茯砖茶及其配方对脂肪变性L-02肝细胞中TG含量的影响

利用1 mL/L的20%医用脂肪乳剂处理L-02肝细胞48 h复制非酒精性脂肪变性肝细胞,然后加入不同浓度的提取物及配方分别处理24 h和48 h,全自动生化分析仪检测肝细胞内的甘油三酯(TG)水平,探讨茯砖茶提取物和两个配方对脂肪变性L-02肝细胞内TG的影响。结果显示,茯砖茶提取物和配方1与自然恢复组比较均可显著降低脂肪变性肝细胞内TG的水平(P<0.05),而与血脂康组比较无显著差异(P>0.05),显示出茯砖茶和配方1具有广阔的开发应用前景。

石榴皮多酚对脂变L-02肝细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响

研究了石榴皮多酚纯化物、安石榴苷和石榴鞣花酸对脂变L-02肝细胞胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响;采用MTT法筛选石榴皮多酚适宜浓度;体积分数50%胎牛血清的RPMI-1640培养基与L-02肝细胞孵育48 h建立脂肪变性肝细胞模型;实验分为正常组、模型组和治疗组,治疗组加入不同浓度的受施物,继续培养48 h,采用RT-PCR法检测不同受施物对脂变L-02肝细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响;结果显示:石榴皮多酚均能呈剂量依赖性地减弱脂变L-02肝细胞mRNA表达,且以100μg/mL的安石榴苷标品抑制作用最强;表明石榴皮多酚降肝细胞总胆固醇作用是通过降低HMG-CoA还原酶mRNA表达实现的,安石榴苷是石榴皮多酚中降血脂的主要活性形式。

石榴皮多酚对脂变L-02肝细胞胆固醇合成的影响及机制探究

研究了石榴皮多酚纯化物、安石榴苷和石榴鞣花酸对脂变肝细胞胆固醇合成的影响及机制;采用MTT法筛选石榴皮多酚适宜浓度,体积分数50%胎牛血清的RPMI-1640培养基与L-02肝细胞孵育48 h建立脂肪变性肝细胞模型;实验分为正常组、模型组和治疗组,治疗组加入不同浓度的受试物,继续培养48 h,油红O染色定性观察细胞形态和脂滴堆积,高效液相色谱法定量检测细胞内胆固醇含量;紫外分光-速率法检测HMG-CoA还原酶活性变化;结果显示石榴皮多酚均能成剂量依赖性地减少细胞内脂滴的积累、减少细胞内总胆固醇的含量,同时抑制HMG-CoA还原酶的活性,其中以100μg/mL的安石榴苷标品效果最佳。表明石榴皮多酚具有降低肝细胞内总胆固醇的作用,可能是通过抑制HMG-CoA还原酶活性实现的,安石榴苷是石榴皮多酚中降血脂的主要活性形式。

雷公藤甲素对人肝细胞L-02氧化损伤的初步研究

目的研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞凋亡和活性氧生成的影响。方法体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的毒性作用,H2DCFH-DA探针流式细胞仪检测细胞中ROS生成量,并测定细胞SOD活性、MDA含量及LDH释放量的变化。结果雷公藤甲素诱导L-02细胞中ROS生成,且随时间的延长而增多,至12h时达峰值(P<0.01);同时,雷公藤甲素也能诱导细胞中MDA含量及LDH释放量的增加,诱导SOD活性的降低。结论雷公藤甲素体外诱导人正常肝细胞L-02细胞凋亡可能与其促进活性氧生成有关。

原花青素对MSG诱导的肥胖小鼠及脂肪变性L-02肝细胞的降脂作用

研究原花青素对谷氨酸钠(MSG)诱导的肥胖小鼠和脂肪乳诱导的脂肪变性L-02肝细胞的降脂作用。谷氨酸钠诱导的雄性肥胖小鼠模型建立后,分为正常对照组、模型组、阳性药非诺贝特组和原花青素100 mg/kg、250 mg/kg剂量组,连续灌胃10周,测量小鼠体质量、体长、腹围,并计算李氏指数,测定血清中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平。建立脂肪变性L-02肝细胞模型,以非诺贝特为阳性对照,给予原花青素刺激液培养24 h后,测定细胞内TG含量。结果表明,与模型组相比,原花青素100 mg/kg、250 mg/kg剂量组均能显著降低肥胖小鼠血清TC和TG水平(P<0.05),原花青素25μg/mL、50μg/mL和100μg/mL剂量组均能极显著降低脂肪变性L-02肝细胞内TG水平(P<0.01)。

三价铬与六价铬化合物对L-02肝细胞毒性的比较

目的 评价三价铬 (Cr(III) )和六价铬 (Cr(VI) )对L -0 2肝细胞的细胞毒效应差异。 方法 以L -0 2肝细胞为研究对象 ,用MTT法检测L -0 2肝细胞死亡指数 ,比色法检测细胞内乳酸脱氢酶 (LDH)、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶 (AST)的渗出程度。 结果 细胞处理 12h ,Cr(VI)处理组的细胞死亡指数明显高于Cr(III)细胞处理组 ,在 4～ 2 5 6μmol/L浓度范围具有明显的浓度 -效应关系 (相关系数r =0 .945 ,P <0 .0 5 )。细胞处理 5h后 ,Cr(VI)低剂量和高剂量组 (16μmol/L和 12 8μmol/L)LDH的漏出比均明显高于相应剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 ) ;在Cr(VI)高剂量组 (12 8μmol/L)ALT与AST的漏出比显著高于相同剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 )。 结论 Cr(VI)对L -0 2肝细胞的细胞毒效应明显大于Cr(III)。

六价铬诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤的关系研究

目的 研究六价铬[Cr（Ⅵ）]对L-02肝细胞凋亡率和线粒体功能的影响。初步探讨二者之间的关系。方法 选取0、2、4、8、16、32和64μmol／L Cr（Ⅵ）溶液处理L-02肝细胞6h，采用流式细胞分析检测细胞凋亡率；荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔（PTP）的开放程度和线粒体膜电位（△ψm）的变化。结果 2～64μmol／LCr（Ⅵ）对L-02肝细胞具有细胞毒性，随着Cr（Ⅵ）浓度的增加L-02肝细胞凋亡率升高；线粒体PTP开放程度增加；线粒体膜电位（△ψm）降低，且与对照组比较差异均有显著性（P〈0．05）。结论 Cr（Ⅵ）诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤有关。

建立L-02肝细胞脂肪变模型方法比较及脂肪乳诱导脂变条件的优化

目的:比较二甲基亚砜(DMSO)溶解油酸、乙醇溶解油酸、无水乙醇、50%胎牛血清和医用脂肪乳对L-02肝细胞的影响,优化L-02肝细胞脂肪变性模型的良好条件与方法。方法:用含10%胎牛血清PRMI-1640培养液培养细胞,细胞均匀分布进入对数生长期后随机分为正常对照组、DMSO组、DMSO+油酸组、乙醇+油酸组、乙醇组、50%胎牛血清组和医用脂肪乳组,分别用DMSO+油酸、乙醇+油酸、0.4%乙醇、50%胎牛血清(FBS)和20%医用脂肪乳培养48 h,用MTT法检测细胞活力,油红O染色观察细胞数、细胞内脂滴,用试剂盒检测细胞内甘油三酯及蛋白质。用医用脂肪乳培养L-02肝细胞,研究医用脂肪乳诱导L-02肝细胞脂肪变性的浓度和时间。结果:DMSO组和乙醇组细胞生长呈下降趋势,DMSO+油酸组和乙醇+油酸组细胞生长均呈现先升高后降低趋势。甘油三酯和蛋白质测定表明,医用脂肪乳能很好地诱导L-02肝细胞脂肪变性,医用脂肪乳含量10%,造模培养49 h,细胞脂变效果最好。结论:医用脂肪乳诱导L-02肝细胞,脂变率高、脂变细胞形态好,适合L-02肝细胞脂变模型的建立。

吡咯里西啶生物碱Jacoline对人正常肝L-02细胞内谷胱甘肽含量及还原酶活性的影响

目的:探讨吡咯里西啶生物碱Jacoline对人正常肝L-02细胞内谷胱甘肽含量及谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase,GR)活性的影响。方法:①采用DTNB法检测100μmol/L Jacoline与L-02细胞孵育24、48、72h后以及不同浓度Jacoline与L-02细胞孵育72h后对L-02细胞内谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量及其GSH/GSSG的影响。②采用NADPH法检测100μmol/LJacoline作用24、48、72h后对L-02细胞内GR活性的影响。结果:①DTNB比色法显示,100μmol/LJacoline与L-02细胞孵育不同时间,谷胱甘肽和GSH含量随着时间的增加而减少,GSH/GSSG的比例也随时间的延长而减少;不同浓度的Jacoline与L-02细胞作用72h后,谷胱甘肽和GSH含量以及GSH/GSSG随浓度的增加而减少;②100μmol/L Jacoline与L-02孵育不同时间,GR的活性随着时间的增加而升高。结论:Jacoline对L-02细胞内谷胱甘肽和GSH含量、GSH/GSSG以及GR还原酶的活性有明显影响。

双酚A对人胚肝细胞L-02的毒性作用研究

[目的]探讨双酚A对肝细胞L- 0 2的毒性作用及可能损伤机制。[方法] 1、10、5 0、10 0 μmol/L浓度的双酚A作用肝细胞L 0 2后,检测双酚A对肝细胞L-0 2的存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化、细胞凋亡及凋亡相关基因P5 3、caspase3mRNA表达的影响。[结果]双酚A处理后,肝细胞L 0 2的存活率随着双酚A浓度的增加而下降,在≥5 0 μmol/L浓度,细胞的存活率显著降低(P <0 .0 1)。双酚A诱导肝细胞L -0 2中的SOD含量降低(P <0 .0 1) ,GSH和MDA含量在1μmol/L明显降低(P <0 .0 5 ) ,而后随着剂量的增加升高明显(P <0 0 1)。CAT水平先随着剂量的增加而升高到10 μmol/L的(10 5 .68±9.63 )U/g蛋白,而后随着剂量的增加而显著降低(P<0 .0 1)。≥5 0 μmol/L浓度的双酚A能明显诱导肝细胞L 0 2凋亡和P5 3、caspase3mRNA的表达升高(P <0 .0 1)。凋亡率从对照组的(8.16±0 .0 7) %上升到10 0 μmol/L的(17.2 0±1.2 5 ) % ,5 0、10 0 μmol/L浓度P5 3和caspase3mRNA表达分别是对照组的(1.42±0 .2 5 )、(1.65±0 .13 )、(1.41±0 .12 )和(1.77±0 .0 6)倍。[结论]双酚A对肝细胞L 0 2具有细胞毒性和氧化损伤作用,并能诱导肝细胞L 0 2发生凋亡和P5 3。

鼠胚胎肝细胞在体外L-聚乳酸支架上的长期培养及其成熟化诱导

目的 研究三维生物降解材料 L-聚乳酸 (PL L A)对胚胎肝细胞的支持作用及制瘤素 M(OSM)、尼克酰胺 (NA)和二甲亚砜 (DMSO)在胚胎肝细胞成熟化中的作用 ,探讨胚胎肝细胞在肝脏组织工程中应用的可行性。方法 将两步法分离获得的 E14 .5 - C5 7BL/6 Cr Slc小鼠胚胎肝细胞接种于具有三维立体多孔结构的 PL L A支架后 ,在含有及不含有 OSM、NA和 DMSO的 Williams'E条件培养基中进行原代长期培养 ,了解其增殖能力、形态及功能变化。 结果 与单层培养相比 ,三维立体 PL L A支架培养胚胎肝细胞其细胞数量与白蛋白的分泌量均明显增加 ;单层培养中 ,单独添加 OSM组白蛋白分泌仅有轻微增加 ,但 PL L A培养中 OSM组的胚胎肝细胞白蛋白分泌量明显增加 ;无论是单层培养或 PL L A培养 ,OSM/NA/DMSO组白蛋白分泌均明显增加。 结论 三维 PL L A支架是胚胎肝细胞培养的良好支持物 ;OSM、NA和 DMSO可明显促进肝脏实质细胞在体外的成熟。

苦参碱对L-02人肝细胞系液氮下冻存复苏后功能的影响

目的:了解苦参碱(matrine)对L—02人肝细胞系超低温冻存复苏后功能的影响,探索一种合适肝细胞保存的方法.方法:常规培养的L-02人细胞系用胰酶消化后,将收集的L-02人细胞系分别以六种不同的冻存液(二甲基亚砜、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+0.2mg/L苦参碱、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+2mg/L苦参碱、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+6mg/L苦参碱、二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+10mg/L苦参碱)在液氮中冷冻保存1mo.1mo后快速复苏L-02人肝细胞系,做存活率、形态学及功能检测.结果:含有不同浓度的苦参碱冻存液保存的L-02人肝细胞系其活率、形态学及功能表现均有所不同,其中单用二甲基亚砜(DMSO)的冻存液效果最差;二甲基亚砜+低分子右旋糖苷(Detrax-40)+6mg/L苦参碱冻存液效果最佳.二甲基亚砜+低分子右旋糖苷(Detrax-40)+6mg/L苦参碱冻存液组复苏后L-02人肝细胞系存活率为(89.6±3.4%),细胞形态与未冻存组相似,其尿素及白蛋白分泌量与其他冻存液组有显著差异(P<0.05).结论:二甲基亚砜+低分子右旋糖苷+6mg/L苦参碱联合冻存液显著提高了L-02人肝细胞系的冻存质量.

Cr(VI)对L-02肝细胞线粒体能量代谢的影响

目的 探讨六价铬（D（Ⅵ））对L-02肝细胞线粒体能量代谢的影响。方法 用浓度为2、4、8、16、32、64、128、256、512μmol／LCr（Ⅵ）溶液作用于L-02肝细胞培养12h，以MTT法检测细胞存活指数以及线粒体中琥珀酸脱氢酶的活性；选取细胞存活率大于70％的5个D（Ⅵ）浓度，用高效液相色谱法检测不同浓度D（Ⅵ）对肝细胞中腺苷酸（ATP，ADP，AMP）含量的影响，并分析ATP／ADP比值以及负荷能量（EC）的变化。结果在2～512μmol／LCr（Ⅵ）处理浓度，Cr（Ⅵ）对L-02肝细胞具有明显的细胞毒性，其细胞存活指数与G（Ⅵ）处理浓度呈明显负相关（r=-0．933）；在4～32μmol／L Cr（Ⅵ）浓度范围，染毒组肝细胞内腺苷酸（ATP，ADP，AMP）含量以及ATP／ADP比值随Cr（Ⅵ）染毒浓度的增加呈明显下降趋势，与对照组比较P〈0．05。而EC无明显变化（P〉0．05）。结论 Cr（Ⅵ）对L-02肝细胞线粒体能量代谢存在明显抑制作用。

去甲肾上腺素对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L-02增殖、凋亡的影响

目的观察去甲肾上腺素(NE)对人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞L-02增殖、凋亡的影响。方法体外培养HepG2细胞和L-02细胞,分别加入不同浓度NE处理,继续培养,采用MTT法观察细胞增殖情况,HE染色和Annexin V-FITC/PI染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术观察细胞凋亡情况。结果经0.1、1、10、50μmol/L NE处理24、48 h,HepG2细胞OD值显著下降(P均<0.05),L-02细胞OD值无明显变化。10μmol/L NE作用于HepG2细胞可见典型的凋亡形态学改变,胞质收缩、深染,核染色质浓缩;L-02细胞在NE作用前后形态学均无明显改变。HepG2细胞加入10μmol/L NE后部分细胞呈绿色(为早期凋亡表现),加入50μmol/L NE后部分细胞膜呈绿色,细胞核呈红色(为晚期凋亡表现);L-02细胞均未显示有荧光。0.1、1、10μmol/L NE作用于HepG2细胞24 h后,其凋亡率均显著高于对照组(0μmol/L NE),且呈剂量依赖关系(P均<0.05);而上述浓度NE作用于L-02细胞24 h后,其凋亡率较对照组先增高后降低(P均<0.05)。结论 NE可以抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,而对L-02细胞增殖和凋亡没有影响,提示其在特定类型肝癌临床治疗中具有潜在价值。

鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用

建立由游离脂肪酸(free fat acid,FFA)诱导的体外人肝细胞L-02非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型,探究益生菌发酵乳在模型中对人肝细胞的益生作用。利用FFA(油酸∶棕榈酸=2∶1,摩尔比)诱导人肝细胞脂肪变性,通过细胞存活率、胞内甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)含量、培养液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量及细胞凋亡率等指标来评价脂肪变性模型,探讨鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠4周后的血清在模型中对人肝细胞L-02的影响。结果表明,当模型中FFA的浓度为1.5和2 mmol/L时,人肝细胞的存活率显著低于未添加(P<0.05),均低于32%,细胞数量明显减少且形状发生变化;当FFA浓度为1 mmol/L时,人肝细胞存活率较高,为86.37%,脂滴数量达到最高,此时建立的NAFLD细胞模型中胞内TG含量和培养液中AST含量分别为5.73 mmol/L和113.50 U/L,均显著高于未添加(P<0.05),而胞内TC含量及培养液中ALT含量则无显著性差异(P>0.05),且细胞凋亡率差异较小。鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠后的血清降低了NAFLD模型中肝细胞的脂滴数量,胞内TG含量及大鼠血清细胞培养液中AST含量均显著低于未干预菌株的对照组大鼠血清(P<0.05),分别为1.95 mmol/L和93.33 U/L;细胞凋亡率较对照组下降了2.96%,正常细胞数量上升了4.50%。利用1 mmol/L的FFA可以建立人肝细胞L-02的NAFLD模型,鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中人肝细胞L-02的脂肪变性具有改善作用。

应用微载体Cytodex3高密度培养L-02人肝细胞系

目的 探讨用微载体进行 L - 0 2人肝细胞系高密度培养的方法 ,以期为生物人工肝提供有应用价值的生物材料。 方法 在限制贴壁的条件下 ,采用 Cytodex3为材料进行 L- 0 2人肝细胞的微载体培养 ,诱导肝细胞聚集体的形成 ,定期进行细胞计数及培养上清白蛋白、尿素、谷草转氨酶 (AST)、乳酸脱氢酶 (L DH )等生化指标的检测 ,并在光镜和透射电镜下观察生长情况。 结果 培养至第 6天时 ,所有的微载体均包满细胞 ,并形成微载体诱导的肝细胞聚集体 ,细胞数量达最高峰为 (17.1± 0 .76 )× 10 7/瓶 ,同时白蛋白和尿素的合成亦最高 ,浓度分别为5 3.81± 1.6 4m g/ L 和 5 .35± 0 .13m mol/ L。 结论 Cytodex3培养的 L- 0 2人肝细胞可形成高密度的肝细胞聚集体 ,具有一定的生物合成和代谢功能。

丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球对肝细胞L-02的生长抑制作用

目的 研究丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯磁性纳米球 (MMC PBCA MNPS)、PBCA MNPS和MF(磁流体 )以及MMC对正常人肝细胞株 (L 0 2细胞 )生长抑制作用的影响。方法 用乳化聚合法分别制备了PBCA MNPS与MMC PBCA MNPS;采用MTT比色法研究了不同浓度的MMC PBCA MNPS、PBCA MNPS、MF与MMC对L 0 2细胞生长抑制作用的影响 ;用自动生化仪测定了乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果收稿日期 :2 0 0 4-0 2 -0 3 ,修回日期 :2 0 0 4-0 3 -19基金项目 :国家“863”资助项目 ( 2 0 0 2AA2 14 12 1) ;广东省攻关资助项目 ( 2 0 0 2C3 0 10 3 )作者简介 :任 非 ( 1974-) ,女 ,博士 ,研究方向 :生物药剂学 ,Tel:0 2 0 6164 1888 872 3 6,E mail:renfeisky @tom .com ;陈建海 ( 1947-) ,男 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向 :生物高分子材料 ,生物药剂学不同浓度的MMC PBCA MNPS对L 0 2细胞的相对抑制率(RIR % )为 :10 0 %、15 1%、2 5 1%、32 1%、39 9%与 4 5 0 % ;不同浓度的PBCA MNPS的RIR %依次为 :1 8%、5 2 %、10 0 %、12 9%、15 1%与 2 9 9% ;不同MMC浓度的RIR %依次为 :2 2 1%、35 1%、4 6 1%、6 2 0 %、80 1%与 88 9%。MF不仅不抑制L 0 2细胞的生长 ,还有利于细胞的生长。按照相对生长率 (RGR % ) ,MMC PBCA

楤木芽对脂肪变性肝L-02细胞脂代谢影响研究

目的：探讨野生与栽培楤木芽水提物、总皂苷及其化学成分楤木皂苷A对脂肪变性肝细胞L-02脂代谢的干预作用。方法：采用含医用脂肪乳的培养液诱导建立肝细胞脂肪变性模型,分别给予高浓度组（100μg/m L）、中浓度组（50μg/m L）和低浓度组（10μg/m L）野生与栽培楤木芽水提物、野生与栽培楤木总皂苷和楤木皂苷A进行培养,24 h后测定肝细胞内甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）的含量。结果：该研究细胞造模成功。与对照组比较,模型组TC和TG含量均显著升高（P〈0.05）。与模型组比较,野生楤木芽总皂苷、栽培楤木芽总皂苷和楤木皂苷A均可降低TC的含量（P〈0.05）,其中栽培楤木芽总皂苷低浓度组降低TC效果优于其他组（P〈0.05）,且在10~100μg/m L范围内呈现量效关系;野生楤木芽总皂苷（低、中浓度组）、野生楤木芽水提物（中浓度组）和楤木皂苷A（低、中、高浓度组）可降低细胞内TG的含量（P〈0.05）。结论：楤木芽总皂苷和楤木皂苷A对体外肝细胞脂肪变性模型可产生积极的脂代谢影响,具有一定的潜在开发价值。