亚砷酸钠对人胚胎肺成纤维细胞p53基因表达的诱导作用观察

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对体外培养的人胚胎肺成纤维细胞(HELF)p53基因表达的影响。方法以0、3、9、15μmol/L的NaAsO2处理体外培养的HELF24h,然后用Real-ti me PCR检测p53mRNA的表达,免疫组化SABC法检测p53蛋白水平。结果3、9、15μmol/L NaAsO2处理24h后,HELF中p53mRNA及蛋白表达均明显增高(P<0.05),且除9、15μmol/L组间p53mRNA表达无明显差异外,其余各组mRNA及蛋白表达水平均随NaAsO2剂量升高而增加(P<0.05)。直线相关分析显示,HELF中p53mRNA及蛋白表达均与NaAsO2剂量呈正相关(r=0.947,P<0.01;r=0.992,P<0.01)。结论NaAsO2可诱导HELF中p53mRNA和蛋白表达增加,并与剂量呈正相关。

血小板源生长因子诱导人胚胎肺纤维细胞增殖信号转导通路研究

目的研究血小板源性生长因子(PDGF)对人胚胎肺纤维细胞(HFL1)的增殖作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PDGF对HFL1的增殖作用,观察不同浓度细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059、p38激酶抑制剂SB203580及PI-3K激酶抑制剂Wortmannin(WMN)对PDGF诱导HFL1增殖作用的影响。结果PDGF 50 ng/ml时对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性;PD98059 1μmol/L、WMN 100 nmol/L、SB2035805μmol/L可抑制PDGF诱导的HFL1增殖。结论PDGF诱导HFL1增殖是通过蛋白激酶和PI-3K信号转导途径实现的。

纤维连接蛋白诱导人胚胎肺纤维细胞增殖的MAPK信号转导通路研究

目的探讨纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺纤维细胞(HFL1)增殖的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路。方法采用不同浓度FN刺激HFL1,观察细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38蛋白激酶抑制剂SB203580对FN诱导HFL1增殖作用的影响。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。结果FN对HFL1诱导增殖作用呈剂量依赖性升高趋势,在50ng/ml时作用显著;PD98059和SB203580可抑制FN诱导的HFL1细胞增殖。结论FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过MAPK信号转导途径实现。

p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞凋亡中的作用

目的探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠（NaAsO2）致人胚胎肺成纤维细胞（HELF）凋亡中的作用。方法分别取转染了p53质粒HELF细胞（p53组）、转染了PC质粒的HELF细胞（PC组）、常规培养的HELF细胞（正常组），在6孔板中培养48h后，分别加入0、3、9、15mmoL／LNaAsO2溶液，培养24h后，用real-timePCR法检测p53、Bax、bcl．2mRNA基因表达水平。采用免疫组织化学SABC法检测p53、Bax、bcl-2基因蛋13表达水平；用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果p53组细胞p53基因mRNA表达水平（0．51±0．29）低于Pc组及正常组[（1．32±0．26），（1．00±0．20），P均〈0．05]，p53组p53基因蛋白表达水平[（4．10±1．20）％】低于Pc组和正常组[（8．00±1．63）％、（7．90士1．79）％，P均〈0．05]：p53组、Pc组、正常组在染砷0、3、9、15mmol／L时，细胞凋亡率[（0．57±0．28）0／0、（22．91±4．86批、（40．05±3．93溉、（44．87±3．58）％，（0．65±0．24）％、（14．09土3．49）％、（20．31±3．66）％、（32．42±3．63）％，（0．56±0．25）％、（12．14±3．70）％、（19．61±3．63）％、（30．43±2．83）％]、BaxmRNA表达水平[（12．73土3．96）、（25．12士6．42）、（104．96±26．77）、（154．04±3052），（14．63±3．57）、（36．75±3．67）、（272．26±66．11）、（846．12±243．36），（14．75±5．65）、（37．22±11．27）、（278．51±37．42）、（861．67±369．29）]、Bax蛋白表达水平[（15．07±0．83）％、（23．79±3．99）％、（3851±158）％、（53．86±124）％，（15．43±1．45）％、（36．11±1．37）％、（56．86±1．97）％、（76．09±2．01）％，（15．20士1．03）％、（35．25±1．09）％、（55．56±2．17）％、（74．48±2．85）％]均随着染毒剂量的增加而增高（P均〈0．05），而bcl．2mRNA表达水平[（443．00±244．47）、（156．79士53．18）、（62．13±13．66）、（23．10±6．44），（420．55．4．110．77）、（48．15士10．02）、（14．91±6．53）、（7．54±2．62），（577．75±123．22）、（49．68±10．11）、（12．41±1．28）、（7．22±1．89）]、bcl-2蛋白表达水平[（47．20±3．77）％、（41．80±2．94）％、（36．00士2．36）％、（29．00±2．91）％，（45．90士4．15）％、（35．70±2．77）％、（29．80±2．78）％、（24．80±2．66）％，（46．70士3．47）％、（36．20±2．90）％、（30．10士3．21）％、（25．10±2．28）％]均随着染毒剂量的增加而降低（P均〈O．05）；在染砷3、9、15mmol／L时，p53组的细胞凋亡率、bcl．2mRNA表达水平、bcl-2蛋白表达水平均高于同-染砷剂量的正常组和PC组（P均〈0．05），而BaxmRNA表达水平、Bax基因蛋白表达水平均低于同-染砷剂量的正常组和Pc组（P均〈0．05）。结论p53基因减少了NaAsO：致HELF的凋亡。可能是通过改变部分凋亡途径实现。

麦冬多糖对转化生长因子-β1诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型转化的影响

目的观察麦冬多糖(OJP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚胎肺成纤维(HEL)细胞表型转化的影响,探讨其分子机制。方法将经6ng/mL诱导TGF-β1的HEL细胞作为模型组,加入25、50、100μg/mL OJP继续培养的HEL细胞作为OJP干预组。通过电镜观察细胞的超微结构;实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA和COLⅠmRNA表达;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、Smad2蛋白和p-Smad2蛋白表达。结果模型组及25、50、100μg/mL OJP干预组细胞的存活率分别为(99.65±1.55)%,(88.39±1.68)%,(82.77±1.96)%和(79.48±1.74)%,OJP干预组存活率低于模型组且随浓度的增加呈剂量依赖趋势,差异有统计学意义(P均<0.05);100μg/mL OJP干预组细胞表面微绒毛减少、微丝变短,胞浆内线粒体数目下降,粗面内质网减少;模型组和100μg/mL OJP干预组α-SMA mRNA表达量为(1.00±0.09)和(0.69±0.05),COLⅠmRNA表达量为(1.02±0.11)和(0.86±0.09),100μg/mL OJP干预组细胞α-SMA和COLⅠmRNA表达较模型组下调(P均<0.05);与模型组比较,100μg/mL OJP干预组α-SMA、COLⅠ、Smad2和p-Smad2蛋白表达明显下降(P均<0.01)[α-SMA蛋白:(0.48±0.03)比(1.56±0.02);COLⅠ蛋白:(0.41±0.02)比(1.66±0.02);Smad2蛋白:(0.71±0.01)比(1.34±0.01);p-Smad2蛋白:(0.69±0.01)比(1.52±0.01),P均<0.05]。结论麦冬多糖可能通过干预TGF-β/Smads信号通路,在一定程度上抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。

p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠（NaAs02）致人胚胎肺成纤维细胞（HELF）凋亡中的作用.方法 分别取转染了p53质粒HELF细胞（p53组）、转染了PC质粒的HELF细胞（PC组）、常规培养的HELF细胞（正常组）,在6孔板中培养48 h后,分别加入0、3、9、15 mmoL/L NaAsO2溶液,培养24 h后,用real-time PCR法检测p53、Bax、bcl-2 mRNA基因表达水平,采用免疫组织化学SABC法检测p53、Bax、bcl-2基因蛋白表达水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 p53组细胞p53基因mRNA表达水平（0.51±0.29）低于PC组及正常组[（1.32±0.26）,（1.00±0.20）,P均〈0.05],p53组p53基因蛋白表达水平[（4.10±1.20）%]低于PC组和正常组[（8.00±1.63）%、（7.90±1.79）%,P均〈0.05];p53组、PC组、正常组在染砷0、3、9、15 mmol/L时,细胞凋亡率[（0.57±0.28）%、（22.91±4.86）%、（40.05±3.93）%、（44.87±3.58）%,（0.65±0.24）%、（14.09±3.49）%、（20.31±3.66）%、（32.42±3.63）%,（0.56±0.25）%、（12.14±3.70）%、（19.61±3.63）%、（30.43±2.83）%]、Bax mRNA表达水平[（12.73±3.96）、（25.12±6.42）、（104.96±26.77）、（154.04±3052）,（14.63±3.57）、（36.75±3.67）、（272.26±66.11）、（846.12±243.36）,（14.75±5.65）、（37.22±11.27）、（278.51±37.42）、（861.67±369.29）]、Bax蛋白表达水平[（15.07±0.83）%、（23.79±3.99）%、（3851±158）%、（53.86±124）%,（15.43±1.45）%、（36.11±1.37）%、（56.86±1.97）%、（76.09±2.01）%,（15.20±1.03）%、（35.25±1.09）%、（55.56±2.17）%、（74.48±2.85）%]均随着染毒剂量的增加而增高（P均〈0.05）,而bcl-2 mRNA表达水平[（443.00±244.47）、（156.79±53.18）、（62.13±13.66）、（23.10±6.44）,（420.55±110.77）、（48.15±10.02）、（14.91±6.53）、（7.54±2.62）,（577.75±123.22）、（49.68±10.11）、（12.41±1.28）、（7.22±1.89）]、bcl-2蛋白表达水平[（47.20±3.77）%、（41.80±2.94）%、（36.00±2.36）%、（29.00±2.91）%,（45.90±4.15）%、（35.70±2.77）%、（29.80±2.78）%、（24.80±2.66）%,（46.70±3.47）%、（36.20±2.90）%、（30.10±3.21）%、（25.10±2.28）%]均随着染毒剂量的增加而降低（P均〈0.05）;在染砷3、9、15 mmol/L时,p53组的细胞凋亡率、bcl-2 mRNA表达水平、bcl-2蛋白表达水平均高于同一染砷剂量的正常组和PC组（P均〈0.05）,而Bax mRNA表达水平、Bax基因蛋白表达水平均低于同一染砷剂量的正常组和PC组（P均〈0.05）.结论 p53基因减少了NaAsO2致HELF的凋亡,可能是通过改变部分凋亡途径实现.

人胚肺间充质干细胞对放射性肺炎肺组织损伤的修复作用

目的研究人胚肺间充质干细胞(MSC)对放射性肺炎肺组织的修复作用。方法取3～5个月的流产胎儿,按照人骨髓MSC的体外培养方法,获得贴壁的人胚肺细胞,观察其形态、细胞周期和体外诱导分化潜能。通过培养放射性肺炎肺泡上皮细胞,利用细胞培养技术体外测定人胚肺MSC修复放射损伤肺组织的能力,对比检测实验及对照组TGF-β1的含量。结果人胚肺MSC可在体外扩增培养,可传至17代以上,其形态及生长特点不发生明显改变,处于G0/G1期的细胞多,具有典型的干细胞增殖特点。其免疫表型与骨髓来源的MSC相似,并能有效调控放射性损伤后的肺泡上皮的生长。结论人胚肺MSC能有效修促进肺泡上皮细胞的生长,且能对放射性损伤后肺上皮细胞进行修复。

人胚肺间充质干细胞体外培养及生物学特性的实验研究

目的建立体外培养人胚肺间充质干细胞(MSCs)的培养体系并探讨其部分生物学特性。方法取3～5个月的流产胎儿,按照人骨髓MSCs的体外培养方法,获得贴壁的人胚肺细胞,研究其形态、细胞周期和体外诱导分化潜能。结果人胚肺MSCs可在体外扩增培养,可传至17代以上,其形态及生长特点不发生明显改变,处于G0/G1期的细胞多,具有典型的干细胞增殖特点。其免疫表型与骨髓来源的MSCs相似。结论从人胚肺中可分离培养出MSCs,可以在体外扩增,并可诱导向成骨、软骨和脂肪细胞分化。

RNAi构建p53基因低表达细胞

目的构建p53基因低表达的人胚胎肺成纤维细胞(HELF)。方法利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术建立p53基因低表达的HELF。采用Real-time PCR法及免疫组织化学SABC法,分别从mRNA和蛋白水平检测不同组(p53基因低表达细胞组、对照细胞组、正常细胞组)HELP的p53基因表达改变。结果转染p53质粒组(低表达组)细胞,p53基因mRNA和蛋白表达水平均较正常细胞组及转染PC质粒组细胞明显降低,差别有意义(P<0.05),表达量约是正常细胞的50%;转染PC质粒组(对照组)细胞与正常组细胞p53基因mRNA表达间差异无意义(P>0.05)。结论p53基因低表达HELF构建成功。

PDGF、FN诱导FHL1细胞增殖的PI3K信号转导通路研究

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)和纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺成纤维细胞(HFL1)增殖的磷酸酰基醇-3-激酶(PI3K)信号转导通路。方法采用不同浓度的PDGF和FN分别刺激HFL1并观察PI3K抑制剂wortmannin(WMN)对PDGF、FN诱导HFL1增殖作用的影响。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。结果PDGF和FN对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性升高趋势,二者均在50ng/mL时作用显著;PI3K抑制剂wortmannin可抑制PDGF和FN诱导的HFL1细胞增殖。结论PDGF和FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过PI3K信号转导途径实现。