紫外线灭活仙台病毒诱导人胶质瘤细胞系LN229凋亡作用(英文)

目的探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制。方法用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果 MTT检测显示灭活仙台病毒能够剂量依赖性抑制LN229细胞增殖;流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;caspase活性测定显示灭活病毒组细胞中caspase-3,-8和-9蛋白活性呈剂量依赖性增加;Western blotting结果显示,随着灭活病毒滴度增加,细胞中Bax、细胞色素c、Fas、FasL表达水平升高、而Bcl-2、caspase-8前体、caspase-9前体和caspase-3前体蛋白表达下降。结论灭活仙台病毒能够诱导LN229细胞剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体途径和死亡受体途径相关。

脂质组成对人胶质瘤细胞系恶性程度的影响

目的:探讨与神经胶质瘤恶性分化演变相关的脂质变化和复杂的脂质代谢网络。方法:选取具有不同成瘤能力和转移潜能的人神经胶质瘤细胞系A172、U251和U87MG,进行总脂抽提,通过Shotgun脂质组学方法进行规模性、整体性的脂质组学分析。结果:对3个人神经胶质瘤细胞系进行大规模脂质定性分析,共鉴定到1541个脂质分子,主要包括甘油磷脂、甘油脂和鞘脂三大类。与无成瘤能力的A172细胞系相比,甘油磷脂PC和PA的表达在恶性胶质母细胞瘤细胞U251和U87MG中呈现显著上调的趋势;含d18∶1的鞘脂(d18∶1SP)则随着胶质瘤成瘤能力和转移潜能的增加表达呈显著降低(P<0.05)。通过定量脂质组学研究,筛选得到121个具有统计学差异变化的脂质分子;并通过多元变量统计分析,揭示差异脂质组成能将具有成瘤和转移能力的细胞系U251和U87MG与无成瘤能力的细胞系A172系区分开来。结论:在成瘤能力和转移潜能不同的胶质瘤细胞系之间存在明显的脂质组成差异,差异表达的脂质可能与神经胶质瘤转移复发有关。

腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα及Caspase-3表达的影响

目的探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)及Caspase-3表达的影响。方法应用腺病毒载体将IL-24基因转染U251细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;Hoechst33258荧光染色,以及流式细胞术测定细胞凋亡;应用免疫组织化学方法检测topoⅡα表达;免疫印迹法检测topoⅡα和Caspase-3蛋白质表达变化;Transwell实验观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞侵袭力的影响。结果与对照组相比,Ad5F35-hIL-24对胶质瘤细胞有明显抑制作用,能显著诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性;免疫组织化学法显示,Ad5F35-hIL-24能明显抑制topoⅡα表达;免疫印迹检测表明,topoⅡα表达明显降低,而Caspase-3蛋白的表达水平增加;Transwell实验表明,Ad5F35-hIL-24能明显降低U251细胞的侵袭能力。结论外源性IL-24基因能显著抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;topoⅡα及Caspase-3是其重要的作用靶点。该结果对于IL-24基因用于临床治疗胶质瘤有一定参考意义。

U251细胞系中脑肿瘤干细胞耐药性的初步研究

目的探讨脑肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的耐药性及其机制。方法通过磁珠分选(MACS)将U251细胞中的CD133+与CD133-细胞进行分选,用MTT法和流式细胞技术比较CD133+与CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷(Vm-26)、卡莫司汀(BCNU)和顺铂(DDP)的敏感性、细胞凋亡率及细胞内药物蓄积的差异性,通过RT-PCR检测CD133+与CD133-细胞耐药基因谱的差异。结果 U251细胞系中,CD133+细胞约占5.4%,分选后的CD133+细胞的阳性率可达92.4%,CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷、卡莫司汀和顺铂的敏感性明显高于CD133+细胞;流式细胞仪试验显示,在中等浓度的替尼泊苷作用下,CD133-细胞的凋亡明显,并出现明显的"亚G1峰",而CD133+细胞并未受到明显抑制和杀灭;流式细胞仪检测显示CD133+细胞内的药物蓄积明显低于CD133-细胞;RT-PCR实验显示MDR1、BCRP、MRP、MGMT和Bcl-2表达在CD133+明显高于CD133-细胞。结论 CD133+是U251细胞系中的耐药细胞亚群,高表达ABC转运体,DNA修复和抗凋亡基因可能是CD133+细胞耐药的重要机制。