灵菌红素对人胰腺癌细胞增殖抑制的实验研究

目的 :观察从生物工程技术得到的灵菌红素对人胰腺癌 8898细胞增殖抑制的药效学作用 ,并探讨其作用的部分机理。方法 :用MTT法测定 8898细胞的存活率和抑制率 ,用流式细胞仪分析细胞的周期变化和凋亡细胞的百分比 ,用HPLC检测人胰腺癌 8898细胞内灵菌红素的浓度 ,用琼脂糖凝胶电泳对DNA段片化进行分析。结果 :灵菌红素5mg·L-1的培养液中 8898细胞出现凋亡早期的形态学特征 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 30mg·L-1。而3T3细胞却未显示出该作用。研究表明灵菌红素抑制细胞的增殖 ,与抑制S期细胞的DNA复制及调控细胞的增殖周期相关。同时 ,细胞凋亡的产生与实验药物呈正相关。HPLC结果显示 ,灵菌红素的药理学作用与细胞内药物浓度相关。结论 :灵菌红素能有效的进入细胞内 ,抑制细胞的增殖 ,其机理与诱导细胞凋亡和调控细胞的增殖周期相关。

盐酸去氢骆驼蓬碱诱导人胰腺癌AsPC-1细胞凋亡

目的:探讨盐酸去氢骆驼蓬碱对人胰腺癌AsPC-1细胞的增殖抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法及克隆形成抑制实验观察盐酸去氢骆驼蓬碱对胰腺癌AsPC-1细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞凋亡及自噬相关蛋白的表达水平。结果:盐酸去氢骆驼蓬碱作用人胰腺癌AsPC-1细胞后,不同浓度的药物对其生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.01),24、48及72h的IC50分别约为116.5、66、22.3μmol.L-1;与对照组相比随着盐酸去氢骆驼蓬碱浓度的增加,细胞克隆逐渐减少;不同浓度盐酸去氢骆驼蓬碱作用后,均出现明显的晚期凋亡及坏死细胞群,且呈剂量-效应关系;盐酸去氢骆驼蓬碱作用后,胰腺癌AsPC-1细胞出现Caspase-3、PARP酶切活化,同时自噬标记性蛋白LC3Ⅱ增加,P62减少。结论:盐酸去氢骆驼蓬碱通过诱导细胞凋亡及自噬的方式抑制人胰腺癌AsPC-1细胞的生长。

康莱特联合5-Fu治疗人胰腺癌PC-3裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的通过研究胰腺癌Bcl-2、Bax和血管内皮生长因子((VEGF)的变化情况与细胞凋亡的关系,探讨康莱特和5-Fu治疗胰腺癌的机制。方法建立人胰腺癌PC-3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax和VEGF在胰腺癌移植瘤中的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡比率,测量肿瘤体积。结果康莱特和5-Fu都可明显提高胰腺癌细胞凋亡率,降低细胞Bcl-2在蛋白水平上的表达,两者对Bax在蛋白水平上的表达无影响;康莱特明显降低移植瘤VEGF蛋白的表达;康莱特和5-Fu联合组,胰腺癌细胞凋亡比率显著高于单药组,而Bcl-2蛋白表达率显著低于单药组;康莱特和联合用药组VEGF蛋白表达率低于5-Fu组;联合用药组肿瘤体积小于单药组。结论康莱特联合5-Fu治疗胰腺癌的效果明显优于两药单独使用的效果。

榄香烯乳对人胰腺癌移植瘤组织中凋亡相关蛋白表达的影响

目的:了解榄香烯乳干预治疗后人胰腺癌裸鼠移植瘤组织中PTEN、P53、Bcl-2蛋白的表达情况,初步探讨榄香烯乳对胰腺癌凋亡的影响.方法:构建人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为阴性对照组、榄香烯乳小剂量组、榄香烯乳大剂量组、吉西他滨阳性对照组和联合用药组五组,分别干预处理;采用Western blot和免疫组织化学的方法检测榄香烯乳干预治疗后人胰腺癌移植瘤组织细胞中PTEN、P53、Bcl-2蛋白表达情况.结果:Western blot结果显示榄香烯乳干预治疗后人胰腺癌移植瘤细胞中PTEN和P53蛋白表达均有升高趋势,而Bcl-2蛋白表达有下降的趋势.榄香烯乳大剂量组与阴性对照组相比,P53蛋白表达显著升高(P<0.01)而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01).联合用药组与吉西他滨阳性对照组相比,P53蛋白表达显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达降低不明显(P=0.985).免疫组织化学结果显示与Western blot结果大致相同的变化趋势.结论:一定剂量的榄香烯乳可以增强胰腺癌裸鼠移植瘤组织中P53蛋白的表达而降低Bcl-2蛋白的表达,从而起到促进胰腺癌细胞凋亡的作用.

反义hTR抑制人胰腺癌P3细胞系端粒酶活性和增殖的研究

设计针对端粒酶RNA模板序列并经硫代磷酸修饰的正义、反义和随机序列寡核苷酸 ,以正常人成纤维细胞作对照 ,观察其对人胰腺癌细胞端粒酶活性和细胞生长增殖的影响作用以及对正常细胞是否有毒副作用。结果表明 :针对hTR模板区的反义寡核苷酸能降低胰腺癌P3细胞端粒酶活性 ,抑制细胞生长 ,促进细胞周期改变并诱导细胞发生凋亡 ,而且对正常细胞没有明显的毒副作用。因此我们认为利用反义技术封闭hTR基因很可能成为治疗肿瘤的安全、有效手段之一。

利用基因芯片技术研究人胰腺癌相关基因

目的 :观察人胰腺癌基因表达谱的变化 ,研究胰腺癌发生、发展过程中的相关基因 ,并探讨基因表达谱芯片技术在筛查肿瘤相关基因中的应用价值。 方法 :应用含有 4 0 96条人类全长基因的 c DNA表达谱芯片 ,对 9例临床切除的胰头导管腺癌标本组织抽提及纯化的 m RNA进行芯片杂交 ,并对基因表达谱进行分析研究。 结果 :按差异显著阳性标准 ,从 4 0 96个基因中筛选出在胰腺癌组织中共同差异表达基因 1 84条 ,其中 87条表达上调 ,97条表达下调 ,包括原癌及抑癌基因、细胞周期、信号转导、细胞外基质、细胞骨架和运动蛋白、转录因子、DNA损伤修复基因、凋亡相关蛋白以及核糖体蛋白等相关编码基因。其中有 1 1条为尚未在 Gen Bank登录的人类新基因。 结论 :运用 c DNA表达谱芯片分析基因表达谱 ,能够快速筛查出新的肿瘤相关基因 。

瑞芝清对人胰腺癌细胞COX-2和VEGF影响

目的观察瑞芝清对人胰腺癌PANC-1细胞环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨瑞芝清抑制肿瘤血管生成机制。方法对人胰腺癌PANC-1细胞进行培养,不同浓度瑞芝清处理细胞后,用免疫组织化学染色检测COX-2和VEGF蛋白表达的变化。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2mRNA和VEGFmRNA表达的变化。结果100,200,400μmol/L瑞芝清作用胰腺癌PANC-1细胞48h后,COX-2和VEGF蛋白表达率与对照组比较明显降低(P<0.05),并且COX-2与VEGF之间具有良好的相关性(r=0.785,P<0.05);RT-PCR结果也显示,随着药物浓度的增大,COX-2mRNA和VEGFmRNA表达逐渐减弱。结论抑制COX-2表达及由此引起的VEGF表达降低,在非甾体类抗炎药抑制肿瘤血管生成机制中可能具有一定作用。

^(32)P胶体致人胰腺癌Pc-3移植瘤细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的 观察低剂量32 P胶体瘤体内注射诱导裸鼠人胰腺癌Pc 3移植瘤细胞凋亡的生物学效应、相关基因的表达及其可能的作用机理。方法 建立BALB c裸鼠人胰腺癌Pc 3移植瘤动物模型 ,分别向 3 0只荷瘤鼠瘤块中心注射不同剂量 (0 3 7、0 74、1 48、2 96和 5 92MBq)的3 2 P胶体溶液 ,对照组注射等体积冷胶体。于注射后 2 4h取出瘤块 ;通过流式细胞仪、透射电镜及免疫组织化学检测等方法 ,研究肿瘤组织的细胞凋亡率、细胞坏死率、细胞超微结构改变及Apo2 7、Caspase 3、bcl 2、bax相关基因的表达。结果 0 74、1 48和 2 96MBq组瘤体内注射后电镜下可见典型的细胞凋亡表现 ,5 92MBq组细胞则以大量坏死为主。辐射诱导凋亡过程中 ,bcl 2 bax比值下调 ,Apo2 7、Caspase 3蛋白表达均明显增加。结论 32 P胶体瘤体注射可诱导荷瘤裸鼠人胰腺癌Pc 3肿瘤细胞凋亡 ;Apo2 7、Caspase 3、bcl

BALB/c-nu裸小鼠人胰腺癌模型声像图特点

目的 为荷瘤裸小鼠胰腺癌模型实验研究提供新的观察方法。方法 建立BALB/c -nu裸小鼠种植性人胰腺癌动物模型,利用高频超声观察肿瘤结节生长特征及声像图特征。结果 接种后5～10d肿瘤持续快速生长,声像图呈低回声结节,界清无包膜,观察45d未见液化坏死;彩色血流信号显示率高,血供丰富。结论 高频超声显像可作为种植性人胰腺癌形态学观测的可靠指标之一。

microRNA-372靶向SDC1抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭

目的探讨microRNA-372 (miR-372)靶向调控SDC1基因表达抑制人胰腺癌上皮间质转化及侵袭的机制研究。方法收集人胰腺癌及癌旁组织手术标本;qRT-PCR和免疫组化法检测组织中miR-372和SDC1表达;筛选miR-372表达水平最高的人胰腺癌细胞系进行分组和转染,实验分成6组,即空白对照组、阴性对照组、miR-372 mimic组、miR-372 inhibitor组、siRNA-SDC1组和miR-372 inhibitor+siRNA-SDC1组;双荧光素酶报告基因试验验证miR-372和SDC1基因的靶向关系;CCK8法、流式细胞术、划痕试验及Transwell试验分别检测各组细胞转染后增殖能力、凋亡情况、迁移及侵袭能力;qRT-PCR和Western blot法检测各组细胞转染后SDC1和上皮细胞标志物E-cadherin及间质表型细胞标志物Vimentin的表达水平。结果SDC1蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P <0. 05)。胰腺癌中miR-372、SDC1表达与肿瘤分化程度、转移和TNM分期显著相关(P <0. 05)。双荧光素酶报告基因试验结果显示SDC1是miR-372的靶基因。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-372 mimic组和siRNA-SDC1组细胞的生长、迁移和侵袭受到抑制,凋亡率增加,SDC1和Vimentin的表达水平明显降低,E-cadherin的表达水平明显升高(P均<0. 05);而miR-372 inhibitor组的趋势与miR-372 mimic组和siRNASDC1相反(P均<0. 05);然而,miR-372 inhibitor+siRNA-SDC1组与空白对照组和阴性对照组比较,各项指标差异均无统计学意义。结论 miR-372可能通过靶向抑制SDC1基因表达,抑制人胰腺癌细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化。

新加良附颗粒抗移植性人胰腺癌效应的初步研究

目的通过建立移植性人胰腺癌(FWK-1)裸鼠动物模型,观察新加良附颗粒对其抑瘤率的影响。方法移植性胰腺癌模型建立后,随机分为治疗组与对照组2组,观察新加良附颗粒干预治疗后的肿瘤体积、平均瘤重以及肿瘤抑制率的变化。结果与对照组比较,新加良附颗粒干预治疗第2周、第3周可见肿瘤体积缩小,具有统计学意义(P<0.05、P<0.01);与对照组比较,治疗组平均瘤重明显降低,有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,治疗组肿瘤抑制率为41.04%,有统计学意义(P<0.01)。结论新加良附颗粒具有明显的抑制胰腺癌生长效应。

抗胰腺癌单抗SZ-121的制备及在人胰腺癌中的表达

目的探讨抗人胰腺癌单克隆抗体SZ121(McAbSZ121)在人胰腺癌诊断中的应用。方法利用杂交瘤技术,研制出一株抗人胰腺癌McAbSZ121。对47例不同分化胰腺癌组织(胰腺癌组),45例其他部位恶性肿瘤组织(非胰腺癌组)及10例正常胰腺组织(正常组)采用免疫组化方法,检测SZ121与其的结合反应。结果HcAbSZ121的结合反应部位主要见于癌细胞浆及胞膜;胰腺癌组47例中40例胰腺癌组织与SZ121呈阳性反应(85.1%),非胰腺癌组45例中7例癌组织与SZ21有阳性反应(15.6%);正常组中仅有1例与其有阳性反应(10%);McAbSZ121与人胰腺癌组织阳性率与临床分期、组织分化程度呈正相关。结论HcAbSZ121在人胰腺癌中的特异性结合反应,可为胰腺癌的诊断与检测提供一定依据。

人胰腺癌组织中Th2类细胞因子的优势表达及其临床意义

目的:观察Th1/Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达模式及临床意义. 方法:以IFN-γ和IL-2代表Th1类细胞因子,IL-4和IL- 10代表Th2类细胞因子.收集45例胰腺癌患者的手术切除组织蜡块,以免疫组织化学PV-9000通用型二步法染色, DAB显色试剂盒显色,检测胰腺癌组织中Th1/Th2类细胞因子的表达. 结果:IFN-γ和IL-2在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异(P>0.05),说明,Th1类细胞因子在胰腺癌和正常胰腺组织中的表达无明显差异;IL-4和IL-10在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织(P=0.022<0.05;P=0.023 <0.05),说明Th2类细胞因子在胰腺癌组织中的表达明显高于正常胰腺组织. 结论:胰腺癌组织中Th2类细胞因子呈优势表达状态,这可能是肿瘤免疫逃逸的机制.

大蒜素对人胰腺癌PANC-1细胞株的作用及机制的研究

大蒜素是新鲜大蒜中主要生物活性成分的总称,其中主要成分为二烯丙基三硫化物（DADS）。大蒜除有健胃助消化的功能,还有抗真菌、抗细菌、降血脂、降血压、抑制血小板聚集和防止动脉粥样硬化等作用。近年来,大蒜的抗肿瘤活性受到越来越多的关注．本实验采用细胞增殖试验和流式细胞术观察大蒜素对胰腺癌细胞的效应并探讨其可能机制。

BTG-2基因在人胰腺癌中的表达及其与胰腺癌细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨BTG-2基因在人胰腺癌中的表达及与胰腺癌细胞增殖和凋亡的关系。方法应用免疫组化、原位杂交等技术,对32例胰腺癌及癌旁组织中BTG-2基因进行检测。结果BTG-2基因在胰腺癌旁组织中相对含量为0.76±0.17,在胰腺癌组织中相对含量为0.58±0.16(P<0.01);PCNA指数+-++的胰腺癌细胞中BTG-2相对含量为0.90±0.12,PCNA指数+++以上的胰腺癌细胞中BTG-2相对含量为0.66±0.12(P<0.01);BTG-2基因高表达的标本中可见少量的凋亡细胞,而低表达和中等表达的胰腺癌组织中未见明显凋亡细胞。结论BTG-2基因的低表达与胰腺癌的发生发展相关。

鼠抗人hMIC-l单克隆抗体抑制裸鼠移植人胰腺癌体内研究

目的初步研究鼠抗人hMIC-l单克隆抗体对胰腺癌体内给药的抗肿瘤活性,为hMIC-l抗体应用于肿瘤治疗提供实验依据。方法 2种人胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990各腋窝皮下接种24只Balb/c裸鼠,共计48只皮下接种荷瘤裸鼠分别随机共分为8组,每组6只荷瘤鼠。模型对照组荷瘤裸鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液(10 mL/kg,NS,Biw,ip×8),阳性对照组荷瘤裸鼠腹腔注射键择(50 mg/kg,qw,ip×4),鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组分别荷瘤鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,ip×8)共4周或(2 mg/kg,Biw,ip×8)共4周。观察荷瘤裸鼠日常表现、肿瘤生长、实验后肿瘤组织切片HE染色后光镜下的组织形态学改变。结果荷瘤裸鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组裸鼠(10 mg/kg,Biw,iv×8)肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,并呈现量效关系。镜下观察鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组实验后肿瘤组织切片胰腺结构破坏,有大量淋巴细胞浸润,肿瘤细胞明显坏死,细胞溶解。结论尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,iv×8)能有效抑制裸鼠移植人胰腺癌PANC-1肿瘤生长,使瘤组织坏死、结构破坏。

新型小分子激酶抑制剂Ibr-7对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制作用及机制研究

目的:观察新型小分子激酶抑制剂Ibr-7[依鲁替尼(Ibr)衍生物]对人胰腺癌Capan-2细胞的抑制作用及其可能机制。方法:以Capan-2细胞为对象,采用CCK-8法检测1、2、4、8μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞增殖情况,计算细胞存活率;同法检测1μmol/L Ibr、Ibr-7对不同剂量吉西他滨/紫杉醇(均分别为0.062 5、0.125、0.25、0.5、1μmol/L)的增敏作用。采用克隆形成试验检测1、2、4μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后的细胞克隆形成情况,并记录细胞集落形成数量。采用流式细胞术或JC-1法检测2、4、8μmol/L Ibr-7作用24或16 h后细胞凋亡情况和线粒体膜电位变化情况,并计算总凋亡率及细胞线粒体膜电位下降比例。采用Westernblotting法检测细胞中相关凋亡蛋白[多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、Noxa、Bcl-2、Bax、髓样细胞白血病1(Mcl-1)、B淋巴细胞瘤x L(Bcl-xL)]的表达情况。结果:1、2、4、8μmol/L Ibr、Ibr-7作用48 h后,细胞的存活率均显著下降,各剂量Ibr-7组均显著低于同剂量Ibr组,且Ibr-7的半数抑制浓度显著低于Ibr(P<0.05或P<0.01)。联用Ibr、Ibr-7后,细胞的存活率均显著低于同剂量吉西他滨/紫杉醇单用组,且Ibr-7联用组显著低于同剂量Ibr联用组(P<0.05或P<0.01)。经2、4μmol/L Ibr以及1、2、4μmol/L Ibr-7作用48 h后,细胞集落形成数量均显著减少,且各剂量Ibr-7组均显著低于同剂量Ibr组(P<0.01)。经不同剂量Ibr-7作用24或16h后,Capan-2细胞的总凋亡率(2、4、8μmol/L组)、细胞线粒体膜电位下降比例(8μmol/L组)以及Noxa(2、4、8μmol/L组)、Bax(8μmol/L组)蛋白的相对表达量均显著上升,PARP(8μmol/L组)、Bcl-2(4μmol/L组)、Mcl-1(2、4、8μmol/L组)蛋白的相对表达量均显著下降,且8μmol/L Ibr-7组上述指标(PARP、Bcl-2相对表达量除外)均显著优于同剂量Ibr组(P<0.05或P<0.01)。而各组细胞Bcl-xL蛋白的相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:与Ibr相比,Ibr-7对人胰腺癌Capan-2细胞具有更强的体外增殖抑制作用和促凋亡作用,且具有更强的化疗药物增敏活性;其作用机制可能与降低细胞线粒体膜电位,下调细胞中PARP、Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达,上调Noxa、Bax蛋白的表达有关。

人参皂苷CK联合5-氟尿嘧啶对人胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的:研究人参皂苷CK联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胰腺癌PANC-1细胞的增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:将对数生长期的PANC-1细胞分为空白对照组、人参皂苷CK组(30 mg/L)、5-FU组(25 mg/L)和联用组(人参皂苷CK 30 mg/L+5-FU 25 mg/L)。采用MTT法检测各组细胞作用24、48、72 h后的细胞增殖抑制率,流式细胞术检测作用48 h后的细胞凋亡率,酶联免疫吸附法检测作用24、48、72、96 h后细胞中纤连蛋白表达,Western blot法检测作用48 h后细胞中波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、蛋白激酶(Akt)及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果:人参皂苷CK、5-FU及其二者联用对细胞的增殖均有抑制作用;与空白对照组比较,人参皂苷CK组、5-FU组和联用组各作用时间点的早期和晚期凋亡率、E-钙黏蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),纤连蛋白、波形蛋白、N-钙黏蛋白表达水平和p-Akt/Akt水平均明显降低(P<0.05),其中联用组上述指标效果均优于人参皂苷CK组和5-FU组(P<0.05)。结论:人参皂苷CK和5-FU均可抑制PANC-1细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制EMT,该作用可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶/Akt通路有关;且二者联用效果更好。