乌苏酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

目的探讨乌苏酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡的影响。方法以1.25,2.5,5,10,25,50μmol/L乌苏酸培养PANC-1细胞24,48,72 h,采用四氮唑盐(MTT)法测定细胞活性。实验分为对照1组(等体积二甲基亚砜)及乌苏酸低、中、高剂量组(5,10,20μmol/L乌苏酸),显微镜下观察细胞形态,采用Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt),磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR),活化半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2关联X蛋白(Bax)的蛋白表达水平,采用细胞集落形成实验观察细胞增殖情况。实验分为对照2组(等体积二甲基亚砜)和乌苏酸组(10μmol/L乌苏酸),采用细胞划痕实验观察细胞培养48,72 h的迁移情况。利用分子对接实验模拟乌苏酸与PI3K和Akt2的相互作用。结果随着乌苏酸浓度的升高,PANC-1细胞活性逐渐减弱,24,48,72 h时的半数抑制浓度(IC50)分别为7.89,6.26,5.06μmol/L。与对照1组比较,乌苏酸各剂量组细胞逐渐失去原有形态,且随着浓度的增加,变形细胞数目随之增加,且细胞边界模糊不清;细胞数量显著减少(P<0.05);乌苏酸各剂量组细胞Cleaved Caspase-3、Bax蛋白的表达水平均显著升高,乌苏酸中、高剂量组细胞Bcl-2蛋白表达水平显著降低,乌苏酸各剂量组细胞p-m TOR,中、高剂量组细胞p-Akt,高剂量组细胞PI3K蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与对照2组比较,乌苏酸组细胞48 h,72 h的迁移距离缩短。乌苏酸的乌苏烷型三萜类结构可进入PI3K与Akt2中的三磷酸腺苷(ATP)结合位点竞争性结合疏水口袋,从而影响PI3K和Akt2与ATP的结合,抑制其激活。结论乌苏酸可通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路的激活而抑制PANC-1细胞的增殖,促进其凋亡。

龙胆苦苷对人胰腺癌细胞PANC-1凋亡及IL-6/JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究龙胆苦苷对人胰腺癌细胞PANC-1凋亡的影响,并从白细胞介素6(IL-6)/Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路角度研究其作用机制。方法:以PANC-1细胞为研究模型,采用MTT法测定0(阴性对照)、2、4、8、16、32、64、128 mg/L龙胆苦苷作用于细胞72 h后的增殖抑制率,并计算其半数抑制浓度(IC50)。分别将细胞分为阴性对照组、吉西他滨组(阳性对照,4 mg/L)和龙胆苦苷低、中、高浓度组(15、30、60 mg/L)。分别于培养1、3、5、7 d后,采用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,考察各组细胞的生长情况;培养72 h后,采用克隆形成试验考察细胞的克隆形成率,采用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链式反应法和Western blotting法分别测定细胞中IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及其蛋白表达水平。结果:4~28 mg/L龙胆苦苷均可显著抑制细胞的增殖(P<0.05或P<0.01),并具有一定的浓度依赖性趋势,IC50为9.54 mg/L。与阴性对照组比较,吉西他滨组和龙胆苦苷中、高浓度组活细胞计数(作用3、5、7 d)和细胞中IL-6、JAK2、STAT3 mRNA及其蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);吉西他滨组和龙胆苦苷高浓度组细胞的克隆形成率均显著降低(P<0.01)。与吉西他滨组比较,龙胆苦苷高浓度组细胞中上述指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:30、60 mg/L龙胆苦苷可显著抑制PANC-1细胞的增殖、诱导其凋亡,60 mg/L龙胆苦苷的作用与吉西他滨相当;其作用机制可能与抑制细胞中IL-6/JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

CYLD基因转染对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖及凋亡的影响

目的观察CYLD基因转染对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖及凋亡的影响。方法采用脂质体法将重组真核细胞表达载体pc DNA3.0(-)/CYLD转染PANC-1细胞,利用G418筛选带有pc DNA3.0(-)/CYLD的细胞。用Western blotting法检测PANC-1细胞中的CYLD蛋白,MTT法测定PANC-1细胞OD值,流式细胞仪检测凋亡PANC-1细胞并计算细胞凋亡率。结果与未转染及转染空载质粒的PANC-1细胞相比,转染pc DNA3.0(-)/CYLD的PANC-1细胞CYLD蛋白表达明显,其OD值降低、凋亡率升高(P均<0.05)。结论 CYLD基因转染可抑制人胰腺癌PANC-1细胞的增殖并诱导其凋亡。

羟基喜树碱对人胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用

目的研究羟基喜树碱对人胰腺癌PANC-1细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法MTT法测定羟基喜树碱对PANC-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测羟基喜树碱对PANC-1细胞周期、凋亡率和Caspase-3活性的影响。结果羟基喜树碱能抑制PANC-1细胞生长,并呈剂量依赖关系,其半数抑制浓度(IC50)为51.52μg/ml;流式细胞仪检测显示低浓度羟基喜树碱处理后可将细胞先后阻滞于S期和G2/M期,高浓度的羟基喜树碱则诱导细胞凋亡;细胞凋亡率和Caspase-3活性随药物浓度升高和处理时间延长而逐渐递增。结论羟基喜树碱能抑制人胰腺癌PANC-1细胞的生长,其抗肿瘤作用机制与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡和激活Caspase-3活性有关。

舒林酸对人胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响及机制探讨

目的以人胰腺癌细胞系PANC-1为研究对象,利用不同浓度舒林酸处理PANC-1细胞,观察其对PANC-1细胞增殖、凋亡影响,并探讨舒林酸通过抑制Wnt/β-catenin信号通路杀伤PANC-1细胞的可能机制。方法实验分为阴性对照组(加入不含舒林酸的DMSO)和实验组(分别加入舒林酸浓度为0.25、0.5、1、1.5、2 mM的培养液,分别为:阴性对照组、0.25 mM组、0.5 mM组、1.0mM组、1.5 mM组、2.0 mM组,总计6组)。MTT法检测PANC-1细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞内β-Catenin的表达。结果 MTT结果显示:PANC-1细胞经舒林酸干预后生长均受到不同程度抑制,且随着舒林酸浓度增加,抑制作用越强。流式细胞术检测凋亡结果显示PANC-1细胞早期凋亡率干预后均有不同程度增加,与对照组相比,0.5、1.0 mM组早期凋亡率差异无统计学意义,而1.5、2.0 mM组差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示可见各组β-catenin mRNA表达量随着舒林酸浓度增加而降低,0.5、1.0 mM组与对照组相比差异无统计学意义,而1.5及2.0 mM组差异有统计学意义(P<0.05);应用2.0 mM的舒林酸处理PANC-1细胞0、12、24、48、72 h,随着处理时间延长,β-catenin mRNA表达量逐渐降低,各处理组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。ICC结果证实干预后PANC-1细胞内β-catenin表达量及核聚集降低,与对照组相比,0.25、0.5 mM组差异无统计学意义,而1.0、1.5、2.0 mM组差异有统计学意义(P<0.05)。结论舒林酸对PANC-1细胞具有生长抑制及促凋亡作用,这种作用具有浓度-时间依赖性,舒林酸抑制Wnt/β-catenin信号通路可能是其杀伤PANC-1细胞的可能机制之一。

吉西他滨对胰腺癌细胞株PANC-1中TMS1/ASC基因表达及启动子甲基化的影响

目的:观察吉西他滨(GEM)对胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化诱导静止基因(TMS1/ASC)的表达及其启动子区甲基化的影响,并讨论其疗效机制。方法:将对数生长期PANC-1分为两组,以加入4.27μg/ml的GEM作用于PANC-1细胞者为实验组(GEM组),以不加GEM者为对照组,分别继续培养24h,采用DNA原位末端标记(TUNEL)法结合激光共聚焦显微镜观察两组PANC-1细胞凋亡和细胞核形态变化;采用RT-PCR检测两组PANC-1细胞中TMS1/ASC mRNA的表达情况;采用重亚硫酸盐限制内切酶法(COBRA)检测两组PANC-1细胞中TMS1/ASC的甲基化状态。结果:(1)GEM组中PANC-1凋亡明显(FITC和PI双染阳性),对照组未见PANC-1凋亡;(2)GEM组PANC-1的TMS1/ASC mRNA表达显著高于对照组(P<0.01);(3)GEM组PANC-1中TMS1/ASC启动子区甲基化率显著低于对照组(P<0.01)。结论:GEM可能通过促进PANC-1细胞凋亡,上调TMS1/ASC mRNA表达以及抑制TMS1/ASC启动子区的甲基化而起到治疗胰腺癌的作用。

吉西他滨对胰腺癌细胞PANC-1活性和蛋白表达的影响

目的:研究吉西他滨(健择,Gemcitabine,GEM)对胰腺癌细胞PANC-1活性及蛋白表达的影响。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法检测吉西他滨在不同时间(12h、24h、36h、48h)下对胰腺癌细胞PANC-1存活率的影响,透射电镜观察吉西他滨对胰腺癌细胞PANC-1形态的影响,蛋白印迹法观察经吉西他滨作用前后蛋白的表达。结果:吉西他滨对PANC-1细胞生长的抑制有时间依赖性,透射电镜观察胰腺癌细胞发生核质疏松,核膜分层、起泡甚至破裂,核质溢出,胞浆也出现空泡,细胞膜和细胞器发生明显改变,随而质膜渗透性增加并细胞溶解,蛋白印迹法显示,GEM影响蛋白质表达。结论:吉西他滨对胰腺癌细胞PANC-1的生长具有显著抑制作用。药物敏感性降低和作用时间延长能导致蛋白的表达及改变。

PIEZO2通过改变细胞功能促进胰腺癌细胞的发生发展

目的探讨压电型机械敏感离子通道元件2(piezoelectric type mechanosensitive ion channel component 2,PIEZO2)对胰腺癌细胞发生发展的影响。方法采用免疫组织化学技术检测胰腺癌与癌旁组织的PIEZO2阳性率;将PIEZO2干扰片段转染到胰腺癌细胞Panc-1中,通过实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测PIEZO2的转录水平及蛋白水平。以细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK8)检测细胞增殖情况,transwell法检测细胞的迁移侵袭能力。通过Illumina HiSeq^(TM)X Ten进行cDNA文库构建并测序,分析干扰PIEZO2后Panc-1细胞内差异基因并通过GO富集分析参与基因富集的相关通路。结果胰腺癌组织中PIEZO2表达水平高于癌旁组织,且高PIEZO2表达的胰腺癌患者总生存率较低。敲减PIEZO2基因后,qPCR和WB结果显示PIEZO2的表达量较对照组减低,差异具有统计学意义。敲减组的增殖、迁移、侵袭能力均低于对照组,且差异具有统计学意义。对两组进行转录组分析发现,两组分别获得15521,15325个基因,与敲减组相比,对照组有3411个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)上调,2830个DEGs下调,GO富集分析发现DEGs基因主要富集于细胞内解剖结构、细胞连接和细胞外基质。结论敲除PIEZO2可抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,PIEZO2通过调控细胞解剖结构、细胞连接和细胞外基质参与胰腺癌的发生发展,靶向PIEZO2将是胰腺癌新的治疗策略。

着色性干皮病D组蛋白对胰腺癌PANC-1细胞紫杉醇敏感性的影响

目的研究表明化疗药物耐药和与消化道肿瘤相关的一系列基因分子突变密切相关。文章研究野生型人剪切修复基因XPD转染人胰腺癌PANC-1细胞后对结合型紫杉醇敏感性的影响。方法将空载质粒p EGFP-N_2及重组质粒p EGFP-N_2/XPD通过瞬时转染于人胰腺癌PANC-1细胞。设正常对照组(不作任何处理)、空载质粒转染组(空载质粒p EGFPN_2转染)、重组质粒XPD转染组(重组质粒p EGFP-N_2/XPD转染)。使用RT-PCR和Western blot方法检验转染后XPD mRNA及蛋白表达;MTT实验检测结合型紫杉醇对XPD转染后PANC-1细胞增殖活性的变化;流式细胞仪检测XPD转染后PANC-1细胞在结合型紫杉醇作用下凋亡反应的差异。结果重组质粒XPD转染组中XPD mRNA表达量(9.572±0.345)和蛋白表达量(1.055±0.012)较正常对照组(1.125±0.043,0.302±0.002)及空载质粒转染组(1.273±0.057,0.378±0.004)明显升高(P<0.01);正常对照组与空载质粒转染组XPD mRNA和蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示不同浓度结合型紫杉醇作用PANC-1细胞24 h后,重组质粒XPD转染组的A值均明显低于正常对照组、空载质粒转染组,差异均有统计学意义(P<0.05);正常对照组与空载质粒转染组差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示不同浓度结合型紫杉醇作用PANC-1细胞24 h后,重组质粒XPD转染组细胞凋亡率均明显高于正常对照组、空载质粒转染组,差异均有统计学意义(P<0.01);正常对照组与空载质粒转染组差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过XPD转染PANC-1细胞可明显增强PANC-1细胞对结合型紫杉醇的化疗敏感性。

miR-96通过靶同HERG1对胰腺癌细胞系PANC-1放疗敏感性的影响

HERG1也被称为KCNH2或KvlLl,是快速延迟整流的电压门控钾离子通道家族成员之一[1],有越来越多的证据表明HERG1在多种肿瘤细胞中高表达[2-6],对肿瘤细胞增殖、调亡、分化及侵袭密切相关,而在相应正常细胞中不表达[4-7]。miR-96胰腺癌组织中表达下调,其靶基因HERG1可通过调控相关信号通路影响细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力。有关研究表明过表达miR-96的胰腺癌细胞PANC-1增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力都明显减弱,细胞凋亡增加[8]。本研究以PANC-1细胞为研究对象,研究miR-96对其放射敏感性的作用,以期为胰腺癌的临床治疗提供新思路。

miR-15a负调控Bmi-1对胰腺癌细胞系PANC-1放射敏感性影响

研究表明,不同miRNA参与不同肿瘤的发生发展过程,且其表达方式具有特异性[1].miR-15a作为一种与肿瘤相关的基因,对癌细胞凋亡的调控发挥关键作用.Bmi-1作为PcG家族中的一种转录因子,对肿瘤的发生发展发挥重要作用[2-3].

放射诱导p16基因胰腺癌靶向性表达的研究

目的 构建 pcDNA3.1 Egr.1p-p16重组质粒并检测其在人胰腺癌 JF305细胞中的辐射诱导表达。方法 将人p16 cDNA基因连接到有辐射诱导特性的早期反应因子 Egr.1p的下游,构建成 pcDNA3.1 -Egr.1p- p16 重组质粒,利用脂质体介导转染人胰腺癌细胞系 JF305 细胞;采用 RT- PCR方法和 Western blot方法检测不同剂量 X射线照射后,被转染细胞中 p16 的转录和表达水平。结果 酶切鉴定证实 pcDNA3. 1 Egr. 1p -p16 重组质粒构建正确。被pcDNA3.1 Egr.1p -p16重组质粒转染的人胰腺癌 JF305细胞经不同剂量 X射线照射后,p16 基因表达均高于未照射组。结论 X射线可诱导 pcDNA3.1 -Egr.1p -p16重组质粒在人胰腺癌 JF305细胞中表达增强。

脂质体介导的IGF-1R反义寡核苷酸抗胰腺癌的实验研究

目的研究辐射促进脂质体(lipofectin)介导的胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)反义寡核苷酸(ASON)抑制人胰腺癌细胞系PC-3的生长及接种裸鼠后的成瘤性。方法PC-3细胞经不同剂量60Co照射后,绘制剂量存活曲线,选择照射剂量。用噻唑蓝(MTT)比色法比较脂质体介导的ASON(lipo-ASON)直接转染与联合照射转染对PC-3细胞的抑制效果,用流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两种转染方法对PC-3细胞凋亡率及IGF-1RmRNA表达的影响。裸鼠种植PC-3细胞,肿瘤直径为5mm时,比较不同条件下(肿瘤局部照射与不照射)瘤内注射IGF-1Rlipo-ASON对肿瘤的抑制情况。结果Lipo-ASON联合照射对胰腺癌细胞的抑制率(86.3%)、凋亡率(53.06%)及IGF-1RmRNA水平降低程度(降低79.2%)均明显高于未照射组(51.1%、20.23%和45.6%),差异有显著性。照射后瘤内注射lipo-ASON组的肿瘤体积明显小于其他各组,空白对照组与联合照射的lipo-ASON组、Lipo-ASON组肿瘤体积差异有显著性(P<0.01)。结论针对IGF-

二甲双胍对人胰腺癌细胞株PANC-1生长侵袭影响及其机制的探讨

目的:研究二甲双胍对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡及侵袭的影响,并初步探讨其可能机制。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,给予不同浓度二甲双胍进行干预作为实验组,无药物组作为对照组。MTT法检测二甲双胍对PANC-1细胞存活率的影响;流式细胞仪检测二甲双胍对PANC-1细胞周期及细胞凋亡的影响;Transwell小室侵袭实验观察细胞侵袭能力;RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cyclin D1、MMP-2和MMP-9mRNA的表达。结果:与对照组相比,用药组细胞增殖活性明显下降,F值分别为70.318、327.201和654.196,P<0.01,且呈时间-浓度依赖性。流式细胞仪检测细胞周期结果显示,随着二甲双胍浓度的增加,G0/G1期细胞所占百分率逐渐增加,S期和G2/M期细胞所占百分率逐渐下降,F值分别为208.365、195.308和48.87,P<0.01;流式细胞仪分析对照组与实验组早期和晚期细胞凋亡率差异无统计学意义,F值分别为0.123和0.298,P>0.05。侵袭实验结果显示,随着二甲双胍浓度的增加,细胞侵袭能力逐渐下降,F=66.131,P<0.01。RT-PCR示,二甲双胍干预组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9mRNA表达明显降低,t值分别为6.789、13.452和25.72,P<0.01;Bax、Bcl-2和Caspase-3mRNA与对照组相比差异无统计学意义,t值分别为-0.683、-1.567和0.78,P>0.05。结论:二甲双胍能显著抑制人胰腺癌细胞株PANC-1的增殖和侵袭,机制主要与其阻滞细胞周期以及影响相关基因表达有关;二甲双胍对PANC-1细胞的凋亡无明显诱导作用。

2型重组腺相关病毒/增强型绿色荧光蛋白转染胰腺癌细胞PANC-1的体外研究

基因治疗的关键是目的基因的高效转染和表达。我们采用2型重组腺相关病毒（rAAV2／EGFP）对人胰腺癌细胞PANC-1进行体外基因转移，观察EGFP基因能否在PANC-1中有效表达及其细胞毒性，探讨rAAV2介导目的基因转导胰腺癌细胞的效率。

尼美舒利对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

我们通过噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术、逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）等方法，观察体外尼美舒利对人胰腺癌细胞株PANC-1的作用，并探讨其可能的作用机制，为临床开辟新的抗癌途径提供依据。

TGF-β上调胰腺导管腺癌微管相关蛋白MAP1S的表达和自噬流

自噬是细胞重复利用错误折叠/聚集的蛋白质或功能失调的细胞器（如受损的线粒体）的自我调节过程。作为神经元细胞特有的MAP1A和MAP1B的同源物,微管相关蛋白MAP1S（最初被称为C19ORF5）广泛分布于机体内,最初曾与自噬的标志物微管相关蛋白1轻链3（light chain 3,LC3）一起被分离。

siRNA沉默Rab23基因对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响

Sonic hedgehog（Shh）信号通路是在动物胚胎发育过程中调节细胞间相互作用的重要信号分子之一,在胰腺癌的发生发展过程中发挥重要作用.Rab23是该信号通路副调控基因,其功能受到抑制后会导致hedgehog信号通路活性受阻.该研究设计针对Rab23基因的siRNA将其沉默,观察对胰腺癌细胞PANC-1增殖和凋亡的影响,为胰腺癌的临床诊断、治疗及预后提供依据.

人参炔醇对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制作用

目的探讨人参炔醇(PNN)对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的抑制作用。方法将人胰腺癌细胞PANC-1分为3个PNN浓度(1、9、27μmol/L)组和对照(C)组,MTT检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期变化,Western blot检测各组细胞Ki67蛋白表达。结果 PNN组细胞抑制率和G1期细胞比例均呈浓度依赖性增加,而Ki67蛋白表达量呈浓度依赖性递减(P<0.01)。结论 PNN可能通过抑制细胞分裂和Ki67表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖发挥抑制作用。

蜂毒肽联合吉西他滨对人胰腺癌细胞PANC-1的作用

我们将蜂毒肽和吉西他滨单独和联合作用于胰腺癌PANC-1细胞株,观察药物干预后细胞的增殖及凋亡,并分析半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶家族（Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9）、信号转导与转录活化因子3（STAT3）及磷酸化STAT3（p-STAT3）的表达,探讨两药联用的潜在机制。