与人脐静脉内皮细胞共培养的人脐动脉平滑肌细胞生物学特性研究

目的:通过共培养人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalvenousendothe-lialcells,HUVEC)与人脐动脉平滑肌细胞(humanumbilicalarterialsmoothmusclecells,HUASMC),初步探讨共培养的HUASMC的形态和增殖特性。方法:用共培养装置将体外同时培养在一个培养孔中的HUVEC和HUASMC分离。在倒置显微镜下观察单独培养和共培养HUASMC的生长状态和形态;采用免疫荧光法标记细胞,流式细胞仪测定荧光强度和细胞周期。结果:共培养的HUASMC由长梭状变肥大,处于静止期状态;单独培养的HUASMC仍保持长梭形。共培养的和单独培养的HUASMC处于细胞周期G2+S期和G0/G1期的百分率为:(85±4)%和(69±3)%;(11±2)%和(20±3)%。两者均有CyclinD的表达,但后者的表达显著高于前者。结论:单独培养的HUASMC无血清干预48h后仍保持长梭形,而共培养的HUASMC逐渐变肥大,进入静止期形态。此外,前者的增殖活性也显著高于后者。

AngⅡ对人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A、IGF-1 mRNA表达的影响

目的探讨血管紧张素II(AngII)对人脐动脉平滑肌细胞妊娠相关蛋白-A(PAPP-A)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响。方法(1)应用10-5mol/LAngII与人脐动脉平滑肌细胞及在Ox-LDL中刺激过的人脐动脉平滑肌细胞共同培养0、6、12、24、36、48h后收集细胞。(2)应用不同浓度的AngII(10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)与上述两种细胞共同培养24h后收集细胞。(3)应用RT-PCR方法检测细胞内PAPP-A、IGF-1mRNA的表达量。结果在浓度为10-5mol/L的AngII作用下,PAPP-A、IGF-1表达量在12h时开始升高(P<0.05),24h左右达高峰(P<0.01),而后表达量无进一步上升(P>0.05)。在不同浓度AngII刺激下,PAPP-A、IGF-1表达量随着浓度的升高而增加(P<0.05),10-5mol/L时达高峰(P<0.01),进一步加大浓度表达量无进一步升高(P>0.05)。Ox-LDL刺激过的细胞不同时间点以及不同AngII浓度下表达量明显高于同一时间及同一浓度时未刺激细胞的表达量(P<0.05)。结论在一定的作用时间和浓度范围内,AngII呈浓度和时间依赖性升高PAPP-A、IGF-1,从而影响动脉粥样硬化斑块的稳定性而导致急性冠脉综合症的形成,Ox-LDL可以促进这种作用。

人脐动脉平滑肌细胞体外培养的生物学特性及其永生株的初步建立

目的 建立人脐动脉血管平滑肌细胞 (HU ASMC)原代、传代培养的最佳方法 ,并初步建立其永生株。方法 采用人脐动脉血管中膜组织块贴壁法原代培养 ,比较不同培养基对原代及传代细胞增殖的影响 ;选择标记为新霉素 (G4 18)的带有端粒酶催化亚基 (h TERT)基因的重组质粒导入人脐动脉血管平滑肌细胞。结果 经 α-肌动蛋白鉴定 ,组织块贴壁法可获得高纯度的 HUASMC。原代培养的 HU ASMC1～ 4代细胞增殖能力强、生长旺盛 ,此后细胞的增殖能力逐渐降低 ,到第 10代几乎丧失增殖力。原代培养以 MCDB131为最佳培养基。 h TERT转染细胞克隆由长梭形变为短梭形 ,接触抑制消失 ,生长速度快 ,目前已传至 2 0代 ,增殖能力与第 1代无差别。转染前后平滑肌特异的α-肌动蛋白表达阳性。结论 h TERT转染的 HU ASMC保留了 HU ASMC的基本生物学特征 。

骨形态蛋白2 siRNA靶向抑制对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样分化及钙化的影响

目的研究骨形态蛋白2(BMP2)小分子干扰RNA(siRNA)靶向抑制对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)由白介素6(IL-6)诱导刺激的成骨样分化和细胞层钙化的影响。方法以体外培养的原代HUASMC作为实验对象。建立RNA干扰(RNAi)实验平台,通过FAM标记阴性对照siRNA优化转染条件;将BMP2基因的4条候选siRNA分别转染原代HUASMC,Real-TimePCR检测BMP2mRNA表达,筛选有效抑制siRNA。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组(转染有效抑制siRNA)和模拟转染组(对照组,不转染siRNA),两组均加入重组人IL-6(rhIL-6)(10ng/mL)刺激孵育,Real-TimePCR检测刺激孵育12、48h时点成骨样转化相关基因BMP2、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(OC)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组、对照组和空白组(不予rhIL-6刺激孵育,其余处理与对照组相同),siRNA转染组和对照组均加入rhIL-6(50ng/mL)刺激孵育,甲氧-酚酞络合酮法检测rhIL-6刺激孵育前及孵育后2、4d时点各组HUASMC细胞层钙盐含量,以总蛋白含量校正。结果成功建立合适的RNAi实验平台。10ng/mLrhIL-6刺激孵育后12h时点,siRNA转染组HUASMC BMP2和BAPmRNA表达明显低于对照组(P<0.05);刺激孵育后48h时点,siRNA转染组OC和OPNmRNA表达显著低于对照组(P<0.05)。加入50ng/mLrhIL-6刺激孵育前,siRNA转染组、对照组和空白组HUASMC细胞层钙盐含量比较差异无统计学意义(P>0.05);在siRNA转染组,50ng/mLrhIL-6刺激孵育后2、4d时点的细胞层钙盐含量均明显低于对照组(P<0.05),刺激孵育后2d时点的细胞层钙盐含量明显高于空白组(P<0.05)。结论体外培养的原代HUASMC能够实现BMP2基因的siRNA靶向抑制,能显著抑制由IL-6诱导刺激的成骨样分化和钙化。

剪切修复基因XPD抑制Ox-LDL诱导人脐动脉平滑肌细胞的增殖

目的:探讨剪切修复基因——着色性干皮病D组基因(XPD)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)促血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法:将重组质粒pEGFP-N2/XPD利用脂质体转染人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs),实验分为空白对照组、空载质粒pEGFP-N2组、重组质粒pEGFP-N2/XPD组、Ox-LDL组、Ox-LDL+pEGFP-N2组和Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组。用MTT法和Ed U法测定各组细胞的增殖率;流式细胞术检测各组细胞周期分布;利用Western blot法检测XPD、caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:Western blot实验结果发现,与空白对照组相比,pEGFP-N2/XPD组的XPD表达增加(P<0.05),表明转染成功;MTT和Ed U检测结果显示,pEGFP-N2/XPD组的细胞增殖率较空白对照组降低(P<0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组细胞增殖明显被抑制(P<0.05)。流式细胞术的检测结果显示,与空白对照组比较,pEGFP-N2/XPD组的S期细胞比例明显减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显增多(P<0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组的S期细胞比例减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显增多(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,pEGFP-N2/XPD组的cleaved caspase-3和Bax蛋白水平增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与Ox-LDL组比较,Ox-LDL+pEGFP-N2/XPD组的cleaved caspase-3和Bax蛋白水平增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论:XPD能抑制HUASMCs的增殖并促其凋亡,还能抑制Ox-LDL的促HUASMCs增殖作用,有可能成为抗动脉粥样硬化治疗的靶点。

高血压家族史人脐动脉平滑肌细胞离子泵及自分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素的变化

目的比较高血压家族史和无高血压家族史的人脐动脉平滑肌细胞Na+,K+-ATPase,Ca2+-ATPase活性和亚单位mRNA表达的差异,比较两者人脐动脉平滑肌细胞培养上清液中血管紧张素Ⅱ和内皮素浓度的差异,探讨高血压家族史人脐动脉平滑肌细胞离子泵变化及其自分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素的关系。方法以FH+的人脐动脉平滑肌细胞为研究对象,以无高血压家族史的人脐动脉平滑肌细胞为对照,分别用生化酶学方法和逆转录聚合酶链反应技术检测两组细胞膜Na+,K+-ATPase,Ca2+-ATPase活性和质膜Na+,K+-AT Pase 1-subunit mR-NA、Ca2+-ATPase(plasmamembrane Ca2+-ATPase,PMCA)亚型1(PMCA1)mRNA相对表达量;采用放射免疫法检测细胞培养上清液中血管紧张素Ⅱ和内皮素的含量。结果高血压家族史组人脐动脉平滑肌细胞膜Na+,K+-AT-Pase,Ca2+-ATPase活性均高于无高血压家族史组(P<0.05),但两组hUASMC质膜Na+,K+-ATP泵α1-subunit mRNA表达和PMCA1 mRNA表达与无高血压家族史组无差异。高血压家族史组人脐动脉平滑肌细胞培养上清液中血管紧张素Ⅱ、内皮素浓度与无高血压家族史组无差异。结论有高血压家族史者脐动脉平滑肌细胞膜Na+,K+-ATPase,Ca2+-ATPase活性增高并可能与其α1-Subunit、PMCA1 mRNA表达及自分泌血管紧张素Ⅱ和内皮素无明显关系。

紫杉醇可降解乙交酯/丙交酯共聚物材料对人脐动脉平滑肌细胞的作用(英文)

背景:冠脉支架术后较高的早期急性再闭塞及晚期再狭窄已成为研究热点,而生物降解材料携带对抑制再狭窄有效的药物——紫杉醇金属涂层支架有望解决这一问题。目的:评价含药物紫杉醇可降解支架材料乙交酯/丙交酯共聚物(PLLGA)对人脐动脉平滑肌细胞的作用。设计、时间及地点:对比观察的细胞学实验,于2003-07/2005-07在吉林大学公共卫生学院毒理实验室完成。材料:含紫杉醇可降解材料PLLGA由中国科学院长春应用化学研究所提供,左旋丙素酯与聚乙交酯的比例为9∶1。方法:选取人脐动脉原代平滑肌细胞培养,得到传代细胞,然后与含1,2,3g紫杉醇PLLGA可降解材料一起培养,以金属支架组和不含紫杉醇只含PLLGA组为对照。主要观察指标:分别在培养0,24,48,72h后在相差显微镜下观察不同材料对细胞生长情况的影响。结果:PLLGA对照组及金属支架组对平滑肌细胞生长无影响,含1,2,3g紫杉醇的降解材料组细胞生长状态不佳,至培养72h,与PLLGA对照组及金属支架组比较差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:PLLGA可作为抑制平滑肌细胞生长的血管内支架材料。

ERK参与调节人脐动脉平滑肌细胞内SMAD2/3蛋白及其mRNA的表达

目的了解ERK信号转导通路对人脐动脉平滑肌细胞(hUASMC)内SMAD2/3蛋白及其mRNA表达的影响。方法原代培养hUASMC,实验分四组:1)对照组,2)PDGF组,3)ERK阻断剂组,4)PDGF+ERK阻断剂组。分别用免疫细胞化学和RT-PCR法测hUASMC内磷酸化SMAD2/3蛋白和SMAD2/3mRNA的表达。结果1)与对照组相比,PDGF组hUASMC细胞内磷酸化SMAD2/3蛋白的表达增强(P<0·01);2)四组hUASMC细胞内SMAD2/3mRNA的表达无明显差异。结论在hUASMC中,ERK通路可促进SMAD2/3蛋白的磷酸化,但对SMAD2/3mRNA的表达没有影响。

人脐动脉平滑肌细胞原代培养方法的比较

目的比较人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)两种原代培养方法的优劣.方法分离脐动脉,剥离中膜,将其剪成小块,贴块法将小块直接接种于培养瓶中;酶解法①单用胶原酶Ⅰ(0.2%)分别消化5小时、8小时、24小时后接种于培养瓶,②分别用胶原酶Ⅰ(0.2%)消化3小时和胰蛋白酶(0.25%)消化2小时,接种于培养瓶.结果贴块法6天可以见到细胞从组织块周围游出,20～30天后可以进行传代;单用胶原酶Ⅰ消化24小时可以见到少量细胞,但由于细胞数少,无法进行传代;单用胶原酶Ⅰ消化5小时和8小时以及用胶原酶Ⅰ和胰蛋白酶联合消化均未见到贴壁生长的细胞.结论HUASMC原代培养贴块法较酶解法简便经济且成功率较高.

雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞细胞周期时相、p27蛋白表达及细胞增殖的影响

目的评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响。方法按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLGA组和M231培养基及平滑肌细胞生长添加剂(M231-SMGs)组作为对照。采用细胞免疫组织化学染色比较不同处理组HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平的差异,流式细胞技术评价各处理组对HUASMC细胞周期时相的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA NPs对HUASMC存活率的影响。结果10μg/L及以上浓度的RPM和50μg/L及以上浓度的RPM-PLGA NPs可明显抑制HUA-smc生长,并呈浓度依赖性。细胞计数绘制生长-时间曲线显示,100μg/L RPM和500μg/L RPM-PLGA NPs作用于HUASMC 24 h后细胞计数值明显低于M231-SMGs对照组;单纯PLGA NPs对细胞生长无明显影响;与PLGA组和M231-SMGs培养基对照组相比,RPM组和RPM-PLGA NPs组G_0/G_1期细胞比例明显增多,S期及G_2/M期细胞比例明显减少(P均<0.01),但两组间细胞周期时相比例差异无统计学意义(P>0.05)。细胞免疫组织化学染色结果显示,100μg/LRPM和500μg/L RPM-PLGA NPs组的HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但均较PLGA组和M231-SMGs培养基组明显增加(P<0.01)。结论RPM-PLGA NPs抑制体外培养的HUASMC生长效果与RPM相似,并可显著抑制体外培养HUASMC p27蛋白表达,阻抑其细胞周期进程于G_1/S期而抑制其细胞增殖。

两种fimA型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:探究两种fim A型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:采用组织块贴壁法培养人脐动脉平滑肌细胞。在厌氧条件下培养Ⅰfim A、Ⅳfim A型牙龈卟啉单胞菌,并与人脐动脉平滑肌细胞共同培养;在共培养2、8、24和48 h时,采用CCK-8法检测细胞生长状况。结果:Ⅰfim A型牙龈卟啉单胞菌刺激人脐动脉平滑肌细胞后8 h,促增殖作用明显,但是24和48 h平滑肌细胞增殖受到抑制(P<0.05);Ⅳfim A型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞没有明显促细胞增殖或细胞毒性作用。结论:Ⅰfim A型和Ⅳfim A型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞的作用存在差异,Ⅰfim A型牙龈卟啉单胞菌有明显的促平滑肌细胞增殖和细胞毒性作用。

包载雷帕霉素的乳酸-乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞bcl-2、p27^(kip1)表达及细胞凋亡的影响

目的观察雷帕霉素(RPM)及其乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)形成的载药纳米粒子(RPM-PLGA-NPs)在不同浓度和作用时间下对离体培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)细胞凋亡及调控基因bcl-2、p27kip1表达的影响。方法离体培养HUASMCs细胞并分别予不同浓度的RPM、RPM-PLGA-NPs作用12和24 h,设立生理盐水及空白PLGANPs对照组,免疫组织化学方法检测p27kip1与bcl-2表达阳性率和表达水平的差异,采用流式细胞仪、DNA片段琼脂糖凝胶电泳及末端原位标记法检测各组HUASMCs凋亡及细胞凋亡率,噻唑蓝比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA-NPs对HUASMCs存活率的影响。结果 RPM及RPM-PLGA-NPs组抑制HUASMCs增殖并呈剂量依赖关系,HUASMCs DNA电泳呈梯度条带阳性。流式细胞仪检测RPM 100 ng/ml和RPM-PLGA-NPs 500 ng/ml组的细胞凋亡百分率分别为(45.45±2.36)%和(35.04±5.64)%,显著高于对照组的(2.60±0.95)%(P<0.01)。末端原位标记法检测高剂量干预组的24 h凋亡指数显著高于12 h组(P<0.05,P<0.01)。RPM 100 ng/ml组和RPM-PLGA-NPs 500 ng/ml组的p27kip1蛋白阳性表达指数(PEI)分别为(0.178±0.077)%和(0.192±0.052)%,显著高于对照组的(0.101±0.035)%(P<0.05)。Spearman秩相关检验显示RPM及RPM-PLGA-NPs组凋亡指数值与p27kip1的PEI无相关性。RPM-PLGA-NPs 50 ng/ml及RPM 10 ng/ml组bcl-2的PEI分别为(6.44±1.31)%和(5.49±1.06)%,显著高于对照组的(1.84±0.47)%和(2.06±0.53)%(P<0.05)。结论 RPM及RPM-PLGA-NPs上调离体培养的HUASMCs的p27kip1表达、促进细胞凋亡,并无下调抗细胞凋亡基因bcl-2表达的作用。相当载药量的RPM-PLGA-NPs较RPM促进血管平滑肌细胞凋亡的作用更明显,但与p27kip1表达水平无线性相关。

小豆蔻明对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的:研究小豆蔻明(CAR)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的影响,探讨其可能作用机制。方法:采用高糖高胰岛素培养基模拟胰岛素抵抗(IR)诱导HUASMCs增殖,MTT法考察CAR对细胞增殖的作用,荧光实时定量PCR检测哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其结合蛋白Raptor,Rictor mRNA表达,Livak法计算mRNA表达量。结果:高糖高胰岛素培养基明显促进HUASMCs的增殖。低剂量CAR(1×10-8,1×10-7,1×10-6mol.L-1)对正常及模拟IR培养的HUASMCs增殖无影响,而高剂量CAR(1×10-5,1×10-4mol.L-1)抑制细胞增殖。模拟胰岛素抵抗状态下,PD98059和LY294002干预后,CAR(1×10-5mol.L-1)对磷脂酸(PA)诱导的增殖具有抑制作用,可降低mTOR mRNA的表达,同时减少Raptor,Rictorm RNA的含量。结论:CAR抑制细胞增殖机制与mTOR通路密切相关,可能直接或主要作用于mTOR。

人脐动脉平滑肌细胞培养及转染TFPI基因的实验研究

目的 探讨组织因子途径抑制因子（TFPI）基因对人脐动脉血管平滑肌细胞生长的影响,为TFPI基因用于血管再狭窄的治疗提供理论依据和实验基础.方法 从人脐动脉分离平滑肌细胞,通过免疫组化方法进行细胞鉴定;用不同剂量pIRES-TFPI基因（分别为1,2,3 μg/mL）转染血管平滑肌细胞,采用RT-PCR测定细胞内TFPI表达以优化基因转染条件;通过MTT法测定TFPI基因对人脐动脉血管平滑肌细胞生长的影响.结果 分离得到的血管平滑肌细胞的纯度高于90%;3个剂量的基因转染后,细胞内TFPI基因的表达水平无明显差异.采用2 μg/mL转染剂量时,TFPI基因转染后第5天,脐动脉血管平滑肌的生长受到明显抑制.结论 通过基因转染的方式将TFPI基因导入细胞对人脐动脉平滑肌的增殖具有抑制作用.

人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型的建立及鉴定

目的建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,以体外模拟人动脉壁,为动脉粥样硬化及炎症等疾病的发病机制和治疗研究打下基础。方法采用胶原酶灌注消化法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉内皮细胞(human umbilical artery endothelial cell,HUAEC),采用组织块贴块法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC)。用含有抗坏血酸(≥50μg/mL)的培养基孵育平滑肌细胞,使之合成并分泌胶原蛋白,形成内皮细胞的生长基质;然后将内皮细胞以饱和密度接种到平滑肌细胞上,使内皮细胞和平滑肌细胞直接接触并整合形成内皮细胞-平滑肌细胞共培养(EC-SMC co-culture)模型。分别用免疫荧光染色和Dil-Ac-LDL吞噬实验对共培养模型进行形态学和功能学的鉴定。结果形态学鉴定结果显示,两种细胞已成功整合,模拟出体内动脉壁的形态。Dil-Ac-LDL吞噬实验的结果显示共培养模型的内皮细胞中有荧光信号,并且共培养模型中内皮细胞Dil-Ac-LDL的内吞量显著高于单纯内皮细胞(EC monoculture or ECmonolayer),证明共培养模型中内皮细胞与平滑肌细胞已建立联系。结论本实验成功建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,可在体外更好地模拟人动脉壁形态和基本功能。

替米沙坦对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞表达ICAM-1和ET-1影响

目的:考察替米沙坦对体外培养的人脐带动脉血管平滑肌细胞(HUASMCs)表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和内皮素-1(ET-1)影响,为临床应用替米沙坦治疗高血压等疾病提供参考。方法:采用组织块贴壁法培养HUASMCs。取传3代的细胞进行α-actin肌动蛋白免疫组化染色法鉴定。取传3代细胞,分别加入1,10,100μg·mL^(-1 )3种质量浓度替米沙坦细胞培养液,于加药后48 h进行试验。分别采用RT-PCR法和ELISA法,检测替米沙坦对HUASMCs表达ICAM-1和ET-1 mR-NA和蛋白的影响。结果:组织块贴壁法成功培养出HUASMCs,传第3代细胞呈现明显的HUASMCs特性。低、中、高3种作用浓度的替米沙坦均可抑制HUASMCs表达ICAM-1和ET-1 mRNA(P<0.05),也均可抑制HUASMCs表达ICAM-1和ET-1蛋白(P<0.05),且抑制作用均呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:替米沙坦可使体外培养的HUASMCs表达ICAM-1和ET-1下调。

脉炎消口服液对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的：探讨脉炎消口服液在体外对人脐动脉平滑肌细胞（HUASMCs）增殖的影响及其作用机制。方法：体外组织贴块培养HUASMCs，并传2～3代，免疫组化法进行鉴定；采用MTT法观察不同体积分数脉炎消口服液（0．4％、4％、40％）对HUASMCs细胞增殖的抑制作用；采用RT-PCR法检测不同体积分数脉炎消口服液（0．4％、4％、40％）对HUASMCs细胞IL-6mRNA表达水平的影响。结果：组织块贴壁法原代培养HUASMCs，传3代后，阳性细胞率为90％；脉炎消口服液对HUASMCs的增殖具有明显的抑制作用，且体积分数在一定范围内（0．4％～40％）呈浓度依赖性。结论：脉炎消口服液抑制HUASMCs增殖的作用是通过下调细胞IL．6mRNA的表达水平而实现的。

替米沙坦对人脐带动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究替米沙坦对体外培养的人脐带动脉血管平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的抑制作用及其机制。方法组织块贴壁法原代培养HUASMCs,选传至3代的细胞实验;MTT比色法检测替米沙坦的同一浓度(97.16μmol·L^(-1))在不同作用时间(3~96 h)和不同浓度(0.97~971.59μmol·L^(-1))在同一作用时间(48 h)对HUASMCs增殖的抑制作用;RT-PCR法测定3种浓度的替米沙坦(1.94、19.43、194.32μmol·L^(-1))对HUASMCs表达血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的影响;ELISA法测定上述3种浓度的替米沙坦对HUASMCs分泌VEGF水平的影响。结果替米沙坦的作用时间在3~48 h范围内,对HUASMCs增殖的抑制作用呈时间依赖性(P<0.05),48 h抑制作用最强,抑制率为(29.12±2.89)%,72 h、96 h与48 h比较,抑制作用无统计学意义(P>0.05)。替米沙坦的作用浓度在0.97~194.32μmol·L^(-1)范围内,对HUASMCs增殖的抑制作用呈浓度依赖性(P<0.05),作用浓度为194.32μmol·L^(-1)时抑制作用最强,抑制率为(41.46±3.36)%,388.64μmol·L^(-1)、582.95μmol·L^(-1)、971.59μmol·L^(-1)与194.32μmol·L^(-1)比较,抑制作用无统计学意义(P>0.05);高(194.32μmol·L^(-1))、中(19.43μmol·L^(-1))、低(1.94μmol·L^(-1))3种浓度的替米沙坦对HUASMCs表达VEGF的mRNA和因子均有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论替米沙坦可抑制体外培养的HUASMCs增殖,使其表达的VEGF下调。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对共培养体系中人脐动脉平滑肌细胞增殖及迁移能力的影响

目的研究Ⅰ、ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS)对共培养条件下人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC)增殖和迁移能力的影响,探讨牙周炎与动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)相关的生物学基础和机制。方法厌氧培养Ⅰ、ⅣfimA型Pg,分别提取、纯化并鉴定两型Pg-LPS;体外原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)和HUASMC,并采用鼠尾Ⅰ型胶原建立HUVEC-HUASMC共培养细胞模型;实验分为T1组(质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的ⅠfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞)和T2组(质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L的ⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞),以及阴性对照组(不加LPS组);细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测HUASMC的增殖能力,Transwell迁移小室观察HUASMC的迁移能力。比较各组不同质量浓度Pg-LPS刺激共培养细胞2、8、24及48 h后,HUASMC的增殖及迁移能力的变化。结果共培养细胞在Ⅰ、ⅣfimA型Pg-LPS的作用下,在24及48 h时,两型Pg-LPS的各质量浓度组中,HUASMC的A值均较阴性对照组显著上调(P<0.05);在48 h时5.0、10.0 mg/LⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞后,HUASMC的A值(分别为1.386±0.044、1.455±0.058)均显著高于相同浓度ⅠfimA型Pg-LPS刺激共培养中HUASMC的A值(分别为1.168±0.064、1.204±0.088)(P<0.05);此外,在48 h时,5.0、10.0 mg/LⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞后,HUASMC的A值均显著高于0.5、1.0 mg/LⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养中HUASMC的A值(分别为1.170±0.082、1.239±0.089)(P<0.05)。HUASMC的迁移结果显示,在8、24及48 h时,Ⅰ、ⅣfimA型Pg-LPS各质量浓度组中,HUASMC的迁移数量均较同组内2 h时相同Pg-LPS质量浓度下HUASMC迁移数量显著上调(P<0.05);在48 h时,除10.0 mg/LⅣfimA型Pg-LPS外,其余各Pg-LPS质量浓度组HUASMC的迁移数量均较同组内24 h时相同Pg-LPS质量浓度下HUASMC迁移数量显著增加(P<0.05);且在48 h时,2.0 mg/LⅣfimA型Pg-LPS刺激共培养细胞后,HUASMC的迁移数量(204.00±20.98)较相同浓度下ⅠfimA型Pg-LPS刺激后HUASMC迁移数量(141.89±18.28)显著上调(P<0.05);在同一观察时点,同型Pg-LPS浓度越高,HUASMC的迁移数量越多(P<0.05)。结论Ⅰ、ⅣfimA型Pg-LPS均能促使共培养细胞中HUASMC的增殖和迁移能力增强;Pg-LPS的毒力与其fimA基因型相关,ⅣfimA型Pg-LPS较ⅠfimA型Pg-LPS刺激作用更显著,更易导致HUASMC功能紊乱,从而为重度牙周炎更易促进As的进展提供依据。