生长抑素对人胰腺癌细胞株HS766T的生长调控

目的观察生长抑素对人胰腺癌细胞株HS76 6T的生长抑制作用并探讨其作用机制。方法细胞培养 ,分别加入不同浓度的生长抑素 ,应用四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖程度 ;放射免疫法测定细胞内cAMP含量 ;Fura 2 AM测定细胞内Ca2 +浓度。结果不同浓度的生长抑素 (10 - 6～10 - 1 2 M)均能有效地抑制HS76 6T的生长 ,能抑制HS76 6T细胞内cAMP生成和Ca2 +水平 ,分别在 5min时和 3min时作用最大 ,cAMP生成量和Ca2 +水平与生长抑素浓度呈负相关。它能使垂体腺苷酸环化酶激活多肽 (PACAP)诱导的细胞内cAMP生成量和Ca2 +减少。结论生长抑素能抑制人胰腺癌HS76 6T细胞的生长 。

胰腺癌细胞株Pc-3、HS766T DPC4基因的表达检测及其对细胞增殖的影响初探

目的 :了解Pc - 3、HS76 6T两个胰腺癌细胞株DPC4基因的表达情况。方法 :用Trizol试剂提取两个细胞株培养细胞的总RNA ,用RT -PCR的方法合成DPC4的cDNA并经与标准cDNA电泳确认后 ,用QiagenPCR纯外试剂盒纯化 ,将纯化的cDNA与克隆载体Pt-Adv连接 ,并用连接产物转化大肠杆菌 ,扩增后提取质粒 ,经酶切鉴定后 ,送上海博亚公司测序 ,并上网与基因库中DPC4的cDNA比较 ,同时观察两个细胞株肿瘤细胞的生长情况。结果 :HS76 6T细胞无DPC4基因表达 (同源缺失 ) ,Pc - 3细胞存在DPC4基因表达 ,但其cDNA片段与理论值相比 ,短约 2 0 0bp ,上网BLAST的结果表明 ,在中间连接区 ,有一 2 36bp的片段缺失。两个细胞生长观察表明 ,Pc - 3细胞生长明显慢于HS76 6T。结论 :胰腺癌细胞株HS76 6T中DPC4基因同源缺失 ,细胞具有生长快速的特点。胰腺癌细胞株Pc- 3中有正常功能的DPC4表达 ,但该DPC4转录产物显示 ,在其连接区有一 2 36bp的片段缺失。该片段缺失对DPC4功能的具体影响尚不明确。

神经鞘磷脂在人胰腺癌细胞生长中的信使作用

目的：观察人胰腺癌细胞株中SM水平：观察PACAP138对人胰腺癌细胞株（HS766T）SM水平的影响。探讨SM在信息传导中的作用：同时观察SM的分解产物SPH对细胞的增殖作用及其机制。方法：细胞培养，分别加入不同浓度的PACAP138、PACAP638和SPH。应用MTT法来观察细胞增殖程度：Fura-2/AM测定[Ca^2+]；薄层层析法测定细胞内SM含量。结果：PACAP138促进HS766T的Ca^2+和SM的生成，呈剂量依赖性，PACAP638拮抗PACAP138的上述作用。SPH促进HS766T的生长，促进HS766Ta^2+和SM的生成，呈剂量依赖性，结论：SPH能促进人胰腺癌细胞株增殖；SM的信使作用一方面是通过与PI转换，活化PKC，产生IP3，另一方面是通过刺激Ca^2+转运和Ca^2+的释放。

沉默cIAP-1基因表达对胰腺癌细胞放疗敏感性的影响

目的观察沉默细胞凋亡抑制蛋白1(c IAP-1)基因表达对胰腺癌细胞HS766T放疗敏感性的影响。方法将HS766T细胞随机分为对照组、空载组和观察组,观察组和空载组分别转染沉默c IAP-1基因质粒c IAP-1-RNAi和阴性基因质粒NC-RNAi,对照组不转染处理,分别采用Real-time PCR法和Western blotting法检测细胞中的c IAP-1 mRNA及蛋白;取观察组c IAP-1稳定沉默HS766T细胞及其对照组HS766T细胞,用CCK-8法测算2、4、6、8 Gy X线照射24 h的细胞存活率,流式细胞仪测算6 Gy X线照射12、24、48 h的细胞凋亡率。结果观察组较空载组和对照组c IAP-1 mRNA及蛋白相对表达量降低(P均<0.05),空载组和对照组c IAP-1 mRNA及蛋白相对表达量无统计学差异。随着照射剂量增加,细胞存活率呈下降趋势;同等照射剂量下,观察组细胞存活率低于空载组和对照组(P均<0.05),空载组和对照组细胞存活率无统计学差异。随着照射时间的延长,各组细胞凋亡率呈现递增趋势;同一时点内,观察组细胞凋亡率高于空载组和对照组(P均<0.05),空载组和对照组细胞凋亡率无统计学差异。结论沉默c IAP-1基因表达,可抑制胰腺癌细胞存活、促进细胞凋亡,增强胰腺癌细胞的放疗敏感性。

神经鞘磷脂在人胰腺癌细胞生长中的信使作用

目的1)观察人胰腺癌细胞株中神经鞘磷脂(SM)水平。2)观察PACAP1-38对人胰腺癌细胞株(HS766T)SM水平的影响,探讨SM在信息传导中的作用。3)同时观察SM的分解产物鞘氨醇(SPH)对细胞的增殖作用及其机制。方法细胞培养,分别加入不同浓度的PACAP1-38、PACAP6-38和SPH。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法来观察细胞增殖程度;Fura-2/AM测定[Ca2+]i;薄层层析法测定细胞内SM含量。结果PACAP1-38促进HS766T的Ca2+和SM的生成,呈剂量依赖性,PACAP6-38拮抗PACAP1-38的上述作用。SPH促进HS766T的生长,促进HS766T Ca2+和SM的生成,呈剂量依赖性。结论SPH能促进人胰腺癌细胞株增殖,SM的信使作用一方面是通过与PI转换,活化PKC,产生IP3;另一方面通过刺激Ca2+转运和Ca2+的释放。

Dpc4基因转染胰腺癌细胞株对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的影响

目的探讨Dpc4基因转染胰腺癌细胞株HS766T对裸鼠移植瘤生长的影响。方法按pcDNA3．1-DOe4是否转染人胰腺癌细胞株HS766T将细胞分为pcDNA3．1-Dpc4转染组、pcDNA3．1空载体组和未转染组，RT—PCR鉴定目的基因的表达；将3组细胞分别接种于裸鼠，比较Dpc4基因对裸鼠胰腺癌移植瘤的生长抑制作用，

外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠过继免疫治疗中的作用

目的探讨外周血γδT细胞在胰腺癌裸鼠种植瘤体内过继免疫治疗中的作用。方法用胰腺癌细胞株Cap1注入BALB/c裸鼠皮下建立胰腺癌裸鼠种植瘤模型。裸鼠随机分为3组,每组10只。A组为γδT细胞治疗,B组为αβT细胞治疗,C组给以无血清RPMI1640作为对照。从胰腺癌患者外周血中提取淋巴细胞,体外特异性扩增γδT细胞后注入裸鼠腹腔内,观察种植瘤裸鼠生存时间、肿瘤体积和肿瘤病灶坏死程度。结果A组成瘤率9/10,B、C组均为8/10(P>0.05)。当肿瘤生长到16、37和52d时,A组与B、C组肿瘤体积差别具有统计学意义(P值分别为0.019和0.022)。120d时C组8只种植瘤裸鼠全部死亡,B组有5只死亡,A组有3只死亡,3组之间死亡率差异具有统计学意义(P=0.023);KruskalWallis检验生存时间存在统计学差异(P=0.036)。γδT细胞治疗组中有4只肿瘤病灶出现坏死脱落,B和C组中各有1只肿瘤出现坏死;肿瘤生长到1个月后,B组和C组中裸鼠发生头部、眼眶、尾部、会阴部和对侧腹股沟区转移,A组仅1例发生对侧腹股沟部转移;A组中有1例裸鼠种植瘤脱落消失,而B组和C组均无肿瘤脱落、坏死消失发生。结论外周血γδT细胞对胰腺癌裸鼠种植瘤具有显著的抑瘤作用。

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子l在胰腺癌中的表达及其意义

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（T lymphoma invasion and metastasis inducing factor，Tiaml）被证实在多种肿瘤细胞系中表达，且在肿瘤的发生发展中起到重要作用[1-4]，但Tiaml与胰腺癌的关系尚不明确。本研究检测Tiaml在胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中的表达，探讨其临床意义。