人脐血造血干细胞体外诱导朗格汉斯细胞的研究

目的采用人脐血CD34+细胞,经不同细胞因子组合诱导方案体外诱导培养朗格汉斯细胞(CD1a+细胞)并观察其产量及相关表型特点。方法联合应用人淋巴细胞分离试剂和CD34+磁珠分离和筛选人脐血CD34+细胞,以5种不同的细胞因子组合诱导方案,对分选出的CD34+细胞进行体外诱导培养,观察其生长形态变化、集落的形成,并对诱导培养第12天的CD34+细胞进行CD1a、HLA-DR等LC表型分子,以及CD40、CD80等共刺激分子表型检测。筛选出最佳的朗格汉斯细胞(Langerhans cells,LC)体外诱导方案。结果流式细胞术分析5种细胞因子方案体外诱导培养LC的结果显示,方案IV、V诱导培养12 d的CD1a+细胞百分率和CD1a+细胞数量均明显多于方案Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;方案Ⅳ诱导培养12 d的HLA-DR+细胞百分率显著高于方案Ⅴ。结论利用细胞因子组合方案IV体外诱导磁珠分选的CD34+细胞,可以获得高产量的LC细胞,为研究其功能和发生机制提供足够的细胞。

卵黄囊移植人脐血CD34^＋细胞构建人源化血液系统小鼠模型

背景:与较为成功的羊等大型动物宫内移植方法相比,利用小鼠等小型动物宫内移植异种造血干细胞仍面临困境,在外周血内检测到的异种血液细胞重建率仍在1%以下。目的:观察小鼠卵黄囊移植人脐血来源CD34+造血干细胞后的异种造血重建效率,并与腹腔移植的效果进行比较。设计、时间及地点:细胞学体内移植实验,于2007-10在北京大学干细胞与再生生物学实验室完成。材料:健康新生儿脐血取自北京海淀区妇幼保健院。ICR小鼠由北京大学医学部实验动物中心提供,孕8.5d鼠8只,孕12.5d鼠9只。藻红蛋白标记的抗人CD45单克隆抗体与流式细胞仪均为BD公司产品。方法:采用Ficol1法梯度离心获得人脐血单个核细胞,经磁珠分选系统纯化获得CD34+细胞。将孕8.5d鼠麻醉后,打开腹腔并暴露子宫,显微镜下抽取5~10μL脐血CD34+细胞(5×104个),缓慢注入胎鼠的卵黄囊中。相同操作条件下将等量脐血CD34+细胞注射到孕12.5d胎鼠的腹腔中。快速抽针,将孕鼠子宫归位并缝合腹腔,继续妊娠,等待分娩。待小鼠出生后3个月,经尾静脉取血,在避光状态下加入藻红蛋白标记的抗人CD45单克隆荧光抗体,流式细胞仪检测血细胞表面标记CD45的表达,通过其阳性率判断人血液细胞在小鼠体内的重建效果。主要观察指标:不同移植方式对小鼠造血重建的影响。结果:CD34+细胞通过卵黄囊移植方式共获得健康出生小鼠52只,3个月后86.5%(45/52)小鼠CD45呈阳性表达,嵌合率高达4.34%。通过腹腔移植方式共获得健康出生小鼠48只,3个月后81.3%(39/48)小鼠CD45呈阳性表达,明显低于卵黄囊移植方式(t=2.363,P<0.05)。结论:早期卵黄囊移植可以获得人造血干细胞在小鼠体内的长期重建,效果优于腹腔移植,同时也证明了通过胎鼠卵黄囊移植人脐血造血干细胞取得人源化造血系统小鼠模型的可行性。

我校科学家在干细胞研究领域获得重要进展

最近，国际著名杂志《美国科学院院报》（PNAS）发表了上海交通大学医学遗传研究所黄淑帧教授课题组的“应用基因表达谱分析人脐血造血干细胞在山羊体内多脏器的附植和分化”的研究论文，表明我国科学家在干细胞研究领域获得新的重要进展。

可溶性CD40L联合其他造血细胞生长因子体外扩增人脐血CD34^+细胞

目的研究可溶性CD40L(sCD40L)对人脐血CD34+细胞体外扩增和集落形成的影响。方法用磁珠阳性分离纯化法分离脐血CD34+细胞;用造血干细胞体外悬浮培养、集落形成实验以及流式细胞仪检测等方法,观察应用sCD40L对脐血造血干细胞扩增、CD34+细胞增殖及造血集落形成的影响。结果sCD40L能显著增强干细胞因子(SCF)、白细胞介素3(IL-3)、促红细胞生成素(EPO)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对脐血干细胞总数和CD34+细胞的扩增作用,并能促进造血集落,尤其是粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的形成。sCD40L联合其他造血细胞生长因子对脐血CD34+细胞的扩增作用在培养的第7d最显著,当sCD40L浓度为40μg/L时,CD34+细胞的扩增倍数达8.23±1.26。结论sCD40L与SCF、IL-3、EPO、GM-CSF联合应用,对人脐血造血干细胞的体外扩增更为有效。