五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响

目的探讨五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法人胶质母细胞瘤株U251置于胎牛血清中培养,分为观察组和对照组。观察组应用五味子多糖作用于人胶质瘤U251细胞,对照组未应用任何药物作用于人胶质瘤U251细胞。四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。RT-PCR观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞周期素(cyclin)B1 mRNA、原癌基因(c-Myc)mRNA的影响。Western印迹观察800μg/ml五味子多糖对人胶质瘤U251细胞cyclin B1、c-Myc蛋白的影响。结果培养48 h后,观察组不同浓度用药组OD570值均低于对照组,且随着用药浓度的上升,五味子多糖对人胶质瘤U251细胞的增殖抑制作用逐渐加强趋势。观察组cyclin B1 mRNA、c-Myc mRNA相对表达量均低于对照组(P<0.05)。观察组cyclin B1、c-Myc蛋白表达量均低于对照组(P<0.05)。结论五味子多糖能够有效抑制人胶质瘤U251细胞增殖,这可能与五味子多糖抑制cyclin B1与c-Myc的表达作用有关。

HCMV感染对下调ATF5的人胶质瘤U251细胞干性的影响

研究HCMV感染对下调ATF5的U251细胞干性标记物CD133的表达、细胞增殖能力和克隆形成能力的影响。采用荧光定量PCR及Western-blot方法检测HCMV(MOI=1)感染的U251细胞IE、CD133基因及蛋白表达水平的变化,结果表明,随IE表达量的增加U251细胞中CD133表达量显著增加;成功构建沉默ATF5细胞系siATF5-U251,HCMV感染siATF5-U251细胞后使细胞增殖活性减弱,克隆形成率降低;荧光定量PCR及Western-blot检测HCMV感染显著抑制了siATF5-U251细胞内CD133的表达。因此,抑制ATF5的表达可成为恶性胶质瘤预防和治疗的新的作用靶点。

枸杞多糖联合卡铂对人胶质瘤U251细胞生长抑制和凋亡作用

目的观察枸杞多糖联合卡铂对神经胶质瘤U251细胞生长抑制和凋亡作用。方法将U251细胞随机分为四组,A组(空白组)加常规培养液,B、C、D三组分别加枸杞多糖、卡铂、枸杞多糖+卡铂联合组;通过细胞形态学、噻唑蓝法(methylthiazdyl tetrazolium,MTT)、DNA断端末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)及流式细胞仪,观察U251细胞生长抑制及凋亡情况。结果 B、C、D三组细胞生长抑制率及凋亡率均升高,但D组升高更明显,P<0.05。结论枸杞多糖联合卡铂更易使U251胶质瘤细胞生长受抑制,且诱导其凋亡。

榄香烯联合热疗对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的观察榄香烯联合热疗对人神经胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法将培养的U251细胞随机分为4组,其中A组加常规培养液,B、C、D 3组分别进行单纯热疗、单纯榄香烯及榄香烯联合热疗培养。分别通过细胞形态学、MTT法、DNA断端末端标记(TUNEL)法及流式细胞仪法,检测U251细胞增殖及凋亡情况。结果 B、C、D 3组细胞增殖抑制率及凋亡率均升高,但以D组最明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论榄香烯联合热疗对胶质瘤U251细胞具有抑增殖及促凋亡作用。

干扰MGMT的人胶质瘤U251细胞对替莫唑胺的敏感性变化

目的观察干扰O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)的人胶质瘤U251细胞对替莫唑胺(TMZ)的敏感性变化。方法培养人胶质瘤U251细胞,将U251细胞经16 mg/L替莫唑胺处理后分别转染si RNA-MGMT与siRNA-control,转染si RNA-MGMT质粒组为观察组,转染si RNA-control质粒组为对照组,不转染任何序列组为单药组,共培养48 h后收获细胞。qRT-PCR法检测三组细胞中MGMT的mRNA表达改变,MTT法观察各组U251细胞增殖能力,Transwell实验检测各组U251细胞侵袭能力。结果 qRT-PCR检测结果显示,观察组U251细胞中MGMT的mRNA表达量为(0.285±0.031),与对照组(1.104±0.096)和单药组(0.974±0.083)比较均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组与单药组比较差异无统计学意义(P>0.05);MTT检测结果显示,观察组U251细胞的OD值为(0.392±0.014),与对照组(0.561±0.021)和单药组(0.530±0.019)比较均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组与单药组比较差异无统计学意义(P>0.05);Transwell检测结果显示,观察组U251细胞穿过基质胶的数量为(64.27±7.04)个,与对照组[(128.14±14.37)个]和单药组[(119.63±10.92)个]比较均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组与单药组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论干扰MGMT的人胶质瘤U251细胞对替莫唑胺的敏感性增强。

瑞舒伐他汀对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对人神经胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人神经胶质细胞瘤U251细胞,分别采用5、10、20μmol/L瑞舒伐他汀进行干预,培养24、48、72、96 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测U251细胞周期的变化。结果处理96 h后,570 nm处吸光度（A570 nm）值变化最明显,瑞舒伐他汀每个浓度组A570 nm值与对照组比较均显著下降（P〈0.01）。瑞舒伐他汀处理细胞48 h后,与对照组比较,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,且瑞舒伐他汀浓度越大,该作用越强。使用不同浓度瑞舒伐他汀处理48~72 h能诱导U25l细胞凋亡。随着瑞舒伐他汀浓度的增加、作用时间的延长,凋亡峰更加明显,并呈浓度–效应和浓度–时间相关性。结论瑞舒伐他汀对胶质瘤U251细胞增殖具有一定的抑制作用,可以诱导胶质瘤U251细胞凋亡。

miR-200b通过靶向CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的研究hsa-miR-200b对人U251胶质瘤细胞增殖的影响及相关作用机制。方法将miR-200b过表达和表达沉默质粒分别稳定转染至胶质瘤U251细胞,qRT-PCR验证转染效率,CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化,qRTPCR以及Western blot方法检测的CRKL的m RNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点。将CRKL过表达和表达沉默质粒载体分别稳定转染至U251胶质瘤细胞,使用CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化。分别建立miR-200b和CRKL的稳定双转染U251细胞系,使用CCK-8法检测对各组细胞增殖水平的变化。结果与对照组相比,miR-200b过表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖并且抑制CRKL在U251胶质瘤细胞的m RNA和蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证了miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点;CRKL过表达显著增强胶质瘤U251细胞增殖能力;CRKL过表达有效阻断了miR-200b抑制胶质瘤U251细胞增殖的作用。结论 miR-200b能够通过靶向下调CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖。

低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤(U251)细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响

目的:研究低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤U251细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响。方法:35只荷人胶质瘤U251瘤裸小鼠,随机分为7个实验组,假照组:0 mGy;D1组:75 mGy;D2组:4 Gy;D1-12 h+D2组:D1照射后12 h予以D2;D1-24 h+D2组:D1照射后24 h予以D2;D1-48 h+D2组:D1照射后48 h时予以D2;D1-72 h+D2组:D1照射后72 h予以D2。每组5只。各实验组不同方式照射后4 d,荷瘤裸鼠全部处死,采用原位杂交技术检测荷瘤组织的p53、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:D1(75 mGy)和D2(4 Gy)照射后,胶质瘤细胞的p53和Bax的mRNA表达分别呈上升趋势,Bcl-2的mRNA表达呈下降趋势,但与假照组比较,差异无显著性(P>0.05);D1+D2组(D1和D2间隔24、48及72 h)的p53和Bax的mRNA表达明显增多,Bcl-2 mRNA表达显著下降,与假照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论:低剂量辐射在一定程度上可能上调了胶质瘤细胞的p53、Bax的mRNA表达,下调了Bcl-2mRNA的表达,同时对其后的大剂量辐射有协同作用。

腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα及Caspase-3表达的影响

目的探讨腺病毒介导的IL-24基因(Ad5F35-hIL-24)对胶质瘤细胞系U251拓扑异构酶Ⅱα(topoⅡα)及Caspase-3表达的影响。方法应用腺病毒载体将IL-24基因转染U251细胞后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;Hoechst33258荧光染色,以及流式细胞术测定细胞凋亡;应用免疫组织化学方法检测topoⅡα表达;免疫印迹法检测topoⅡα和Caspase-3蛋白质表达变化;Transwell实验观察Ad5F35-hIL-24对U251细胞侵袭力的影响。结果与对照组相比,Ad5F35-hIL-24对胶质瘤细胞有明显抑制作用,能显著诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性;免疫组织化学法显示,Ad5F35-hIL-24能明显抑制topoⅡα表达;免疫印迹检测表明,topoⅡα表达明显降低,而Caspase-3蛋白的表达水平增加;Transwell实验表明,Ad5F35-hIL-24能明显降低U251细胞的侵袭能力。结论外源性IL-24基因能显著抑制胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;topoⅡα及Caspase-3是其重要的作用靶点。该结果对于IL-24基因用于临床治疗胶质瘤有一定参考意义。

顺铂联合血管内皮抑制素对体外培养的U251人胶质瘤细胞生长的影响

目的以体外培养的U251人胶质瘤细胞作为模型,观察顺铂联合血管内皮抑制素对肿瘤细胞生长的影响。方法采用不同浓度的顺铂和血管内皮抑制素及顺铂与血管内皮抑制素的组合作用于体外培养的U251人胶质瘤细胞,以MTT比色法检测其对肿瘤细胞生长的影响。结果不同浓度的顺铂与血管内皮抑制素联合应用对体外培养的U251人胶质瘤细胞生长具有非常明显的协同抑制作用,强于单独使用顺铂或血管内皮抑制素组。结论顺铂联合血管内皮抑制素对体外培养的U251人胶质瘤细胞具有协同杀伤作用。

低剂量辐射对荷人胶质瘤(U251)裸小鼠移植瘤细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2表达的影响

目的研究低剂量辐射对荷人胶质瘤(U251)裸小鼠移植瘤细胞凋亡相关基因蛋白Bcl-2表达的影响。方法对荷人胶质瘤裸小鼠进行全身深部X射线照射,采用免疫组化技术检测荷人胶质瘤裸小鼠移植瘤组织的Bcl-2蛋白表达水平。结果D1(75 mGy)照射后,胶质瘤细胞的Bcl-2蛋白表达呈下降趋势,与假照组(0 mGy)比,无显著差异(P>0.05);D2(4 Gy)组、D1+D2组的Bcl-2蛋白表达明显减少,与假照组(0 mGy)比有统计学差异(P<0.05);而D1+D2组与D2组比较,有统计学差异(P<0.05),以D1+D2组Bcl-2蛋白的表达减少更为显著。结论低剂量辐射在一定程度上可能下调了胶质瘤细胞的Bcl-2蛋白的表达,同时对其后的大剂量辐射有协同作用。

U251细胞系中脑肿瘤干细胞耐药性的初步研究

目的探讨脑肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的耐药性及其机制。方法通过磁珠分选(MACS)将U251细胞中的CD133+与CD133-细胞进行分选,用MTT法和流式细胞技术比较CD133+与CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷(Vm-26)、卡莫司汀(BCNU)和顺铂(DDP)的敏感性、细胞凋亡率及细胞内药物蓄积的差异性,通过RT-PCR检测CD133+与CD133-细胞耐药基因谱的差异。结果 U251细胞系中,CD133+细胞约占5.4%,分选后的CD133+细胞的阳性率可达92.4%,CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷、卡莫司汀和顺铂的敏感性明显高于CD133+细胞;流式细胞仪试验显示,在中等浓度的替尼泊苷作用下,CD133-细胞的凋亡明显,并出现明显的"亚G1峰",而CD133+细胞并未受到明显抑制和杀灭;流式细胞仪检测显示CD133+细胞内的药物蓄积明显低于CD133-细胞;RT-PCR实验显示MDR1、BCRP、MRP、MGMT和Bcl-2表达在CD133+明显高于CD133-细胞。结论 CD133+是U251细胞系中的耐药细胞亚群,高表达ABC转运体,DNA修复和抗凋亡基因可能是CD133+细胞耐药的重要机制。

葛根素对胶质瘤细胞迁移侵袭能力影响研究

目的:探讨葛根素对人胶质瘤细胞U251的迁移、侵袭能力的影响。方法:体外培养U251细胞,加入佛波脂诱导,明胶酶谱法和Transwell小室分别观察不同浓度葛根素对其MMP表达水平及迁移侵袭能力的影响。结果:与对照组相比,葛根素显著降低U251细胞的MMP-2、MMP-3、MMP-9酶活性及迁移、侵袭能力,且呈一定量效关系。结论:通过抑制MMP酶活性,葛根素可有效抑制人胶质瘤细胞U251的迁移侵袭。

人胶质瘤细胞株U251,SHG-44,U87研究进展

脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性肿瘤,手术是其首选治疗方法,但由于脑胶质瘤为侵袭性生长,手术很难彻底切除,术后极易复发,而放、化疗对脑胶质瘤细胞缺乏特异性,因此,如何控制脑胶质瘤的恶性增殖和侵袭性生长是目前临床医学亟待解决的问题之一。对于脑胶质瘤的研究,实验研究中常用人胶质瘤细胞株U251,SHG-44和U87,本文就其相关研究进展进行综述。

沙利度胺对胶质瘤U251细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的探究不同浓度沙利度胺对人胶质瘤U251细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用0,10,50,100,200μmol·L^(-1)沙利度胺分别处理人胶质瘤U251细胞,用噻唑蓝(MTT)法分检测24、48和72 h的细胞活力,用流式细胞术各组细胞凋亡情况,用蛋白质印迹(Western blot)法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达的影响,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞培养上清液中VEGF水平。结果0,10,50,100,200μmol·L^(-1)沙利度胺组细胞凋亡率分别为(3.21±0.82)%,(28.21±4.23)%,(37.17±2.39)%,(68.12±3.28)%,(79.29±3.26)%,Bcl-2的表达分别为1.42±0.11,1.17±0.12,0.95±0.06,0.68±0.07,0.24±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.05);干预72 h,0,10,50,100,200μmol·L^(-1)沙利度胺组细胞活性分别为0.89±0.15,0.56±0.08,0.43±0.26,0.22±0.19,0.14±0.12,VEGF水平分别为(395.63±9.47),(161.12±6.47),(112.52±6.16),(98.81±9.92),(79.92±3.48)pg·mL^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.05),且具有剂量依赖性。结论沙利度胺对胶质瘤U251细胞具有显著的抑制作用,可以显著诱导细胞凋亡并抑制VEGF的表达。

CDK7抑制剂THZ1对人胶质瘤细胞 U251放疗的增敏性

目的探讨细胞周期蛋白酶抑制剂7(CDK7)THZ1对人胶质瘤细胞U251的体外放射增敏性。方法体外培养人胶质瘤细胞U251。MTT检测THZ1对U251的毒性作用,绘制不同浓度(0、8、16、32、64、128、256、512 noml/L)THZ1处理下的细胞存活曲线,并计算其IC50及IC20,将IC20作为后续试验的药物作用浓度。克隆形成实验检测射线联合THZ1对U251的作用,计算放射敏感性参数,绘制集落形成数量曲线。流式细胞术检测各组细胞周期分布。Westernblotting检测CDK7细胞周期蛋白、Bax凋亡相关蛋白及γH2AX蛋白表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验,2因素组间对比采用析因设计方差分析。结果 THZ1对U251具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;单独应用THZ1可使CDK7细胞周期蛋白抑制,X射线(6 Gy)联合IC20浓度THZ1(10 nmol/L)能够降低U251的克隆能力,放射增敏比为1.478,同时可使G0/G1期细胞比例由67%减少到11%、G2/M期细胞比例由12%增加到70%;凋亡相关蛋白Bax表达增加,DNA双链断裂标志γH2AX蛋白表达增加。结论 THZ1对U251具有放射增敏作用,其可能的机制是THZ1联合射线降低细胞损伤修复能力,诱导细胞凋亡,调节凋亡相关蛋白的表达,改变细胞生长周期。

龙葵碱对U251细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨龙葵碱对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。方法使用不同质量浓度的龙葵碱处理U251细胞,采用CCK-8法、划痕法、Transwell法、Hochest法、流式细胞术、免疫印迹法分别检测细胞增殖率、细胞迁移与侵袭、细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果龙葵碱对U251细胞的48 h半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μg/μL,其质量浓度在5～35μg/μL时,能够抑制细胞增殖(P<0.05);与对照组相比,龙葵碱组抑制细胞迁移和侵袭的能力随药物质量浓度增高而增强(P<0.05),同时细胞也出现明显凋亡特征,并均呈浓度依赖性;免疫印迹法显示龙葵碱可使凋亡相关蛋白Bax表达增加,Bcl-2表达降低,Bcl-2/Bax值降低。结论龙葵碱在有效剂量(5～35μg/μL)对U251细胞增殖生长具有抑制作用,并呈浓度依赖性;龙葵碱可抑制U251细胞的侵袭与迁移,可以影响凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达,使Bcl-2/Bax值降低,从而抑制U251细胞的增殖生长。

蒿甲醚对人胶质瘤细胞侵袭、转移及基质金属铁蛋白酶-2、9活性的影响

目的研究蒿甲醚对U251人胶质瘤细胞侵袭、转移能力以及基质金属铁蛋白酶-2、9活性的影响。方法将浓度为200μmol/L的蒿甲醚孵育U251胶质瘤细胞24h。利用划痕修复试验及Transwell小室建立体外迁移及侵袭模型,观察蒿甲醚对U251人胶质瘤细胞迁移及侵袭能力的影响。利用基于荧光抑制的明胶的酶动力性实验检测蒿甲醚对U251人胶质瘤细胞的基质金属铁蛋白酶-2、9活性改变。结果在200μmol/L的蒿甲醚处理下,U251胶质瘤细胞的侵袭和转移能力明显降低,同时基质金属铁蛋白酶-2、9活性受到显著抑制。结论蒿甲醚抑制人U251胶质瘤细胞侵袭和转移能力可能与下调MMP-2和MMP-9的蛋白酶活性相关。

载姜黄素两亲性星状聚酯纳米粒的制备、表征及体外抗肿瘤研究

目的制备载姜黄素两亲性星状聚酯纳米粒(Cur-NPs),以解决其稳定性差、生物利用度低等问题。方法通过开环聚合反应和酯化反应合成两亲性星状聚酯(DPE-PCL-m PEG)作为纳米粒的载体材料,傅立叶变换显微红外光谱(FT-IR)、1H-NMR和凝胶渗透色谱(GPC)表征确定其结构和相对分子质量。溶剂挥发法制备Cur-NPs,考察其粒径、ξ电位、载药量、包封率。对Cur-NPs进行稳定性、体外释放、材料安全性、体外抗肿瘤和细胞摄取能力考察。结果成功合成DPE-PCLm PEG,制备的Cur-NPs平均粒径为(86.00±2.01)nm,ξ电位为(-9.40±0.09)m V,包封率为(95.51±1.23)%,载药量为(5.52±0.54)%。Cur-NPs具有良好的稳定性和缓释能力。细胞毒性、细胞摄取和体外抗肿瘤实验表明,空白纳米粒(blankNPs)具有良好的生物安全性;相对于姜黄素溶液,Cur-NPs对人胶质瘤U251细胞的生长抑制作用更明显,并且具有更强的入胞能力。结论Cur-NPs理化性质理想,能有效提高药物体外生物活性,为姜黄素的临床应用提供了新的解决方案。

酚红对无血清悬浮培养条件下肿瘤干细胞微球形成的影响

目的研究酚红对无血清悬浮培养条件下肿瘤干细胞微球形成的影响。方法将人胶质瘤细胞U251、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞SMMC-7721、人宫颈癌细胞Hela等细胞分为酚红组和无酚红组,分别悬浮培养于添加了生长因子的DMEM-F12培养基中,观察5 d后肿瘤干细胞微球的形成情况,并计算微球的形成率。结果 U215无酚红组细胞的微球形成率为3.38%,明显高于酚红组的(2.73%);MCF-7、SMMC-7721、Hela无酚红组细胞的微球形成率分别为6.81%、7.75%、7.18%,酚红组的细胞均无微球形成。结论无血清悬浮培养肿瘤干细胞应采用无酚红培养基。