人胰淀素和烟碱诱导相同离子通道的激活

目的:观察人胰淀素和烟碱对大鼠脑乙酰胆碱能神经元膜上受体通道活动的影响。方法:在急性分离的大鼠基底前脑神经元上,采用细胞贴附式和全细胞膜片钳技术进行检测。结果:人胰淀素或烟碱单独应用可以分别诱导相同通道的激活。烟碱与人胰淀素诱导的37 pS电导单通道电流幅度分别为(-3.6±0.4)和(-3.5±0.3)pA,65 p S电导单通道电流幅度分别为(-6.0±0.2)和(-6.1±0.3)pA,两电导水平的单通道电流比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。在电流钳记录模式,人胰淀素或烟碱单独应用可引起神经元膜电位去极化并诱发动作电位的产生。DHβE完全阻断烟碱和人胰淀素的作用,应用人胰淀素受体拮抗剂AC253也观察到类似的效果。结论:人胰淀素受体和烟碱受体在中枢神经元存在功能性协同作用。

西格列汀对人胰淀素转基因小鼠血糖的干预研究

目的探讨西格列汀是否有改善人胰淀素转基因小鼠(hIAPP-Tg)血糖及胰岛功能作用。方法(1)饲养繁殖hIAPP-Tg小鼠,通过剪尾PCR法鉴定获得阳性高表达雄性小鼠18只(8周龄、约20 g),随机将其分成模型组和西格列汀组各9只;8只同龄雄性C57BL/6小鼠作为阴性对照组。(2)采用隔天一次灌胃给药方式,连续给药10周:对照组及模型组给予磷酸盐缓冲液(PBS),西格列汀组给予西格列汀(20 mg/kg)。每两周测一次空腹血糖及称体质量,给药10周后空腹处死取血清及组织用于后续实验。(3)采用便携式血糖仪测定末梢血糖,ELISA法测定血清胰岛素及糖化血红蛋白水平,免疫荧光法检测胰腺胰岛素及C/EBP同源蛋白(CHOP)表达水平。结果(1)与对照组比较,模型组及西格列汀组小鼠空腹血糖明显升高,西格列汀给药10周后血糖及糖化血红蛋白较模型组下降,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组及西格列汀组体质量较对照组下降,但各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与对照组比较,模型组及西格列汀组小鼠血清胰岛素水平降低、糖化血红蛋白升高,西格列汀给药10周后血清胰岛素水平较模型组升高而糖化血红蛋白下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与对照组比较,模型组及西格列汀组小鼠胰腺胰岛素表达下降,西格列汀给药10周后胰腺胰岛素表达较模型组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,模型组及西格列汀组的CHOP表达升高,西格列汀给药10周后表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论西格列汀可改善hIAPP-Tg小鼠血糖及胰岛功能,其机制可能与减少胰腺CHOP相关的内质网应激有关。

人胰淀素的研究进展

人胰淀素(hIAPP)是由胰岛?细胞合成分泌、37个氨基酸组成的多肽类激素,与胰岛素、胰高血糖素等协同调节糖稳态。hIAPP可表现为生理药理状态下的单体(monomer)以及病理状态下的寡聚体(oligomer,α-螺旋结构)与纤维体(fibril,β片层折叠)。hIAPP单体的生理药理功能如下:1) 影响胰岛素与胰高血糖素的分泌;2) 延缓胃排空,降低餐后血糖;3) 升高肾素与血管紧张素II,调节肾生长;4) 升高醛固酮,降低血钙;5) 调节骨密度;6) 舒张血管,调节血流动力学;7) 调节免疫效应。hIAPP单体可诱导调节T细胞分化,从而调节炎症反应和免疫因子的分泌。部分一过性hIAPP寡聚体可引发胰岛β细胞凋亡,造成β细胞功能失常。由hIAPP纤维体折叠形成的淀粉样沉积,可保护胰岛避免自身免疫攻击。hIAPP不足或者hIAPP纤维体缺乏,是自身免疫性糖尿病的特征。hIAPP在肥胖以及糖尿病、自身免疫、骨质疏松等疾病的防治过程中,具有潜在应用前景。

人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立

建立体外人胰淀素类似物普兰林肽活性测定的方法,为普兰林肽及其制剂的质量控制提供可靠的细胞检测方法。将L6细胞培养并分化成有明显肌管的成熟骨骼肌细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测普兰林肽对高糖培养环境下骨骼肌细胞葡萄糖吸收的影响。结果显示,在1×10-9～1×10-5mol/L的浓度范围内,普兰林肽能显著增加分化后的L6细胞的糖吸收量,在16 h达到最大值。普兰林肽浓度的负对数(x)与细胞糖吸收增加量(y)间呈现出良好的线性关系(y=-4.750x+59.54,R2=0.991 9)。应用本实验建立的方法检测了市售普兰林肽醋酸盐注射剂的活性,结果显示1×10-6、1×10-7和1×10-8mol/L的普兰林肽注射剂作用于分化的L6细胞16 h,细胞的糖吸收增加率为(61.89±9.54)%,(43.68±10.06)%和(33.30±13.03)%(P<0.01);与单用胰岛素组对比,普兰林肽与胰岛素联合使用能显著提高分化后的L6细胞的糖吸收量(P<0.05),与普兰林肽注射剂的临床使用结果一致。本实验为普兰林肽的活性测定提供了一种稳定可靠的细胞替代模型。

人胰淀素受体和烟碱乙酰胆碱受体在大鼠大脑神经元上的功能偶联作用(英文)

人胰淀素(hAmylin)是由分泌胰岛素的胰岛B细胞释放,作用于靶组织,维持细胞的兴奋性和葡萄糖在体内的稳态。hAmylin分泌异常会引起人类的疾病,特别是阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease,AD)。目前对于hAmylin通过激活什么样的受体从而产生脑神经元的神经毒性仍然不清楚。已知烟碱乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)是引发多种神经性疾病的关键因素。本研究通过记录hAmylin和烟碱对基底前脑神经元的全细胞电流和膜电位的影响,来确定hAmylin受体和烟碱受体两者之间的相互作用。在酶解分离的基底前脑Broca区(diagonal band of Broca,DBB)胆碱能神经元上进行全细胞膜片钳记录,结果显示,hAmylin或烟碱单独应用,均引起剂量(1nmol/L^20μmol/L)依赖性膜电位的去极化和DBB神经元放电频率增加。hAmylin受体拮抗剂AC253,不仅阻断hAmylin的兴奋作用,而且也阻断烟碱对神经元的兴奋作用;同样,使用nAChR竞争性拮抗剂二氢-β-刺桐啶碱(dihydro-β-erythroidine,DHβE),可以阻断烟碱和hAmylin对DBB神经元的兴奋作用。以上结果提示,hAmylin受体和nAChRs受体在DBB神经元可能是功能偶联的,协同影响DBB神经元的兴奋性。

利拉鲁肽对人胰岛淀粉样多肽聚集性及胰岛细胞毒性的影响

目的:探讨利拉鲁肽对人胰岛淀粉样多肽聚集性及细胞毒性的影响。方法:采用硫磺素T荧光法检测淀粉样纤维聚集的动力学,采用透射电镜检测淀粉样纤维的形态。分离Wistar大鼠胰岛,采用简单随机化分组的方法将大鼠胰岛随机分配成空白对照组、人胰淀素组、人胰淀素+利拉鲁肽组。24 h后采用Annexin-V/PI荧光染色及逆转录聚合酶链反应检测细胞凋亡及炎性因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNFα)、单核细胞趋化蛋白-1(CCL-2)mRNA的表达。结果:人胰淀素单独孵育时,荧光于1.6 h左右开始上升,并随时间延长逐渐增加,3.4 h后平稳,动力学曲线呈S型曲线;人胰淀素与利拉鲁肽(500 nmol/L)以10∶1分子浓度共同孵育时,荧光信号上升延迟缓慢;以1∶1分子浓度共同孵育时,荧光信号未见明显增加,动力学曲线呈直线型。透射电镜结果显示,人胰淀素单独孵育可见大量长条状纤维聚集,人胰淀素与利拉鲁肽(2μmol)以10∶1浓度共同孵育后纤维数量明显减少,且短小模糊;1:1(20μmol利拉鲁肽)浓度共同孵育后,无法找到纤维结构。与空白对照组相比,人胰淀素组IL-1、TNFα、CCL-2基因的mRNA表达均增加,而人胰淀素+利拉鲁肽组表达均下降(F=429.68、48.79、153.39,均P<0.05)。人胰淀素组细胞凋亡率与空白对照组相比明显升高;人胰淀素+利拉鲁肽组凋亡率比人胰淀素组降低(F=514.34、16.14、18.47,均P<0.05)。结论:利拉鲁肽抑制胰淀素聚集,减少胰岛细胞炎症及凋亡。