乌苏酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

目的探讨乌苏酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡的影响。方法以1.25,2.5,5,10,25,50μmol/L乌苏酸培养PANC-1细胞24,48,72 h,采用四氮唑盐(MTT)法测定细胞活性。实验分为对照1组(等体积二甲基亚砜)及乌苏酸低、中、高剂量组(5,10,20μmol/L乌苏酸),显微镜下观察细胞形态,采用Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt),磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR),活化半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2关联X蛋白(Bax)的蛋白表达水平,采用细胞集落形成实验观察细胞增殖情况。实验分为对照2组(等体积二甲基亚砜)和乌苏酸组(10μmol/L乌苏酸),采用细胞划痕实验观察细胞培养48,72 h的迁移情况。利用分子对接实验模拟乌苏酸与PI3K和Akt2的相互作用。结果随着乌苏酸浓度的升高,PANC-1细胞活性逐渐减弱,24,48,72 h时的半数抑制浓度(IC50)分别为7.89,6.26,5.06μmol/L。与对照1组比较,乌苏酸各剂量组细胞逐渐失去原有形态,且随着浓度的增加,变形细胞数目随之增加,且细胞边界模糊不清;细胞数量显著减少(P<0.05);乌苏酸各剂量组细胞Cleaved Caspase-3、Bax蛋白的表达水平均显著升高,乌苏酸中、高剂量组细胞Bcl-2蛋白表达水平显著降低,乌苏酸各剂量组细胞p-m TOR,中、高剂量组细胞p-Akt,高剂量组细胞PI3K蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与对照2组比较,乌苏酸组细胞48 h,72 h的迁移距离缩短。乌苏酸的乌苏烷型三萜类结构可进入PI3K与Akt2中的三磷酸腺苷(ATP)结合位点竞争性结合疏水口袋,从而影响PI3K和Akt2与ATP的结合,抑制其激活。结论乌苏酸可通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路的激活而抑制PANC-1细胞的增殖,促进其凋亡。

二十二碳六烯酸对人胰腺癌细胞生长抑制作用的分析

目的:分析二十二碳六烯酸对人胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法:行细胞培养后运用噻唑蓝比色(MTT)法检测人胰腺癌细胞的增殖,采用流式细胞术检测人胰腺癌细胞的凋亡、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、环氧合酶-2(COX-2)的表达,统计分析不同浓度的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌细胞的存活率、凋亡率,并统计分析不同浓度的DHA培养液培养48 h人胰腺癌细胞的细胞周期分布及不同浓度的DHA培养液培养24 h人胰腺癌细胞Bcl-2、COX-2的表达。结果:0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的存活率均随DHA培养液浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的凋亡率均随DHA培养液浓度的升高而逐渐升高(P<0.05)。0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养48 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的G_(0)~G_(1)期、G_(2)~M期细胞占比均随DHA培养液浓度的升高而逐渐升高(P<0.05),S期细胞占比均随DHA培养液浓度的升高而逐渐降低(P<0.05)。0μg/mL的DHA培养液培养24 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞Bcl-2、COX-2的表达水平、蛋白荧光值均高于50μg/mL(P<0.05)。结论:DHA可抑制人胰腺癌细胞的生长,途径可能为下调人胰腺癌细胞中的Bcl-2、COX-2表达。

龙胆苦苷对人胰腺癌细胞PANC-1凋亡及IL-6/JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究龙胆苦苷对人胰腺癌细胞PANC-1凋亡的影响,并从白细胞介素6(IL-6)/Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路角度研究其作用机制。方法:以PANC-1细胞为研究模型,采用MTT法测定0(阴性对照)、2、4、8、16、32、64、128 mg/L龙胆苦苷作用于细胞72 h后的增殖抑制率,并计算其半数抑制浓度(IC50)。分别将细胞分为阴性对照组、吉西他滨组(阳性对照,4 mg/L)和龙胆苦苷低、中、高浓度组(15、30、60 mg/L)。分别于培养1、3、5、7 d后,采用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,考察各组细胞的生长情况;培养72 h后,采用克隆形成试验考察细胞的克隆形成率,采用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链式反应法和Western blotting法分别测定细胞中IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及其蛋白表达水平。结果:4~28 mg/L龙胆苦苷均可显著抑制细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),并具有一定的浓度依赖性趋势,IC50为9.54 mg/L。与阴性对照组比较,吉西他滨组和龙胆苦苷中、高浓度组活细胞计数(作用3、5、7 d)和细胞中IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及其蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);吉西他滨组和龙胆苦苷高浓度组细胞的克隆形成率均显著降低(P<0.01)。与吉西他滨组比较,龙胆苦苷高浓度组细胞中上述指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:30、60 mg/L龙胆苦苷可显著抑制PANC-1细胞的增殖、诱导其凋亡,60 mg/L龙胆苦苷的作用与吉西他滨相当;其作用机制可能与抑制细胞中IL-6/JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

薏苡仁提取液对人胰腺癌细胞凋亡和超微结构的影响

背景:薏苡仁提取液目前已广泛应用于临床抗肿瘤治疗,但至今尚未见其单独应用于胰腺癌的报道。目的:观察薏苡仁提取液对人胰腺癌细胞凋亡和超微结构的影响,以探索胰腺癌治疗的新途径。方法:以不同浓度薏苡仁提取液处理人胰腺癌细胞系PaTu-8988后,分别通过光镜观察、Hoechst33258荧光染色、末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡,应用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:经10μl/ml和20μl/ml薏苡仁提取液作用72h后,PaTu-8988细胞的增殖能力明显下降,其作用呈剂量依赖性;光镜观察显示凋亡细胞变圆、体积缩小,Hoechst33258荧光强染,TUNEL标记阳性。20μl/ml薏苡仁提取液作用24、48和72h后,流式细胞仪DNA直方图上出现亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率呈时间依赖性,分别为7.1%±0.6%、11.3%±0.3%和15.1%±2.9%,显著高于对照组的2.4%±1.1%(P<0.01)。透射电镜观察显示,凋亡早期主要是线粒体结构的改变,后期则出现典型的凋亡征象,如核固缩、染色质凝集靠近核膜和凋亡小体形成。结论:薏苡仁提取液可诱导人胰腺癌细胞凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性,线粒体可能在早期细胞凋亡中起重要作用。

二甲双胍对人胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响

背景与目的:近年研究发现二甲双胍对多种肿瘤具有抑制作用,部分临床研究也发现二甲双胍可以降低糖尿病并发胰腺癌的风险和降低胰腺癌的死亡危险。本研究从细胞水平着手研究二甲双胍对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能机制。方法:体外培养人胰腺癌细胞株Bxpc-3,予二甲双胍进行干预作为二甲双胍干预组,无药物组作为对照组。以MTT检测二甲双胍对Bxpc-3细胞存活率的影响,流式细胞术检测二甲双胍对Bxpc-3细胞周期的影响,流式细胞术及Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR检测AMPKα1、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cyclin D1 mRNA的表达。蛋白质印迹法(Western blot)检测Cyclin D1、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果:与对照组相比,MTT检测结果显示,二甲双胍可以抑制人胰腺癌细胞株Bxpc-3的增殖,并呈时间-浓度依赖性(F=8.99、124和114.61,P<0.01);流式细胞术检测结果显示,二甲双胍干预组与对照组相比,G0/G1期细胞所占百分比增加(t=-8.71,P<0.01),S期(t=7.54,P<0.01)及G2/M期(t=7.00,P<0.01)细胞所占百分比减少;流式细胞术(早期凋亡率t=-2.68,晚期凋亡率t=1.29,总凋亡率t=-0.85)及Hoechst 33258荧光染色法(t=-0.46)结果显示,两组细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR结果显示,二甲双胍干预组Cyclin D1 mRNA表达明显降低(t=4.96,P<0.01),AMPKα1、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达与对照组相比,差异无统计学意义(t=1.68、-0.56、-1.80、0.67,P>0.05);Westernblot结果显示,二甲双胍干预组Cyclin D1蛋白表达明显降低(t=7.02,P<0.01),Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达与对照组相比,差异无统计学意义(t=-0.11、-0.20,0.11,P>0.05)。结论:二甲双胍能显著抑制人胰腺癌细胞株Bxpc-3的增殖,机制主要与其阻滞细胞周期、下调Cyclin D1表达有关;二甲双胍对Bxpc-3细胞的凋亡无明显诱导作用。

吉西他滨与培美曲塞对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的体外作用

目的探讨吉西他滨与培美曲塞不同用药次序联合应用对人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长的影响及可能的细胞学机制。方法MTT法测细胞增殖;流式细胞术测细胞周期。结果吉西他滨(10-7-10mg/ml)和培美曲塞(10-7-10mg/ml)均明显抑制2株细胞生长,作用呈现浓度依赖性和时间依赖性。二者联合对2株细胞生长的影响与给药次序有关:先用培美曲塞24h后序贯用吉西他滨对2株细胞的抑制作用明显强于同时给药(P<0.05)和先用吉西他滨24h后序贯用培美曲塞(P<0.05)。吉西他滨联合培美曲塞对BXPC-3细胞周期结果显示:与对照组相比,吉西他滨与培美曲塞分别将细胞周期阻断在G1期和S期(P<0.05);同时给药G2期比例减少(P<0.05);先用吉西他滨后用培美曲塞将细胞周期阻断在G1期(P<0.05);先用培美曲塞后用吉西他滨将细胞周期阻断在S期(P<0.05)。结论吉西他滨与培美曲塞均能抑制人胰腺癌细胞BXPC-3及PANC-1生长,二者联合具协同作用,先用培美曲塞24h后用吉西他滨对2株细胞的抑制作用最强,其协同作用与他们对细胞周期的影响无关。

人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导途径中pp60c-Src和pERK1/2表达的差异

目的研究人胰腺癌细胞株HPAC和BxPC-3中Src/MAPK信号转导系统,探寻不同类型胰腺癌信号转导通路的差异,为研究靶点药物提供基础。方法将1640培养的HPAC和BxPC-3经细胞计数相同后各分为4组,分别为对照组、TGF-α组、TGF-α+PP2组和TGF-α+PD组。细胞贴壁并达70%融合后,换无血清培养48h。无血清处理作对照,用无血清培养基溶解终浓度为7nmol/L的TGF-α刺激TGF-α组2h,TGF-α+PP2组先加入终浓度为10μmol/L的PP2刺激细胞20min后加入7nmol/L的TGF-α刺激2h,TGF-α+PD组先加入30μmol/L的PD98059刺激细胞20min后加入终浓度为7nmol/L的TGF-α刺激2h。用蛋白印迹方法分析HPAC和BxPC-3的4组细胞pp60c-Src和pERK1/2的表达。结果HPAC细胞pp60c-Src的表达:对照组显著高于TGF-α组、TGF-α+PD组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01);HPAC细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组和TGF-α+PD组(P<0.01),与TGF-α+PP2组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。BxPC-3细胞pp60c-Src的表达:TGF-α组显著高于对照组(P<0.05)和TGF-α+PP2组(P<0.01),与TGF-α+PD组相比较差异无统计学意义(P>0.05);BxPC-3细胞pERK1/2的表达:TGF-α组显著高于对照组、TGF-α+PD组和TGF-α+PP2组(P<0.01)。结论HPAC和BxPC-3细胞中Src/MAPK信号途径存在差异。推测在BxPC-3细胞株中c-Src是活化Ras/Raf/MAPK途径的关键信号分子,应进一步研究在HPAC细胞株中c-Src的作用。

舒林酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响及机制探讨

目的以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象,利用不同浓度舒林酸处理PANC-1细胞,观察其对PANC-1细胞增殖、凋亡影响,并探讨舒林酸通过抑制Wnt/β-catenin信号通路杀伤PANC-1细胞的可能机制。方法实验分为阴性对照组(加入不含舒林酸的DMSO)和实验组(分别加入舒林酸浓度为0.25、0.5、1、1.5、2 mM的培养液,分别为:阴性对照组、0.25 mM组、0.5 mM组、1.0mM组、1.5 mM组、2.0 mM组,总计6组)。MTT法检测PANC-1细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞内β-Catenin的表达。结果 MTT结果显示:PANC-1细胞经舒林酸干预后生长均受到不同程度抑制,且随着舒林酸浓度增加,抑制作用越强。流式细胞术检测凋亡结果显示PANC-1细胞早期凋亡率干预后均有不同程度增加,与对照组相比,0.5、1.0 mM组早期凋亡率差异无统计学意义,而1.5、2.0 mM组差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示可见各组β-catenin mRNA表达量随着舒林酸浓度增加而降低,0.5、1.0 mM组与对照组相比差异无统计学意义,而1.5及2.0 mM组差异有统计学意义(P<0.05);应用2.0 mM的舒林酸处理PANC-1细胞0、12、24、48、72 h,随着处理时间延长,β-catenin mRNA表达量逐渐降低,各处理组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。ICC结果证实干预后PANC-1细胞内β-catenin表达量及核聚集降低,与对照组相比,0.25、0.5 mM组差异无统计学意义,而1.0、1.5、2.0 mM组差异有统计学意义(P<0.05)。结论舒林酸对PANC-1细胞具有生长抑制及促凋亡作用,这种作用具有浓度-时间依赖性,舒林酸抑制Wnt/β-catenin信号通路可能是其杀伤PANC-1细胞的可能机制之一。

羟基喜树碱对人胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用

目的研究羟基喜树碱对人胰腺癌PANC-1细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法MTT法测定羟基喜树碱对PANC-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测羟基喜树碱对PANC-1细胞周期、凋亡率和Caspase-3活性的影响。结果羟基喜树碱能抑制PANC-1细胞生长,并呈剂量依赖关系,其半数抑制浓度(IC50)为51.52μg/ml;流式细胞仪检测显示低浓度羟基喜树碱处理后可将细胞先后阻滞于S期和G2/M期,高浓度的羟基喜树碱则诱导细胞凋亡;细胞凋亡率和Caspase-3活性随药物浓度升高和处理时间延长而逐渐递增。结论羟基喜树碱能抑制人胰腺癌PANC-1细胞的生长,其抗肿瘤作用机制与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡和激活Caspase-3活性有关。

双氢青蒿素抑制人胰腺癌细胞SW-1990的实验研究

目的:研究双氢青蒿素对人胰腺癌细胞株SW-1990增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测不同浓度双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人胰腺癌细胞株SW-1990增殖的影响;流式细胞术Annexin V-FITC和PI双标染色法检测不同浓度DHA对其凋亡的影响;并且用激光共聚焦显微镜观察在Hoechst 33342/PI荧光双染色下胰腺癌细胞SW-1990形态学变化;RT-PCR检测DHA对胰腺癌细胞SW-1990中端粒酶催化亚单位hTERT mRNA表达的影响。结果:DHA在体外可以明显的抑制SW-1990的增殖,并且具有浓度-时间依赖性;DHA在体外能明显诱导SW-1990细胞的凋亡;DHA可以抑制胰腺癌细胞SW-1990中hTERT mRNA的表达,并且与浓度呈正相关。结论:DHA在体外抑制胰人腺癌细胞SW-1990的增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能是抑制了肿瘤细胞中端粒酶催化亚单位hTERT mRNA的表达。

二甲双胍对人胰腺癌细胞迁移的抑制作用

目的:研究二甲双胍对胰腺癌细胞迁移的影响,并初步探讨可能机制.方法:体外培养人胰腺癌细胞株Bxpc-3,予二甲双胍进行干预作为实验组(M组),无药物组作为对照组(C组).MTT检测二甲双胍对Bxpc-3细胞存活率的影响,细胞划痕实验检测划痕愈合率,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,Elisa检测细胞培养上清液MMP-2、MMP-9蛋白的分泌量.结果:与对照组相比,MTT结果示二甲双胍可以抑制人胰腺癌细胞株Bxpc-3的增殖,并呈时间-浓度依赖性(F=8.991,124,114.61,P<0.01);划痕实验示二甲双胍干预组12、24、48h与对照组相比划痕愈合率显著下降(t=7.683,9.013,10.471,P<0.01);RT-PCR示二甲双胍干预组MMP-2、MMP-9mRNA的表达显著降低(t=16.563,28.494,P<0.01);Elisa示二甲双胍干预组MMP-2、MMP-9蛋白分泌明显下降(t=9.428,13.542,P<0.01).结论:二甲双胍能显著抑制人胰腺癌细胞株Bxpc-3的增殖及迁移,其主要机制可能与抑制MMP-2、MMP-9活性有关.

XIAP抑制剂Embelin体外对人胰腺癌细胞株的抑制效应与机制研究

目的探讨XIAP小分子抑制剂Embelin体外对人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2的抑制效应与机制。方法将生长至第4-12代之间的MIAPaca-2细胞分为DMSO对照组与Embelin实验组,在实验组细胞中加入不同浓度的Embelin共孵育72h,收集细胞并裂解后取上清液用细胞凋亡试剂盒检测组蛋白(凋亡指标)的OD值水平。MIAPaca-2细胞加入不同浓度的Embelin共孵育60h后再加入3H胸腺嘧啶继续孵育12h,取细胞裂解液用同位素γ闪烁计数仪检测3H-CPM数值以判断细胞增殖程度。对DMSO对照组与Embelin实验组的组蛋白OD值与3H-CPM数值分别进行比较分析。结果Embelin实验组的MIAPaCa-2细胞株组蛋白OD值显著高于DMSO对照组而3H-CPM数值明显低于DMSO对照组(P<0.01),且实验组Embe-lin的作用浓度与组蛋白OD值呈正相关(r=0.996,P<0.01),而与3H-CPM数值呈负相关(r=-0.993,P<0.01)。结论Embelin呈剂量依赖性地诱导人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2凋亡并抑制其增殖,有肿瘤抑制效应。

蛙皮素对人胰腺癌细胞系CFPAC-1细胞周期蛋白D_1/细胞周期蛋白依赖性激酶4的影响

背景:胃肠激素蛙皮素作为一种强有力的有丝分裂原,能刺激多种正常和肿瘤组织生长。目的:探讨蛙皮素对人胰腺癌细胞系CFPAC-1的促生长作用及其对细胞周期调控因子细胞周期蛋白(cyelin)D_1和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4的调节作用,以及蛙皮素促生长作用的机制。方法:用四唑蓝(MTT)比色法作为增殖指标,研究蛙皮素对CFPAC-1细胞生长的影响。用流式细胞仪观察蛙皮素对CFPAC-1细胞cyclin D_1表达的影响。用Western印迹和增强化学发光法(ECL)自显影观察蛙皮素对CFPAC-1细胞CDK4蛋白表达的影响。结果:一定浓度的蛙皮素对CFPAC-1细胞的生长具有促进作用,以1×10^(-10)mol/L蛙皮素的促生长作用最为明显(MTT OD_(570nm):蛙皮素1×10^(-10)mol/L组和对照组分别为0.652±0.155和0.359±0.109,n=3,P=0.002)。流式细胞仪检测发现,1×10^(-10)mol/L蛙皮素作用30min对CFPAC-1细胞cyclin D_1的表达有促进作用,但无显著统计学差异(P>0.05)。Western印迹和ECL自显影结果表明,1×10^(-10)mol/L蛙皮素作用15min可使CFPAC-1细胞CDK4蛋白表达升高,而后逐渐下降。结论:蛙皮素对CFPAC-1细胞的促生长作用部分是通过蛙皮素介导的细胞周期调控因子cyclin D_1/CDK4蛋白表达升高,从而促进细胞周期进展而实现的。

思他宁对人胰腺癌细胞株ASPC-1的生长调控

目的观察思他宁对人胰腺癌细胞ASPC1的生长作用。方法细胞培养,分别加入不同浓度的思他宁。应用MTT法来观察细胞增殖程度;放免法测定细胞内cAMP含量;荧光法测定[Ca2+]i。结果不同浓度的思他宁(10-11～10-6mol/L)均能有效地抑制ASPC1的生长,能抑制ASPC1细胞内cAMP生成和细胞内钙离子水平,cAMP生成量和细胞内钙离子水平与思他宁浓度呈负相关。结论思他宁能抑制ASPC1细胞的生长,经过特异性受体调节。

人胰腺癌细胞中端粒酶活性的检测

目的 观察银染的端粒重复序列扩增法 (TRAP)和TRAP ELISA两种方法检测人胰腺癌细胞株中端粒酶活性的特异性和敏感性。方法 用TRAP 银染法和TRAP ELISA两种方法检测人胰腺癌细胞株及人皮肤成纤维细胞中端粒酶活性 ,并检测经RNase和加热处理的阴性对照标本。结果 10个以上的P3细胞均为端粒酶阳性 ,而经RNase和加热处理的标本均为阴性 ,胰腺癌细胞株Patu 880 1亦为阳性 ,人皮肤成纤维细胞为阴性。结论 两种方法均为特异、敏感的端粒酶活性检测法 ,TRAP ELISA方法更简单、方便 。

生长抑素对人胰腺癌细胞株ASPC—1的生长调控

目的：观察生长抑素（SS）对人胰腺癌细胞ASPC－1的生长作用；测定神经鞘磷脂（SM）、环磷酸腺苷（cAMP）和细胞内[Ca^2+]i水平。方法：细胞培养，分别加入不同浓度的的SS。应用MTT法来观察细胞增殖程度；薄层层析法测定细胞内SM，放射免疫法测定细胞内cAMP含量；荧光法测定[Ca^2+]i。结果：不同浓度的SS（10^-6～10^-12mol/L）均能有效地抑制ASPC－1的生长，能抑制ASPC－1细胞内SM，cAMP生成和细胞内[Ca^2+]i水平（P＜0．01），cAMP生成量和细胞内[Ca^2+]i水平与SS浓度呈负相关。结论：生长抑素能抑制ASPC－1细胞的生长，经过特异性受体调节。

DESI2基因干扰联合PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响

目的研究人凋亡相关新基因DESI2基因和PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响。方法构建DESI2慢病毒干扰载体,并将细胞分为四组:(1)溶剂对照组;(2)PI3K抑制剂组;(3)DESI2干扰+PI3K抑制剂组;(4)DESI2空载+PI3K抑制剂组。采用MTT检测细胞活性,流式检测细胞周期和调亡,Transwell检测细胞侵袭情况,qRT-PCR检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、PI3K和mTOR mRNA的表达,Western blotting检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。结果与溶剂对照组相比,PI3K抑制剂组和DESI2空载+PI3K抑制剂组细胞活性明显下降,G1期比例升高,S期和G2期比例降低,凋亡明显升高,细胞侵袭能力明显下降,DESI2和Caspase3的mRNA和蛋白水平表达明显升高,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白表达量明显下降。与PI3K抑制剂组相比,DESI2干扰+PI3K抑制剂组细胞活性明显升高,G1期比例降低,S期比例升高,凋亡明显下降,细胞侵袭能力明显升高,DESI2和Caspase3 mRNA和蛋白水平表达明显下降,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白表达量明显升高,研究数据组间比较均达到统计学显著水平(P<0.05)。结论 PI3K抑制剂通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,可以抑制人胰腺癌细胞ASPC-1的增殖及侵袭,促进细胞调亡;PI3K/AKT/mTOR信号通路的功能状态能反馈调节上游DESI2基因的表达。

神经鞘磷脂在人胰腺癌细胞生长中的信使作用

目的：观察人胰腺癌细胞株中SM水平：观察PACAP138对人胰腺癌细胞株（HS766T）SM水平的影响。探讨SM在信息传导中的作用：同时观察SM的分解产物SPH对细胞的增殖作用及其机制。方法：细胞培养，分别加入不同浓度的PACAP138、PACAP638和SPH。应用MTT法来观察细胞增殖程度：Fura-2/AM测定[Ca^2+]；薄层层析法测定细胞内SM含量。结果：PACAP138促进HS766T的Ca^2+和SM的生成，呈剂量依赖性，PACAP638拮抗PACAP138的上述作用。SPH促进HS766T的生长，促进HS766Ta^2+和SM的生成，呈剂量依赖性，结论：SPH能促进人胰腺癌细胞株增殖；SM的信使作用一方面是通过与PI转换，活化PKC，产生IP3，另一方面是通过刺激Ca^2+转运和Ca^2+的释放。

Notch1对人胰腺癌细胞迁移及侵袭能力影响的体外实验研究

目的探讨人胰腺癌细胞转染Notch1后细胞迁移及侵袭能力变化与骨架蛋白的相关性。方法将携带Notch1的慢病毒载体转染人胰腺癌SW-1900细胞株,经流式细胞筛选后培养、传代。将细胞分为空白组(未经处理)、空载组(空载体转染)和病毒组(慢病毒转染),3组细胞分别利用细胞划痕和Transwell小室检测细胞迁移、细胞侵袭能力;采用Western Blot检测不同组细胞株中Notch1、Fascin、F-actin蛋白表达水平变化。结果成功建立稳定转染Notch1的胰腺癌SW-1900细胞株。空白组、空载组、病毒组划痕试验及Transwell小室显示:24h后病毒组和空白组划痕间距无差异,2组细胞粘附到基质胶基底膜的数目均很少,大体相同;而48,72h后病毒组较空白组划痕间距变窄,细胞侵袭透膜数较多,差异有统计学意义,上调Notch1后能明显促进SW-1900细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。随着时间延长,细胞穿膜率增高和划痕间距明显减小;Western Blot检测结果显示,空白组和空载组中Notch1、骨架蛋白Fascin、F-actin的蛋白表达相近,差异无统计学意义(P>0.05),但病毒组与其他2组相比,Notch1、Fascin、F-actin的蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人胰腺癌细胞中Notch1蛋白高表达可以增强细胞迁移、侵袭能力和细胞中Fascin和F-actin蛋白含量。胰腺癌细胞侵袭和转移能力的增强其机制之一可能是通过加强细胞中微丝微管运动性来实现的。

五味子甲素对人胰腺癌细胞株As Pc-1增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察五味子甲素对人胰腺癌细胞株As Pc-1增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将As Pc-1细胞分为5组,分别加入12. 5、25、50、100μmol/L的五味子甲素药液和等量培养基,记为12. 5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组和对照组,各组培养48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖率。将As Pc-1细胞分为2组,分别加入100μmol/L五味子甲素药液和等体积PBS,记为五味子甲素组和对照组,各组培养9 d后采用细胞平板克隆实验检测细胞克隆数。将As Pc-1细胞分为2组,分别加入100μmol/L五味子甲素药液和等体积PBS,记为五味子甲素组和对照组,各组培养24 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率。将As Pc-1细胞分为4组,分别加入25、50、100μmol/L的五味子甲素药液和等量培养基,记为25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组和对照组,采用Western blotting法检测各组细胞β-catenin蛋白和凋亡相关蛋白Bcl2、Bax。将As Pc-1细胞分为2组,分别加入100μmol/L五味子甲素药液和等体积PBS,记为五味子甲素组和对照组,采用免疫荧光法观察各组细胞β-catenin蛋白核定位。结果 12. 5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组、对照组细胞增殖率分别为95. 3%±3. 5%、73. 2%±1. 8%、56. 6%±3. 3%、41. 4%±2. 9%、100. 0%,其中12. 5μmol/L组与对照组相比,P> 0. 05;其余各组间相比,P均<0. 05。五味子甲素组、对照组的细胞克隆数分别为(410±30)、(180±20)个,细胞凋亡率分别为16. 36%±1. 54%、4. 58%±0. 83%,各指标组间相比,P均<0. 05。随着五味子甲素浓度增加,As Pc-1细胞Bcl2蛋白的相对表达量逐渐下调,而Bax蛋白的相对表达量逐渐增加,全长度β-catenin蛋白和78 k D的β-catenin蛋白的相对表达量也逐渐下调。五味子甲素组β-catenin蛋白在细胞核的聚集明显减少。结论五味子甲素可以抑制人胰腺癌细胞As Pc-1的增殖(呈浓度依赖性)、克隆形成能力,促进细胞凋亡;五味子甲素可能是通过降低β-catenin蛋白的表达和水解、减少其在细胞核内的定位发挥调控作用。