人参炔醇体外抑制人胰腺癌SW1990细胞迁移作用研究

目的胰腺癌患者的高死亡率与肿瘤转移高度相关,本研究主要探讨人参炔醇对胰腺癌细胞迁移的作用。方法将人胰腺癌细胞系SW1990细胞与不同浓度人参炔醇(0、8、16、32和64μg/mL)分别共培养3、6、12和24h后,CCK-8试验检测人参炔醇对SW1990增殖活性的影响;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测人参炔醇对细胞迁移能力的影响;蛋白质印迹法检测细胞迁移相关蛋白E-Cadherin、MMP-9和Vimentin以及增殖相关蛋白PCNA表达的变化。结果 CCK-8试验结果显示,不同浓度人参炔醇对SW1990增殖具有抑制作用,但不同浓度之间抑制作用存在差异;其中以浓度为32μg/mL人参炔醇作用24h后抑制率最高。划痕实验及Transwell迁移实验结果显示,对照组(0μg/mL)细胞的愈合率为(78.3±1.4)%,8、16和32μg/mL人参炔醇组细胞的愈合率分别为(47.8±1.9)%、(30.82±1.2)%和(20.54±2.8)%,差异有统计学意义,F=169.524,P<0.01。Transwell迁移实验中,对照组与实验组穿至下室的细胞数分别为410.0±7.41、351.3±5.20、183.1±10.01和108.5±10.53,差异有统计学意义,F=284.574,P<0.01。不同浓度人参炔醇对SW1990细胞迁移具有抑制作用,且在32μg/mL浓度24h抑制作用最为显著。蛋白质印迹法结果显示,随着药物浓度升高,SW1990细胞E-Cadherin表达上调,Vimentin及MMP-9表达下调,P<0.01;增殖相关蛋白PCNA的表达下调,P<0.01。结论人参炔醇能够有效的抑制胰腺癌SW1990细胞迁移,这一作用主要与通过抑制细胞增殖及上皮细胞向间质细胞转化相关。

β-谷甾醇对人自然杀伤细胞杀伤胰腺癌SW-1990细胞的影响

目的研究β-谷甾醇对人自然杀伤(NK)细胞和人胰腺癌细胞株SW-1990增殖率和功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用本室建立的专用培养液培养NK细胞。不同浓度的β-谷甾醇作用于NK细胞及胰腺癌SW-1990细胞,四甲基偶氮唑蓝法测定β-谷甾醇对NK细胞及胰腺癌SW-1990细胞生长的影响;流式细胞仪检测胰腺癌SW-1990细胞生长周期和凋亡情况;乳酸脱氢酶法评价经不同浓度β-谷甾醇干预后,NK细胞对胰腺癌SW-1990细胞杀伤活性的变化。结果浓度为1.25～10.00μg/mL的β-谷甾醇作用48h后,NK细胞生长抑制率呈负数,较对照组明显降低(P<0.05),但浓度增加到40～80μg/mL后,NK细胞生长抑制率较对照组显著增高(P<0.05);浓度为10～80μg/mL的β-谷甾醇对胰腺癌SW-1990细胞生长有明显抑制作用(P<0.05);浓度为10μg/mL的β-谷甾醇作用后胰腺癌SW-1990细胞凋亡率为27.18%,较对照组及低浓度组明显增加(P<0.05);β-谷甾醇使SW-1990细胞周期主要停滞于S期;浓度为1.25及2.5μg/mL的β-谷甾醇作用48h后,NK细胞对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05),且在1.25μg/mL时达最高峰(76.3%);当β-谷甾醇浓度大于5μg/mL,NK细胞的杀伤活性随药物浓度的增加逐渐下降。结论β-谷甾醇能够有效提高NK细胞对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤能力。

羽扇豆醇对胰腺癌细胞株SW1990及γδT细胞生长的影响

目的:探讨羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990及γδT细胞生长的影响.方法:采用本实验室体外扩增人外周血γδT细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的羽扇豆醇在不同时间段对人γδT细胞和人胰腺癌细胞SW1990生长的影响.本实验分3组:空白对照组、溶剂对照组和实验组,时间段分24、48、72h组.结果:羽扇豆醇浓度在0.4-200μg/mL时羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990在24、48、72h各组与空白对照组和溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).而24、48、72h3组比较差异无统计学意义.γδT细胞培养7d从扩增前的3.61%增加到80.2%,羽扇豆醇对γδT细胞在24、48、72h随浓度的增加先增值后抑制作用.24h与空白对照组和溶剂对照组比较差异无统计学意义.48、72h各组与空白对照组和溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990有抑制作用,对γδT细胞随着浓度增加有先促进后抑制作用.

紫杉醇诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡过程中转录激活因子5和Bax表达水平的变化

目的转录激活因子5(Activating transcription factor 5,ATF5)是一个新的与肿瘤细胞分化、增殖及凋亡密切相关的因子。文中检测胰腺癌SW1990细胞中ATF5的表达,并进一步研究紫杉醇(Paclitaxel,PTX)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡的水平,及其与ATF5、Bax表达水平的相关性。方法 RT-PCR检测未经药物处理的SW1990细胞中ATF5 mRNA表达水平;以不同浓度的紫杉醇(0、6.25、12.5、25、50、100、200 nmol/L)作用SW1990细胞不同时间(0、6、12、24、48 h),噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;用100 nmol/L紫杉醇作用SW1990细胞不同时间(0、12、24、48 h)后,观察形态学变化并用Annexin V/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测紫杉醇作用不同时间后ATF5、Bax的mRNA表达变化。结果胰腺癌SW1990细胞中表达ATF5。紫杉醇抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,并在一定范围内呈剂量、时间相关性。随着紫杉醇作用时间的增加,流式细胞仪检测凋亡率显著提高。半定量RT-PCR检测结果显示:ATF5、Bax mRNA表达均明显增强,且两者之间存在相关性(r=0.916,P<0.05)。结论 ATF5在胰腺癌SW1990细胞中高表达,并且在紫杉醇诱导的细胞凋亡过程中,表达量进一步上升,其变化趋势与Bax基因相似。提示ATF5参与紫杉醇诱导的细胞凋亡,并可能与Bax的凋亡途径存在相关性。

吉西他滨白蛋白纳米粒对胰腺癌细胞株SW1990体外增殖抑制效应的实验研究

目的:通过体外实验,探讨吉西他滨(GEM)白蛋白纳米粒对人胰腺癌细胞株SW1990体外增殖的抑制效应。方法:以人胰腺癌细胞株SW1990为研究对象,分为5个给药组:110nm GEM纳米粒组、406nm GEM纳米粒组、单纯GEM组、空白纳米粒组和无药对照组;运用MTT法检测给药后48h和72h的增殖抑制率。结果:MTT试验检测提示110nm GEM-NP,406nm-GEM-NP和GEM均具有显著的细胞抑制作用,且72h后406nm-GEM-NP的细胞抑制率在50μg·mL-1GEM浓度时,超过了单纯GEM(P<0.05),表明其有显著的药物缓释作用;空白纳米粒对细胞抑制轻微,且不具有时间和浓度依赖性。结论:GEM白蛋白纳米粒,特别是406nm-GEM-NP,对人胰腺癌细胞株SW1990具有显著的体外细胞增殖抑制作用,并且生物相容性良好。

长链非编码RNA母源性印记基因3对人胰腺癌SW1990细胞生物学行为及p53蛋白水平的影响

我们选取母源性印记基因3（MEG3）表达缺失的人胰腺癌SW1990细胞株,向其导入并表达外源性MEG3基因片段,观察胰腺癌细胞的增殖、凋亡和p53蛋白水平的变化.

西妥昔单抗对胰腺癌SW1990、PANC-1细胞增殖的影响及其作用机制

目的探讨西妥昔单抗对胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1增殖的影响及其作用机制。方法 100.0μg/mL的西妥昔单抗加入DMEM培养基（西妥昔单抗组）,单纯DEME培养基作为空白组,2组分别培养胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1,采用MTT法检测SW1990、PANC-1培养12、24、48 h后的生长抑制情况,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹法（Western-blot）检测培养24h后的2组表皮生长因子受体基因（EGFR-mRNA）及蛋白的表达;采用流式细胞技术检测两组培养24 h后的细胞周期,采用双荧光素酶法检测2组培养24 h后Wnt/β-catenin通路的活性。结果培养12、24、48 h后,西妥昔单抗组的SW1990、PANC-1细胞株增殖OD值均低于空白组（P〈0.05）;在24、48 h时,西妥昔单抗组的SW1990、PANC-1细胞株增殖OD值较培养12 h时显著降低（P〈0.05）;培养24后,西妥昔单抗组的SW1990、PANC-1细胞的G1期细胞比例较空白组显著升高（P〈0.05）、S期、G2期细胞比例较空白组显著降低（P〈0.05）,西妥昔单抗组的SW1990、PANC-1 EGFR-mRNA及蛋白表达均低于空白组（P〈0.05）,西妥昔单抗组的Wnt/β-catenin通路的活性TOP/FOP值低于空白组（P〈0.05）。结论西妥昔单抗对胰腺癌细胞株SW1990、PANC-1细胞增殖具有显著的抑制作用,主要通过降低Wnt/β-catenin通路的活性及EGFR-mRNA及蛋白表达实现。

pEGFP—C1-HSP27真核表达载体的构建及其稳定转染人胰腺癌SW1990细胞株的筛选

目的构建表达热休克蛋白27（HSP27）的携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的真核载体，建立稳定表达HSP72的人胰腺癌SW1990细胞株。方法采用RT—PCR法从SW1990细胞中扩增出带有BamHI、Hind Ⅲ酶切位点的HSP27基因片段，插入真核表达载体pEGFP—C1，鉴定正确后用重组质粒转染SW1990细胞，并筛选稳转细胞株。荧光显微镜观察HSP72的定位，RT—PCR、蛋白质印迹法检测转染细胞HSP27的表达。结果双酶切法鉴定和测序证实重组载体pEGFP—C1一HSP27的DNA序列完全正确，并成功转染SW1990细胞，筛选获得稳转细胞株。荧光显微镜见EGFP主要分布在胞质中，转染细胞的HSP27 mRNA表达明显增加（1．458±0．160比0．897±0．051，P〈0．05），且表达HSP27与EGFP的融合蛋白。结论成功构建真核表达载体pEGFP—C1-HSP27，并筛选获得稳转的细胞株。

谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系体外增殖的影响

目的:研究谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系的增殖、凋亡及细胞毒性的影响及其可能的作用机制。方法:在体外用不同浓度的谷氨酸与人SW1990胰腺癌细胞作用后,用MTT比色法、BrdUrd渗入法和LDH法检测SW1990胰腺癌细胞的增殖能力、细胞分裂和死亡情况,并用激光共聚焦显微镜测定胞浆内游离钙离子浓度。结果:谷氨酸可以呈剂量依赖性地促进SW1990胰腺癌细胞的增殖(P<0.01),谷氨酸可以促进胰腺癌肿瘤细胞的分裂,减少其死亡(P<0.01),并且可以呈剂量依赖性地增加胞浆内游离钙离子浓度(P<0.01)。结论:谷氨酸可以促进肿瘤细胞的增殖,此作用可能是通过促进细胞的分裂、减少其死亡而实现的,且可能是通过增加胞浆内游离钙离子浓度介导的。

普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990的影响及其协同吉西他滨的抑瘤作用

目的研究普伐他汀(pravastatin,Pra)对人胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及其联合吉西他滨(gemcitabine,GEM)对该细胞的作用。方法MTT比色法测定普伐他汀对SW1990细胞生长的抑制作用。不同浓度普伐他汀处理细胞48 h后,流式细胞仪测定细胞凋亡率,光学显微镜下观察细胞形态学改变。吉西他滨、普伐他汀联合吉西他滨作用细胞48 h,MTT法测定各处理组的OD值,并计算相互作用指数。结果 MTT比色法显示普伐他汀对SW1990细胞具有抑制增殖的作用,5、15、25μmol/L普伐他汀处理SW1990细胞后,SW1990细胞出现典型的形态学改变,且凋亡百分率随浓度增大而逐渐增加。普伐他汀联合吉西他滨作用细胞后,GEM的IC50值降低。结论普伐他汀具有抑制胰腺癌细胞SW1990增殖和诱导该细胞凋亡的作用,普伐他汀联合吉西他滨对SW1990细胞具有协同抗瘤作用。

普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨普伐他汀(Pravastatin)对人胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养人胰腺癌细胞SW1990,给予不同浓度(0,5,10,20μmol·L-1)普伐他汀处理,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况及p21Ras、Bcl-2、Bax蛋白表达,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax m RNA水平。结果普伐他汀处理SW1990细胞后,细胞增殖受抑而凋亡增加,p21Ras、Bcl-2的蛋白表达降低而Bax的表达增高,Bcl-2 m RNA水平降低而Bax m RNA水平增高。结论普伐他汀可抑制胰腺癌细胞SW1990增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能是下调p21Ras、Bcl-2的表达和上调Bax的表达。

普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990的影响及其联合顺铂的抗瘤作用

目的探讨普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990的作用及其联合顺铂对该细胞增殖的影响。方法 采用MTT比色法检测普伐他汀对SW1990细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪测定细胞的周期分布和凋亡率。顺铂、普伐他汀联合顺铂作用细胞48 h后,采用MTT法测定各处理组的OD值,并计算相互作用指数（CI）。结果 1、5、10、15、25μmol/L普伐他汀作用于SW1990细胞24-72 h,随着药物浓度增加和作用时间延长,处理组OD值不同程度下降（P〈0.05）,生长抑制率逐渐增大。0、5、15、25μmol/L普伐他汀处理细胞48 h后,G0/G1期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞逐渐减少,凋亡率由（2.74±0.92）%增加至（27.85±1.56）%。普伐他汀联合顺铂作用细胞后,两者的CI值均〈1。结论 普伐他汀具有抑制胰腺癌细胞SW1990增殖和诱导该细胞凋亡的作用,并可阻滞细胞周期于G1期。普伐他汀联合顺铂对SW1990细胞具有协同抗瘤作用。

MMI-166对人胰腺癌SW1990细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的观察MMI-166对人胰腺癌SWl990细胞及其移植瘤组织凋亡相关蛋白表达的影响，探讨其可能机制。方法应用人胰腺癌细胞株SWl990建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，按完全随机法将荷瘤裸鼠分为对照组和MMI-166组，分别给予口服生理盐水和MMI-166（200mg·kg^-1·d^-1），持续28d。采用TUNEL法和蛋白质印迹法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（AI）及p53、c-Myc、Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase-1、Fas蛋白的表达。应用不同浓度（0、50、100μg／m1）MMI-166作用于人胰腺癌SWl990细胞24h，蛋白质印迹法检测c-Myc、Survivin的表达。结果MMI-166组移植瘤组织的AI为81．1±7．9，显著高于对照组的21．3±2．2（P：0．000）；c-Myc、Survivin的表达量分别为7715±2229、4594±1240，显著低于对照组的16870±2446、15208±1903（P值均为0．000）；p53、Bax、Bcl-2、Caspase-1、Fas的表达与对照组比较无显著变化。50、100μg/ml的MMI-166处理后，人胰腺癌SWl990细胞的c-Myc表达量显著下调（0．098±0．003、0．073±0．008tLo．169±0．007，F=189．361，P〈0．05）：Survivin的表达量无明显变化。结论MMI-166可能通过下调c-Myc的表达诱导人胰腺癌SWl990细胞凋亡。

转录激活因子5参与表没食子儿茶素没食子酸酯诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡

目的:研究转录激活因子5(ATF5)是否参与中国绿茶有效成分——表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的EGCG作用SW1990细胞不同时间后细胞的增殖情况;以100 mg/L EGCG作用SW1990细胞不同时间,观察细胞的形态学变化,并采用SR-VAD-FMK/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测100 mg/L EGCG作用不同时间后ATF5mRNA的表达变化。结果:EGCG可抑制胰腺癌SW1990细胞增殖,引起细胞皱缩,诱导细胞凋亡。随着EGCG作用时间的延长,细胞凋亡率显著提高(P<0.05),ATF5 mRNA的表达明显增强(P<0.05)。结论:胰腺癌SW1990细胞中存在ATF5的表达,在EGCG诱导的细胞凋亡过程中,ATF5表达量上升,提示ATF5参与EGCG诱导的细胞凋亡。

姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨的逆转作用及机制研究

目的:研究姜黄素对胰腺癌SW1990细胞耐吉西他滨(GEM)的逆转作用及机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度(50、100、150、200、250μmol/L)GEM对SW1990细胞和耐GEM SW1990细胞(SW1990/GEM耐药细胞)存活率的影响,计算半数抑制浓度(IC_(50))和耐药倍数;采用CCK8法检测不同浓度(1、5、10、20、40μmol/L)姜黄素对SW1990/GEM耐药细胞存活率的影响,计算IC_(50);采用CCK8法检测2.41μmol/L姜黄素与不同浓度(25、50、75、100、125μmol/L)GEM联用对SW1990细胞和SW1990/GEM耐药细胞存活率的影响,计算GEM的IC_(50)和耐药逆转倍数。采用流式细胞仪检测以GEM的IC_(50)为给药浓度,GEM单用、姜黄素(2.41μmol/L)与GEM联用处理SW1990细胞和SW1990/GEM耐药细胞后的细胞凋亡率和细胞周期分布,并采用Western blot法检测细胞中脂肪酸合成酶(FAS)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax)的蛋白表达,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mRNA表达。结果:GEM对SW1990细胞的IC_(50)为92μmol/L,对SW1990/GEM耐药细胞的IC_(50)为216μmol/L,SW1990细胞对GEM的耐药倍数为2.35;姜黄素对SW1990/GEM耐药细胞的IC_(50)为9.2μmol/L;2.41μmol/L姜黄素下,GEM对SW1990细胞的IC_(50)为75μmol/L,对SW1990/GEM耐药细胞的IC_(50)为98μmol/L,SW1990/GEM耐药细胞对GEM的耐药逆转倍数为2.2。与GEM单用比较,姜黄素与GEM联用时SW1990细胞和SW1990/GEM耐药细胞的凋亡率均明显升高(P<0.05),主要阻滞在G0/G1期,细胞中FAS、p-AKT、p-PI3K、Bcl-2蛋白表达水平和FAS、Bcl-2 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05),Bax、Cascapse-3蛋白表达水平和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:姜黄素可逆转SW1990细胞对GEM的耐药性,其机制可能与PI3K/AKT通路有关。

青藤碱对胰腺癌细胞系SW1990增殖及凋亡的影响

目的:探讨青藤碱(SIN)对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:胰腺癌SW1900细胞分为实验组和对照组,实验组设置SIN浓度梯度0.125、0.25、0.5、1.0及2.0 mmol/L组,对照组不作处理;CCK-8方法检测SIN对胰腺癌细胞SW1990增殖的影响,平板克隆实验检测SIN对胰腺癌SW1990细胞集落形成的影响,流式细胞术检测SIN对胰腺癌SW1990细胞凋亡的影响,Western blot检测SIN对胰腺癌SW1990细胞中PARP蛋白表达水平的影响。结果:SIN作用于SW1990细胞后,细胞增殖率随着SIN剂量增加而降低(P<0.05),细胞集落形成数量逐渐减少(P<0.05),细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05);相同浓度SIN时,随着作用时间延长,其对SW1990细胞增殖的抑制作用逐渐增强(P<0.05);Western blot结果显示胰腺癌SW1990细胞PARP蛋白表达水平逐渐随着SIN剂量增加而减少(P<0.05)。结论:青藤碱能有效抑制胰腺癌SW1990细胞的增殖,其机制可能与诱导SW1990细胞凋亡有关。

吉西他滨联合大黄素对胰腺癌SW1990细胞多耐药基因 1、miRNA 1271及上皮-间充质细胞转化的影响

目的探究吉西他滨联合大黄素对胰腺癌SW1990细胞生长的抑制作用及对多耐药基因 1(MDR 1)、miRNA 1271和上皮-间充质细胞转化(EMT)的影响。方法将胰腺癌SW1990细胞分为大黄素组(40μmol/L)、吉西他滨(20μmol/L)、吉西他滨联合大黄素组及对照组(生理盐水),流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室模型检测胰腺癌细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT PCR)检测MDR 1、miRNA 1271及EMT相关标志物(TWIST1、ZEB1、E cadhcrin)mRNA表达,流式细胞仪检测MDR 1编码的P糖蛋白(P gp)阳性率,蛋白质免疫印迹法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤2(Bcl 2)及其相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase 3)及Survivin]及EMT相关标志物蛋白含量。结果联合组可显著抑制胰腺癌SW1990细胞增殖和侵袭,SW1990细胞凋亡率显著更高,与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。联合组MDR 1 mRNA显著降低,miRNA 1271及E cadhcrin mRNA显著升高,且与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05),各组TWIST1、ZEB1 mRNA水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组可以显著抑制Bcl 2、Caspase 3及Survivin表达,上调Bax表达,降低Bcl 2、Bax比值,其效果明显高于吉西他滨组和大黄素组(P<0.05)。联合组E cadhcrin蛋白表达显著高于其他组,P gp、TWIST1、ZEB1蛋白表达显著低于其他组(P<0.05)。结论大黄素能够下调MDR 1降低胰腺癌细胞对吉西他滨耐药性,并能通过提高miRNA 1271抑制胰腺癌细胞EMT转化。

Apollon siRNA抑制胰腺癌SW1990细胞增殖的研究

目的：研究凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAPs）家族成员 Apollon小干扰 RNA（small interference RNA，siRNA）对人胰腺癌 SW1990细胞增殖的影响，并进一步探讨其作用机制。方法将前期研究的 Apollon siRNA的序列，经脂质体包裹转染胰腺癌（SW1990）细胞48 h后，采用WST-8法检测Apollon siRNA对胰腺癌SW1990细胞增殖抑制作用，并计算 IC50。流式细胞术检测细胞早期凋亡率；RT-PCR检测 Apollon mRNA的相对表达水平，western-blotting检测 Apollon蛋白的表达水平。结果 Apollon siRNA作用于胰腺癌（SW1990）细胞48 h后，能有效抑制 SW1990细胞增殖，并呈现剂量效应关系；流式细胞术检测结果显示：Apollon siRNA能促进胰腺癌（SW1990）细胞凋亡，其早期凋亡率达37.1％；RT-PCR结果显示，Apollon siRNA能显著下调Apollon mRNA及蛋白在胰腺癌细胞中的表达水平。结论 Apol-lon siRNA可抑制胰腺癌细胞的增殖，作用机制可能为共同促进胰腺细胞早期凋亡、下调 mRNA及蛋白的表达有关，为临床上胰腺癌的靶向基因治疗提供理论基础。

冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的抑制作用及机制

目的探讨冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法以10、20、40μmol/L不同浓度冬凌草甲素(Ori)作用于胰腺癌SW1990细胞,采用CCK-8检测胰腺癌SW1990细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;RT-PCR法检测Survivin、p21基因mRNA表达水平。结果不同浓度的Ori作用于胰腺癌SW1990细胞1、2、3 d后,胰腺癌SW1990细胞增殖抑制程度不等,药物浓度越高,抑制程度越高,两者间具有明显剂量与时间依赖性。0、10、20、40μmol/L的冬凌草甲素作用于胰腺癌SW1990细胞24 h后,凋亡率分别为0.87%±0.65%、1.85%±1.02%、5.38%±0.15%和16.60%±0.50%,出现明显的G2/M期周期阻滞。与对照组相比,10、20、40μmol/L的Ori作用于SW1990细胞24 h后,p21 mRNA表达增加,而Survivin mRNA表达下降。结论冬凌草甲素通过诱导凋亡和G2/M期周期阻滞来实现对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用,其机制可能与Survivin和p21调节信号有关。

蝙蝠葛碱抑制人胰腺癌SW1900细胞系增殖及诱导其凋亡

目的探讨蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度蝙蝠葛碱处理细胞系SW1900,采用MTT法检测细胞增殖,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率。Real-time PCR和免疫印迹法分析蝙蝠葛碱处理SW1900细胞中凋亡蛋白及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)的表达水平。结果MTT实验显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地抑制SW1900细胞活力,F=783.7,P<0.001。流式细胞术结果显示,经0、6、12 mg/L蝙蝠葛碱处理的各组细胞凋亡率分别为(4.34±1.30)%、(14.94±1.94)%和(22.68±3.61)%,3组间均值差异有统计学意义,F=58.52,P<0.001,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性促进细胞凋亡。Real-time PCR实验结果显示,蝙蝠葛碱可剂量依赖性下调PI3K、Akt、Bcl-2的基因表达(PI3K mRNA,F=101,P=0.01;Akt mRNA,F=1666,P<0.01;Bcl-2 mRNA,F=753,P<0.001)。免疫印迹法结果显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地下调PI3K、Akt和Bcl-2的蛋白表达。结论蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞具有抑制其增殖和诱导其凋亡等作用,可能通过PI3K/Akt通路下调Bcl-2的表达诱导SW1900细胞凋亡。