川芎嗪对人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)氯化钴诱导缺氧后纤溶功能的影响

目的:建立人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)缺氧细胞模型,探讨川芎嗪在缺氧条件下对血管内皮细胞纤溶功能的影响。方法:细胞分为对照组、缺氧组和川芎嗪(TMP)干预组,利用氯化钴(1.6mmol/L)模拟Eahy926细胞缺氧环境,建立缺氧模型,TMP干预组分别用0.08和0.16g/L的TMP干预。Hoechst法、CCK-8法检测各组细胞活力,RT-PCR观察各组细胞组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibit ortype-1,PAI-1)mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测各组细胞培养上清液中t-PA、u-PA、PAI-1含量。结果:与对照组相比,缺氧组及TMP干预组均出现细胞活力下降(P<0.01),但与缺氧组相比,TMP干预组细胞活力上升(P<0.01),且高浓度组较低浓度组上升明显(P<0.01);RT-PCR和ELISA结果显示:与对照组相比,缺氧组t-PAmRNA表达量降低(P<0.01),细胞培养上清液t-PA含量减少(P<0.01);与缺氧组比,高低浓度TMP处理组t-PAmRNA表达量及细胞培养上清液t-PA含量均增高,具有统计学差异(P<0.01);而高浓度较低浓度TMP干预组t-PAmRNA表达量升高(P<0.05),细胞培养上清液t-PA含量增加(P<0.01)。结论:川芎嗪能够浓度依赖性减轻Eahy926细胞的缺氧损伤,并通过调节其t-PAmRNA表达及上清液t-PA的分泌,影响内皮细胞的纤溶功能。

明胶对人脐静脉内皮细胞株细胞相容性影响的研究

目的探讨明胶对人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)细胞生长的影响。方法建立后干扰(模型1)及预干扰(模型2)的细胞模型,采用MTT法和倒置光镜动态观察细胞生长状态及观察不同分子量明胶(40000道尔顿、60000道尔顿、70000道尔顿)、不同质量分数(5%、10%、15%)对HUVECs细胞相容性的影响。实验分为10组:对照组,明胶Aa、Ab、Ac组(明胶分子量为40000道尔顿,明胶溶液浓度分别为5%、10%、15%),明胶Ba、Bb、Bc组(明胶分子量为60000道尔顿,明胶溶液浓度分别为5%、10%、15%),明胶Ca、Cb、Cc组(明胶分子量为70000道尔顿,明胶溶液浓度分别为5%、10%、15%)。结果 (1)倒置光镜动态观察显示:模型1:对照组HUVECs呈正常生长状态,3个时间段(24、48、72h)细胞形态及密度无明显变化,而与对照组比较,明胶各实验组细胞大量死亡,仅少数细胞贴壁存活;模型2:对照组HUVECs呈正常生长状态,与对照组比较,3个时间段(24、48、72h)内明胶各实验组细胞生长状态好,无明显差异,并于72h时出现细胞密度明显增加的现象。(2)MTT检测:模型1:与对照组比较,明胶各实验组3个时间段(24、48、72h)细胞增殖有明显降低,至72h,HUVECs增殖无明显增加;模型2:与对照组比较,随着观察时间增加,3个时间段(24、48、72h)明胶各实验组细胞增殖逐渐增加,其中48h明胶Aa组、72h明胶Cc组两组与对照组HUVECs细胞增殖比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在本研究范围内,采用预干扰模型(模型2)对较高分子量明胶进行细胞实验较适合;较高分子量明胶可能对微血管在一定时间内的修复与重建有促进作用。

苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC生长的影响

目的:通过观察苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响,探讨苦碟子治疗糖尿病周围神经病变的机制。方法:以不同浓度(0μl/ml、3.125μl/ml、6.25μl/ml、12.5μl/ml、25μl/ml、50μl/ml、100μl/ml)的苦碟子处理HUVEC细胞,分别于24小时、48小时后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞生长情况。并用统计软件SPSS16.0对结果进行分析。结果:苦碟子对HUVEC细胞增殖有促进作用,且随着药物浓度的增加其促进作用增加,与对照组(0μl/ml)比较,差异有显著性(p<0.05)。结论:促进HUVEC细胞增殖可能是苦碟子治疗糖尿病周围神经病变有效的原因之一。

灯盏花素对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC生长的影响

目的通过观察灯盏花素对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响,探讨灯盏花素治疗糖尿病周围神经病变的机制。方法以不同浓度(0μg/ml、3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)的灯盏花素处理HUVEC细胞,分别于24小时、48小时后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞生长情况。并用统计软件SPSS16.0对结果进行分析。结果灯盏花素对HUVEC细胞增殖有促进作用,且随着药物浓度的增加其促进作用增加,与对照组(0μg/ml)比较,差异有显著性(P<0.05)。结论促进HUVEC细胞增殖可能是灯盏花素治疗糖尿病周围神经病变有效的机制之一。

土贝母苷甲对人脐静脉内皮细胞凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响

研究了土贝母苷甲(下称苷甲)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响。包括:MTT法检测苷甲对HUVECs生长的影响;荧光显微镜观察苷甲作用下HUVECs的形态变化;流式细胞术分析苷甲对HUVECs周期及凋亡的影响;聚碳酸酯膜小室(Transwell model)趋化运动模型检测苷甲对HUVECs运动能力的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane,CAM)试验检测苷甲对人鼻咽癌细胞(human nasopharyngeal carcinomaCNE-2Zcells,CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检测苷甲对BALB/c裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)表达的影响。苷甲明显抑制HUVECs的生长,其抑制效果与剂量和作用时间相关,苷甲作用HUVECs24、48、72h其IC50值分别为24.2、21.4、17.9μmol/L;苷甲作用下HUVECs发生周期阻滞,呈现典型的凋亡特征,20.0μmol/L苷甲作用12、24、36hHUVECs的凋亡率分别为11.4%、20.8%、25.3%;20.0μmol/L苷甲处理HUVECs24h,对细胞迁移抑制率为58.4%;苷甲抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,并与剂量相关;苷甲应用后瘤组织MVD明显减少,VEGF、bFGF、PDGF表达下调。苷甲有明显的抑制血管生成活性,其抑制血管生成作用与诱导血管内皮细胞凋亡,抑制其运动能力,下调VEGF、bFGF和PDGF的表达有关。

淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用(英文)

探讨淫羊藿苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导损伤人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的影响。培养内皮细胞,淫羊藿苷作用24h后,采用AngⅡ诱导制备内皮细胞损伤模型,测定细胞存活率(MTT法)、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、NO值、清除超氧阴离子自由基(O2g-)和羟自由基(·OH)的能力,测定胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、T-NOS﹑iNOS以及cNOS的含量。与AngⅡ单独处理组相比,淫羊藿苷能明显提高细胞存活率,提高SOD、T-NOS和cNOS活力,提高NO含量,增强清除O2g-和·OH的能力,降低LDH和iNOS的量。结果表明淫羊藿苷对AngⅡ损伤的内皮细胞有一定的保护作用。

蓝莓花青素对由H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的通过建立人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)氧化应激损伤细胞模型,探讨蓝莓花青素是否能够对H_2O_2引起的细胞损伤具有保护作用。方法采用过氧化氢(H_2O_2)创建ECV304氧化应激损伤细胞模型,实验分为正常对照组、H_2O_2组、蓝莓花青素低、中、高剂药物组,药物组中加入蓝莓花青素培养2h后,再加入H_2O_2继续培养6h,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期变化情况及细胞凋亡率。结果细胞活力与H_2O_2浓度及其作用的时间呈相关性下降趋势,在一定浓度范围内蓝莓花青素对细胞具有保护作用。结论蓝莓花青素对由H_2O_2引起的氧化应激损伤具有一定保护作用。

羟基红花黄色素A上调低氧状态下血管内皮细胞中缺氧诱导因子-1α的表达

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是从菊科植物红花中提取的查尔酮类化合物。本实验观察HSYA对低氧状态(1%O2)下人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)增殖的促进作用及其调节Eahy 926细胞中林希氏基因(von Hippel-Lindau gene,VHL),抑癌基因p53(tumor suppressor gene p53,p53)和降解缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)的作用。采用MTT法测定低氧状态下HSYA(100、10和1μmol.L-1)对Eahy926细胞增殖率的影响。免疫组织化学方法测定VHL与p53蛋白表达数量和定位。RT-PCR方法检测细胞中VHL、p53和HIF-1α的转录水平。Western blotting方法检测VHL、p53和HIF-1α的蛋白表达。与低氧模型对照组相比,HSYA(100μmol.L-1)促使细胞增殖率升高,HIF-1α转录和蛋白表达水平显著增强,呈时间依赖性。给药8 h后,VHL与p53的蛋白表达和转录水平均明显降低。HSYA诱导HIF-1α表达增加并提高低氧状态下细胞增殖率的作用,可能通过抑制VHL和p53两种HIF-1α的降解调节因子实现。

人真核表达质粒载体pcDNA3/HA-moesin的构建及其在内皮细胞中的表达

目的:构建人膜突蛋白(moesin)的真核表达质粒pcDNA3/HA-moesin,并检测其在内皮细胞中的表达。方法:采用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)中克隆得到moesin cDNA全长序列,经双酶切后连接到真核表达载体pcDNA/HA中,挑选出的阳性克隆经双酶切和测序鉴定后,经脂质体转染法转入HUVECs中,采用Realtime PCR及Western blot等方法检测目的基因mRNA及蛋白的表达。结果:pcDNA3/HA-moesin质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因moesin的序列完全正确,真核表达质粒构建成功。Realtime PCR检测显示,转染pcDNA3/HA-moesin组的moesin mRNA表达水平明显高于未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组,后2组间无明显差异。Western blot结果显示转染pcDNA3/HA-moesin组有HA-moesin蛋白表达,而未转染组和转染pcDNA3/HA空载体组未检测到HA-moesin表达。结论:成功构建pcDNA3/HA-moesin真核表达载体,在体外转染HUVECs后可使moesin mRNA表达增加,并成功表达HA-moesin,为进一步鉴定内皮细胞中晚期糖基化终产物(AGEs)引起的moesin的磷酸化位点奠定了实验基础。

三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞钙离子浓度及肌浆网Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

目的:探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响。方法:将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组,对各组进行相应处理后,分别检测各组细胞内钙离子浓度[Ca2+]i、肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力的变化。结果:模型组、tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显低于正常组,[Ca2+]i明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显高于H/R组,[Ca2+]i明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显高于维拉帕米组及PDTC组,[Ca2+]i明显低于维拉帕米组及PDTC组。结论:H/R可激活ECV304,使细胞肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显降低,[Ca2+]i明显升高;tPNS能有效改善肌浆网Ca2+-ATP酶活性,减轻细胞内钙超载,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。

三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞NF-κB及ICAM-1表达的影响

目的探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响。方法将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组。对各组进行相应处理后,分别检测各组ECV304超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量、核转录因子-B(NF-κB)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果模型组,tPNS高,中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组细胞氧自由基清除功能明显低于正常组,NF-κB及ICAM-1表达明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于H/R组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于维拉帕米组及PDTC组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于维拉帕米组及PDTC组同期。结论 H/R可激活ECV304,使细胞氧自由基清除功能明显降低,NF-κB及ICAM-1的表达明显升高;tPNS能有效改善细胞氧自由基清除功能,降低NF-κB、ICAM-1活性,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。

氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞及促血管平滑肌细胞增殖的机制

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤及损伤条件培养基作用于血管平滑肌细胞(VSMC)的影响。方法采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞内Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、凋亡率及VSMC细胞周期各时相DNA含量、增殖指数。结果 ox-LDL致ECV304细胞活力降低,细胞内Ca2+浓度升高,MMP下降,细胞凋亡率明显增高;损伤条件培养基有明显促进VSMC增殖,与正常对照组比较有显著差异(P<0.01,P<0.001)。结论 ox-LDL导致血管内皮细胞损伤,引起ECV304细胞内Ca2+超载,致线粒体功能障碍,促进细胞凋亡;促进VSMC增殖。

氧化低密度脂蛋白对血管内皮细胞黏附分子表达的影响

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(ECV304)细胞黏附分子(CAMs)表达的影响,探讨ox-LDL损伤血管内皮细胞(VEC)的作用及机制。方法采用人类单核细胞系(U937)-ECV304联合培养的方法,ox-LDL为诱导损伤因素,用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1,CD54)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1,CD106)、E-选择素(CD62E)和P-选择素(CD62P)的表达率。结果 ox-LDL促进CAMs表达,与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01)。结论 ox-LDL诱导促进内皮细胞表面黏附分子表达,导致VEC损伤,参与动脉硬化(AS)的发生、发展。

黄芩苷对高糖培养条件下内皮细胞粘附分子水平的影响

目的:研究黄芩苷对高糖条件下人脐静脉血管内皮细胞株(CRL1730)细胞粘附分子水平的影响。方法:CRL1730细胞常规培养传代,在不同糖浓度培养基(5.5mmol/L、30mmol/L)、黄芩苷(50mg/L、100mg/L、200mg/L)条件下培养48h。酶联免疫吸附法测sICAM-1、sVCAM-1。结果:黄芩苷能抑制高糖导致的内皮细胞粘附分子增高。结论:黄芩苷对高糖状态下CRL1730细胞sICAM-1、sVCAM-1的增高具有抑制作用,其原因可能与其抑制炎症反应等因素有关。

三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞损伤保护效果研究

目的探讨发生缺氧再给氧损伤(H/R)对人脐静脉内皮细胞株(ECV304)的功能影响并探讨三七总皂苷抗血管内皮细胞H/R损伤的作用效果和作用机制。方法体外培养的ECV304,将之分为7个研究组,分别为代号A-G的对照组、H/R组、PDTC组、维拉帕米组、不同浓度(0.781mg/L,1.563mg/L,3.125mg/L)的三七总皂苷组;培养1h后通过观察细胞内Ca2+浓度,一氧化氮(NO)和前列环素(PGI2)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,细胞间黏附分子ICAM-1的表达、核因子kB(NF-kB)的活性等,来确定H/R对ECV304的离子转运功能、细胞分泌功能、氧自由基清除功能、黏附功能及细胞活力的影响,并通过三七总皂苷组与PDTC组、维拉帕米组进行比较,观察三七总皂苷抗血管内皮细胞H/R损伤的作用效果和作用机制。结果 H/R可激活ECV304,使细胞氧自由基清除功能明显降低,NF-κB及ICAM-1的表达明显升高,细胞肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显降低,[Ca2+]i明显升高;tPNS能有效改善细胞氧自由基清除功能,降低NF-kB、ICAM-1活性,改善肌浆网Ca2+-ATP酶活性,减轻细胞内钙超载,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。结论三七总皂苷能有效降低NF-κB活性及ICAM-1表达,减轻细胞内钙超载,减轻血管内皮细胞缺氧再给氧损伤;高浓度三七总皂苷与钙拮抗剂维拉帕米、抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂相比作用较强,效果更好。

养心汤含药血清对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响

目的:观察养心汤含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型Smad4 mRNA表达的影响,从分子生物学水平探讨其可能的作用机制。方法:采用H2O2体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤的方法,建立人脐静脉内皮细胞损伤模型。实验分为空白组、模型组、养心汤含药血清组,应用Affymetrix人基因组U133+2.0芯片筛选出Smad4基因,采用实时定量PCR的方法观察养心汤含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型Smad4 mRNA表达的影响。结果:养心汤的含药血清可以下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA表达。结论:养心汤下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA的表达可能是其保护内皮细胞损伤,防治冠心病不稳定型心绞痛的主要机制之一。

一种大容量细胞灌流液中外泌体的提取方法及鉴定

目的:建立一种从大容量细胞灌流液中提取外泌体的方法,并进行外泌体的鉴定。方法:人脐静脉内皮细胞株(EA.HY926)是人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌细胞株A549杂交成的永生化细胞株,因其具有血管内皮细胞的特性,广泛用于内皮细胞相关研究。本研究采用含10%胎牛血清的M199培养基培养,利用Flexcell STR-4000平行板流室系统对EA.HY926施以振荡剪切应力。收集流体剪切应力处理后的细胞灌流液,去除细胞碎片后冻成干粉,脱盐、提取纯化外泌体。电镜观察外泌体形态、纳米粒径电位分析仪检测外泌体大小、PKH26染色检测外泌体膜性结构、BCA蛋白定量法检测外泌体的蛋白浓度、Western blot检测外泌体特异性蛋白CD9和CD81的表达,荧光定量RT-PCR检测内皮细胞相关基因的表达。结果:该方法提取的外泌体,大小均一,结构完整,呈典型囊泡样结构;粒径集中在30~150 nm,多数粒径为97.63 nm;表达外泌体特异性蛋白CD9和CD81;PKH26染色阳性,并可被细胞摄取;EA.HY926分泌的外泌体表达内皮细胞相关的CD31、vWF等mRNA,以及miR-126、miR-21、miR-155等microRNA分子。结论:本方法能够有效从大容量细胞灌流液中提取到结构完整的、高浓度、高质量的外泌体,为开展以流体力学干预细胞为基础的外泌体相关研究提供技术方法。

嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66CGA47酌抑制脓毒症血清所致血管内皮细胞高通透性的研究

目的观察嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66（Chromfungin，CHR）对脓毒症患者血清引起的血管内皮细胞高通透性的影响。方法分别用CHR、脓毒性休克患者血清、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作用于人脐静脉内皮细胞株EA．hy926，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法、Transwell小室法测定EA．hy926的活性[吸光度（A）值]和通透性（A值），免疫荧光法镜下观察细胞纤维肌动蛋白（F—actin）的形态和分布。结果与空白对照组比较，1、10、100nmol／LCHR对EA．hy926细胞活性无明显影响（A值：1．219±0．253、1．179±0．065、1．179±0．062比1．306±0．162，均P〉0．05），而1000nmol/L CHR对EA．hy926细胞活性有显著抑制作用（A值：1．049±0．256比1．306±0．162，f=-2．390，P=0．031）。与空白对照组比较，1、10、100nmol/L CHR作用下EA．hy926细胞通透性明显降低（A值：1．619±0．324、1．496±0．356、1．132±0．280比2．315±0．440，P〈0．05或P〈0．01）；脓毒性休克患者血清或TNF—α单独作用下EA．hy926细胞通透性明显升高（血清组A值：1．204±0．248比0．277±0．017，P〈0．01；TNF-α组A值：2．485±0．113比1．602±0．679，P〈0．05）；1、10、100nmol／L的CHR既可明显降低脓毒性休克患者血清引起的高通透性（A值：0．299±0．065、0．224±0．028、0．131±0．015比1．204±0．248，均P〈0．01），也可明显降低TNF—α引起的高通透性（A值：1．995±0．394、1．920±0．096、1．744±0．475比2．485±0．113，P〈0．05或P〈0．01），且在1-100nmol／L范围内，CHR的上述作用呈现一定的剂量依赖性。与空白对照组比较，脓毒性休克患者血清或TNF-α单独作用下，F—actin细胞骨架发生明显重组和再分布，应力纤维形成增多，而CHR可以抑制上述变化的发生。结论CHR可以抑制脓毒性休克患者血清引起的血管内皮细胞的高通透性，且呈现一定的剂量依赖性，其机制与抑制TNF—α的作用有关。

中药复方血栓通可抑制血管生成

目的:探讨复方血栓通对血管生成的作用。方法:鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)法检测复方血栓通对血管生成的影响;采用MTS比色法观察不同浓度的复方血栓通对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的ECV-304细胞增殖的影响;Transwell小室检测不同浓度的复方血栓通对ECV-304细胞移行的影响;Matrigel实验检测不同浓度的复方血栓通对ECV-304细胞内皮管腔形成的影响。结果:复方血栓通中、低浓度组能够抑制鸡胚CAM血管生成;MTS比色法显示,1.5625～100g/L复方血栓通对VEGF诱导的ECV-304细胞增殖具有抑制作用,而更低和更高浓度的复方血栓通则无抑制作用;Transwell小室实验显示,复方血栓通为0,3.125,6.25和12.5g/L时ECV-304细胞移行数分别为219±17,183±14,135±13和19±9;Matrigel实验显示,复方血栓通为0,0.390625,0.78125和1.5625g/L时ECV-304细胞内皮管腔形成数分别为26.3±1.2,18.7±1.5,14.7±0.6和2.7±0.6。结论:复方血栓通具有明显抑制血管生成的作用。

高尿酸对血管内皮细胞增殖凋亡作用及其机制研究

目的研究尿酸对人脐静脉内皮细胞株(ECV304)增殖凋亡的影响及可能的机制分析。方法(1)将人脐静脉内皮细胞株(ECV304)分为3组:溶剂对照组和低、高2个剂量实验组。2个剂量实验组加入10,20 mg·d L^-1的尿酸,溶剂对照组不作任何处理。(2)将ECV304分为4组:溶剂对照组、低剂量尿酸实验组(10 mg·d L^-1)、p38抑制剂(SB)组(SB,20μmol·L^-1)和联合组(尿酸10 mg·d L^-1+p38抑制剂20μmol·L^-1)。用CCK8检测给予尿酸后ECV304细胞增殖水平;用蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化-p38 MAPK(p-p38 MAPK)的蛋白水平。结果(1)在24 h后,溶剂对照组和低、高2个剂量实验组的细胞增殖率分别为(100.00±4.00)%,(80.52±3.11)%和(60.49±3.57)%;这3组的Caspase-3蛋白表达分别为0.99±0.11,1.26±0.15和1.59±0.13;这3组的Cleaved caspase-3的蛋白表达分别为0.98±0.14,1.70±0.10和2.19±0.11;这3组的p-p38 MAPK蛋白表达量为0.97±0.15,1.81±0.06和2.12±0.10;这3组的p38 MAPK蛋白表达量为1.30±0.11,1.00±0.10和0.88±0.04;上述指标:低、高2个剂量实验组与溶剂对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)在24 h后,溶剂对照组、低剂量尿酸实验组、p38抑制剂组和联合组的细胞增殖率分别为(100.00±7.21)%,(79.61±3.34)%,(109.30±1.18)%和(90.69±1.89)%;这4组的Caspase-3的蛋白表达分别为1.24±0.04,1.63±0.06,1.04±0.04和1.29±0.03;这4组的Cleaved caspase-3的蛋白表达分别为0.93±0.05,1.49±0.12,0.73±0.05和0.97±0.05;这4组的p-p38蛋白的表达分别为1.16±0.07,1.56±0.07,0.89±0.06和1.02±0.05;这4组的p38蛋白的表达分别为1.27±0.12,0.98±0.02,0.88±0.03和0.69±0.05;3个处理组与溶剂对照组相比,Caspas-3表达差异均有统计学意义(均P<0.01);p38抑制剂组和联合组与溶剂对照组相比,Cleaved caspase-3和p38MAPK的表达差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);且与时间呈正相关。结论高尿酸能够抑制血管内皮细胞ECV304的增殖并诱导凋亡,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关。