉及细胞构成.纳米TiO2作为外界刺激物质,与细胞膜上的受体结合,影响钙、钾离子通道,上调细胞免疫和炎症反应相关的细胞因子TNF、IL1B、IL1A等基因表达.

纳米二氧化钛暴露人胚肺细胞差异表达基因相关通路

为探讨纳米二氧化钛(Nano-TiO2)对人胚肺(HPF)细胞差异表达基因相关通路的影响,采用半致死浓度(0.437mg·mL-1)的10nmTiO2暴露体外培养的人胚肺细胞24h,提取RNA,应用基因芯片技术筛选差异表达基因,分析纳米TiO2对基因通路的影响.结果表明,纳米TiO2暴露人胚肺细胞,导致514条肺中表达的基因发生差异表达,涉及多个KEGG通路和BioCarta通路.纳米TiO2暴露人胚肺细胞可能产生以下生物学效应:1)众多位于细胞外区域和细胞膜上的基因(特别是细胞膜受体基因)差异表达,对外界环境胁迫产生应激反应;2)与炎症相关的细胞因子基因表达大量改变,调控细胞的炎症反应;3)钙离子通路的膜受体基因差异表达,导致大量钙离子内流,调控钙离子信号传导;4)某些基因的差异表达(如OCLN下调),降低了细胞紧密联接力;5)与造血细胞增殖和分化相关的基因差异表达,刺激产生大量白细胞以抵抗感染.

几种化合物对石棉诱导人胚肺细胞产生超氧阴离子的抑制作用

用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或硒酸钠溶液浸泡温石棉１ 小时后，再将其与人胚肺（ＨＥＬ） 细胞共同孵育，测定培养液中超氧阴离子（Ｏ－２ ） 含量。结果显示，温石棉可诱导ＨＥＬ细胞产生Ｏ－２ 。但与未处理温石棉组相比，经３ 种化合物预处理的温石棉所致ＨＥＬ细胞产生的Ｏ－２ 量明显降低，其抑制率随化合物浓度的增加而增高，呈一定的剂量依赖性。表明用上述３ 种化合物预处理温石棉，均可抑制其诱导ＨＥＬ细胞产生Ｏ－２ 。

茶多酚对人胚肺细胞和猴肾细胞毒性的实验研究

通过体外实验，研究了绿茶中提取、纯化的茶多酚对人胚肺细胞和猴肾细胞的毒性作用，结果表明：当细胞培养液中茶多酚浓度分别为５００μｇ和６００μｇ作用１２小时后，大约有５０％的人胚肺细胞和猴肾细胞的生长受到抑制，随着细胞培养液中茶多酚浓度的提高和茶多酚对细胞作用时间的延长，茶多酚对这两种细胞的毒性增强。

石棉表面改性对石棉诱导人胚肺细胞产生羟基自由基的影响

为了研究用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠预处理温石棉对石棉诱导人胚肺(HEL)细胞产生羟基自由基(·OH)的影响,笔者用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉1小时后,再将其与人胚肺细胞共同孵育,利用电子自旋捕获法测定反应体系中羟基自由基信号。结果显示,石棉可诱导人胚肺细胞产生羟基自由基,并且所产生的自由基信号(峰高)随石棉浓度升高而增强,呈一定的剂量依赖性。经3种化合物预处理的温石棉组人胚肺细胞所产生的自由基信号(峰高)均明显低于未处理温石棉组。上述结果表明,温石棉可诱导人胚肺细胞产生羟基自由基,但用3种化合物预处理温石棉,均可抑制温石棉诱导人胚肺细胞产生羟基自由基。

山茱萸不同溶剂萃取部位对D-半乳糖致衰人胚肺细胞影响的实验研究

目的:研究山茱萸不同溶剂萃取部位对D-半乳糖致衰人胚肺细胞的影响。方法:采用MTT法对比不同浓度不同作用时间D-半乳糖对人胚肺细胞的致衰作用。选取合适的D-半乳糖浓度进行造模,用MTT法观察山茱萸不同活性部位对D-半乳糖致衰人胚肺细胞的影响。选取对D-半乳糖致衰人胚肺细胞有保护作用的山茱萸活性部位,进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色实验。结果:4g/L的D-半乳糖在作用72h时,8g/L的D-半乳糖在作用48h、72h时造模具有统计学意义。维生素E和山茱萸制品总提液、生品总提液乙酸乙酯萃取部位、总提液(生品、制品)正丁醇萃取部位、生品总提液水部位、水煎液去多糖(生、制)、水煎液去多糖(生、制)二氯甲烷萃取部位、水煎去多糖(生、制)正丁醇萃取部位、水煎液去多糖(生、制)水部位对D-半乳糖损伤的人胚肺细胞具有保护作用。细胞衰老β-半乳糖苷酶染色实验结果表明,所选山茱萸活性部位可减少D-半乳糖致衰细胞的数量。结论:山茱萸几种溶剂萃取部位可保护D-半乳糖造模损伤的人胚肺细胞。

几种化合物对温石棉诱导人胚肺细胞蛋白激酶C活性的影响

为了探讨几种化合物对温石棉诱导人胚肺(HEL)细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响,该研究用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉1小时后,再将其与HEL细胞共同孵育24小时,测定了HEL细胞胞浆和胞膜中PKC的活性。其结果显示:随着石棉剂量的增加,HEL细胞胞浆和胞膜中的PKC活性逐渐升高,均呈明显的剂量依赖性;经3种化合物预处理的石棉,其所诱导的HEL细胞胞浆和胞膜中的PKC活性均明显低于未处理温石棉组。笔者提示:温石棉可能通过改变细胞内PKC的活性进一步促进肿瘤的发生;用3种化合物预处理温石棉,均可抑制温石棉对HEL细胞PKC活性的诱导作用。

石棉表面改性对石棉所致人胚肺细胞毒性及超微结构改变的影响

目的研究温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠预处理的温石棉对人胚肺(HEL)细胞存活率及超微结构的影响。方法用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉1 h后,再将其与HEL细胞共同孵育,测定细胞存活率及观察细胞超微结构。结果不同浓度的温石棉染毒4 h或24 h,均可使人胚肺细胞的存活率降低,而且其降低程度随石棉浓度的增加而增大,呈一定的剂量—效应关系。经三种化合物预处理的温石棉组HEL细胞存活率高于未处理温石棉组,怛差异无统计学意义。从细胞超微结构的改变看,经三种化合物处理的石棉组均轻于单纯的石棉染毒组。结论温石棉染毒可使人胚肺细胞的存活率降低,致使细胞超微结构发生改变,怛用三种化合物预处理温石棉,均可减轻温石棉的细胞毒性。

三种化合物对温石棉促人胚肺细胞增殖作用的影响

为了探讨几种化合物对温石棉促人胚肺（ＨＥＬ）细胞增殖作用的影响，用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡温石棉１小时后，再将其与人胚肺细胞共同孵育，通过测定［３Ｈ］ＴｄＲ掺入量，来了解人胚肺细胞的增殖状况。结果显示，２．５～１０μｇ／ｍｌ的温石棉、时间作用在２４小时之内，或２０～８０μｇ／ｍｌ温石棉、时间作用在６小时之内均可促使人胚肺细胞增殖。与未处理温石棉组相比，经三种化合物处理的温石棉其促细胞增殖作用明显下降。提示，采用三种化合物溶液浸泡温石棉。

三种化合物对石棉诱导人胚肺细胞产生过氧化氢抑制作用的比较研究

用不同浓度的柠檬酸铝、混合稀土及亚硒酸钠溶液浸泡温石棉１小时后，再将其与人胚肺（ＨＥＬ）细胞共同孵育，测定培养液中的过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）含量。结果显示，未经处理的温石棉可诱导ＨＥＬ细胞产生Ｈ２Ｏ２，并呈明显的剂量反应关系。与未处理温石棉组相比，经３种化合物预处理的温石棉所致ＨＥＬ细胞产生的Ｈ２Ｏ２量明显降低，其抑制率随化合物浓度的增加而增高，呈一定的剂量依赖性。结果表明，用３种化合物预处理温石棉，均可抑制其诱导ＨＥＬ细胞产生Ｈ２Ｏ２。

甲醛与苯系物对人胚肺细胞联合毒性的作用

目的探讨甲醛及苯系物对人胚肺细胞的联合毒性及联合毒作用类型。方法以不同浓度毒物及其混合物对人胚肺二倍体细胞染毒,采用MTT法测各浓度组人胚肺细胞存活率,根据线性回归法求出各毒物及其混合物半数致死浓度(OLC50),以Finney法求出各毒物及其混合物预计半数致死浓度(PLC50),根据预计半数致死浓度与实际半数致死浓度的比值Q判断各毒物联合毒作用类型。结果4种化合物对人胚肺细胞的LC50分别为甲醛0.267×10-3mmol/mL、苯0.086 mmol/mL、甲苯0.081 mmol/mL、二甲苯0.090 mmol/mL。甲醛与苯系物混合染毒Q值在0.5到2.6之间,苯与甲苯、二甲苯混合染毒Q值<0.5,甲苯、二甲苯混合染毒Q值>2.6。结论4种化合物毒性大小顺序是甲醛>苯>甲苯>二甲苯,与其体外毒性大小顺序基本一致;甲醛与苯系物之间联合毒性呈相加作用,苯可以拮抗甲苯、二甲苯的毒性作用,甲苯、二甲苯之间为协同作用。

人胚肺细胞系ELu8801的建立、生物学特性观察及初步应用

人胚胎肺细胞是一类用途广泛的二倍体细胞。八十年代初Hollingdale等发现其可作为伯氏鼠疟原虫(Plasmodiumberghei,P.b)红外期发育的适宜宿主细胞,在体外培养中支持P.b红外期发育成熟,从而开辟了它的新用途。我们在进行疟原虫红外期体外培养研究中,自建了人胚肺细胞系ELu8801,并对其生物学特性进行了观察。

山茱萸生、制品二氯甲烷萃取部位对D-半乳糖致衰人胚肺细胞影响的研究

目的:研究山茱萸生品、制品二氯甲烷萃取部位对D-半乳糖致衰人胚肺细胞影响。方法:以人胚肺细胞为材料,通过制备D-半乳糖细胞衰老模型,以MTT、SOD、NO为指标,观察D-半乳糖对人胚肺细胞的损伤以及山茱萸生品、制品二氯甲烷萃取部位的保护作用,并通过Rt-PCR检测,进一步探讨山茱萸生品、制品二氯甲烷萃取部位对衰老通路的影响。结果:山茱萸生品、制品二氯甲烷萃取部位对D-半乳糖致衰人胚肺细胞增殖有一定的影响;对D-半乳糖致衰人胚肺细胞抗氧化系统表现出保护作用;对衰老相关通路有一定的调控作用。结论:山茱萸生品、制品二氯甲烷萃取部位对D-半乳糖致衰人胚肺细胞有一定的保护作用。