人脐静脉血衍生的富血小板血浆增强脂肪间充质干细胞改善大鼠卵巢自体移植效果的作用

目的 研究人脐静脉血衍生的富血小板血浆(ucPRP)对脂肪间充质干细胞改善大鼠卵巢自体移植效果作用的影响。方法 8周龄SD大鼠分为3组:自体移植组、自体移植+ADSCs组(ADSC组)及自体移植+ADSCs+ucPRP组(ADSC+ucPRP组),移植术后4周,H-E染色卵泡分类计数,免疫组化检测新生血管数量,Masson染色检测其纤维化面积,同时检测大鼠性激素水平。结果 ADSCs+ucPRP组原始卵泡和生长卵泡数量均高于ADSC组;ADSC+ucPRP组大鼠血清激素水平较ADSC组理想。ADSC+ucPRP组移植卵巢组织新生血管数量高于ADSC组,卵巢纤维化程度低于ADSC组(P<0.05)。结论 ucPRP增强ADSCs改善大鼠卵巢自体移植效果的作用,从而提高移植效率。

富血小板血浆及脐带间充质干细胞修复软骨损伤

背景:研究者直接将富血小板血浆作为支架材料与骨髓基质干细胞、软骨细胞等复合后体外培养发现软骨细胞在富血小板血浆三维支架呈现增殖生长,骨髓基质干细胞在增殖的同时有向软骨细胞分化的倾向。目的:观察富血小板血浆和人脐带间充质干细胞对受损软骨修复的影响。方法:正常健康新西兰大白兔40只,制备兔软骨损伤模型。2次离心法制备富血小板血浆,制备3代人脐带间充质干细胞。随机将动物分为4组,造模后生理盐水组关节腔一次性注入生理盐水0.5 mL;富血小板血浆组注入12.5%富血小板血浆0.5 mL;人脐带间充质干细胞组注入1×107人脐带间充质干细胞0.5 mL;富血小板血浆(12.5%)联合人脐带间充质干细胞(1×107)组注入两种物质0.5 mL。造模后第12周,大体观察软骨损伤修复情况;苏木精-伊红染色光镜下观察损伤部位细胞修复情况;根据O’Driscoll组织学评分标准对造模后第12周切片进行组织学评分。结果与结论:软骨损伤后大体观察、苏木精-伊红染色组织学观察及组织学评分均显示富血小板血浆组、人脐带间充质干细胞组、富血小板血浆联合人脐带间充质干细胞组对软骨损伤的修复效果优于生理盐水组,差异有显著性意义(P<0.05),富血小板血浆组、富血小板血浆联合人脐带间充质干细胞组的修复效果优于人脐带间充质干细胞组,差异有显著性意义(P<0.05)。结果说明富血小板血浆、人脐带间充质干细胞均能促进软骨损伤的修复,而且富血小板血浆、富血小板血浆联合人脐带间充质干细胞较单独应用人脐带间充质干细胞效果好。

富血小板血浆体外培养人脐带间充质干细胞:细胞增殖及成骨分化的能力

背景:研究证明,富血小板血浆可促进骨髓间充质干细胞、脂肪来源干细胞及骨骼肌卫星细胞的增殖及成骨分化,但其是否可促进人脐带间充质干细胞的增殖及成骨分化目前尚不清楚。目的:观察不同质量浓度富血小板血浆对体外培养人脐带间充质干细胞增殖及成骨分化的影响。方法:将第5代人脐带间充质干细胞分6组培养,分别以含0,250,500,750,1 000,2 000 ng/L活化富血小板血浆的培养基中培养,1,3,5,7 d后,检测细胞增殖,筛选最佳富血小板血浆质量浓度,进行以下实验。将第5代细胞人脐带间充质干细胞分4组培养,空白对照组添加完全培养基,富血小板血浆组添加最佳浓度的富血小板血浆,成骨诱导组添加成骨诱导培养基,联合组添加最佳浓度的富血小板血浆与成骨诱导培养基,培养3,7,14 d,检测细胞碱性磷酸酶活性;培养7,14,21 d,检测骨标志基因骨桥蛋白、骨特异性转录因子、骨钙蛋白m RNA的相对表达量;培养21 d,检测细胞外基质的矿化。结果与结论:(1)培养5,7 d时,500,750,1 000 ng/L富血小板血浆组的细胞增殖高于0 ng/L富血小板血浆组(P<0.05),其中以750 ng/L质量浓度促增殖效果最明显,以此浓度进行以下实验;(2)联合组培养不同时间点的碱性磷酸酶活性高于其余3组(P<0.05);(3)联合组培养不同时间点的骨桥蛋白、骨特异性转录因子、骨钙蛋白m RNA相对表达量高于其余3组(P<0.05);(4)联合组细胞外基质矿化程度高于其余3组(P<0.05);(5)结果表明,750 ng/L富血小板血浆可促进人脐带间充质干细胞的增殖及成骨分化。

动态比浊法测定血小板聚集率及其临床应用

Platelet Agglutination Test is employed to detect platelet agglutination ability and to determine the important index of platelet. PAT is an accessory diagnostic method for hemorrhagic diseases and throm- botic diseases caused by platelet functional abnormality. PAT can be divided into microscopic and tur- bidimetric method. This paper deals with dynamic turbidimetric method, i. e. attractant is added to citrated plasma rich in platelet and agglutination rate of platelet is calculated with China - made in -struments and some related factors are discussed here. The results of platelet agglutination rate with dy- namic turbidimetric method of normal persons and patients clinically diagnosed with diabetes, hyper -thyroidism, etc. are discussed.

含人脐血来源富血小板血浆的三维生物打印墨水在裸鼠全层皮肤缺损治疗中的应用

目的探讨含人脐血来源富血小板血浆(HUCB-PRP)的海藻酸钠-明胶(AG)生物墨水(称为HUCB-PRP-AG生物墨水)的可打印性能和细胞相容性,及该生物墨水的三维打印组织治疗裸鼠全层皮肤缺损创面的效果。方法采用实验研究方法。制备含体积分数2.5%、5.0%、10.0%HUCB-PRP的HUCB-PRP-AG生物墨水,分别命名为1P-AG、2P-AG、4P-AG。取AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG,观察室温下外观,采用旋转流变仪检测黏度、储能模量和损耗模量。利用以上4种生物墨水分别进行三维生物打印并观察打印组织外观(后续使用交联后打印组织),将4种打印组织分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在Transwell小室内用HUVEC专用培养基共培养24 h,采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平(样本数为3);将4种打印组织分别用DMEM培养基培养12、24、48 h,进行干燥称重并计算降解率(样本数为3);将1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织分别用磷酸盐缓冲液培养0.5、24.0、48.0 h,采用酶联免疫吸附测定法检测培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的表达(样本数为5)。取16只6~8周龄雌性BALB/c-NU裸鼠建立背部全层皮肤缺损创面模型,分为创面仅覆盖医用水胶体敷料的常规对照组和另予HUCB-PRP滴加的HUCB-PRP组、AG打印组织覆盖的AG组、4P-AG打印组织覆盖的4P-AG组(每组4只),观察每组3只裸鼠伤后4、8、14 d创面愈合情况并计算创面愈合率;取每组剩余裸鼠伤后8 d创面组织,行苏木精-伊红染色后观察组织病理学改变,行免疫组织化学染色后观察CD31阳性新生血管情况。对数据行重复测量方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果在室温下,AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG均呈半透明液态;AG为淡黄色,1P-AG、2P-AG、4P-AG均为淡红色但颜色依次逐渐加深。在温度10℃和剪切率0.1~10.0 s-1范围内,AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG的黏度均随着剪切率的增加而减小;在温度10℃和角频率1~100 rad/s范围内,4种生物墨水的储能模量均大于损耗模量。4种生物墨水打印组织的分辨率与形态均相近。与1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织共培养24 h的HUVEC增殖水平分别为0.885±0.030、1.126±0.032、1.156±0.045,均明显高于与AG打印组织共培养的HUVEC的0.712±0.019(P<0.01);与2P-AG、4P-AG打印组织共培养24 h的HUVEC增殖水平均明显高于与1P-AG打印组织共培养的HUVEC(P<0.01)。1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织培养12、24、48 h的降解率均明显高于AG打印组织(P<0.01);2P-AG、4P-AG打印组织培养24、48 h的降解率均明显高于1P-AG打印组织(P<0.01);4P-AG打印组织培养12 h的降解率明显高于1P-AG打印组织(P<0.01),培养24、48 h的降解率均明显高于2P-AG打印组织(P<0.01)。培养0.5、24.0、48.0 h,2P-AG打印组织培养上清液中VEGF表达量均明显高于1P-AG打印组织(P<0.01),1P-AG和2P-AG打印组织培养上清液中VEGF表达量均明显低于4P-AG打印组织(P<0.01)。常规对照组与HUCB-PRP组裸鼠伤后8 d创面较伤后4 d干燥且缩小,HUCB-PRP组裸鼠伤后14 d创面较常规对照组缩小且无结痂;AG组、4P-AG组裸鼠伤后4 d创面上打印组织明显降解且创面无明显渗出,伤后8 d创面明显上皮化且缩小,伤后14 d创面无结痂;4P-AG组裸鼠伤后14 d创面完全上皮化。与常规对照组比较,AG组裸鼠伤后4 d创面愈合率明显降低(P<0.05),HUCB-PRP组、4P-AG组裸鼠伤后各时间点及AG组裸鼠伤后8、14 d创面愈合率均明显升高(P<0.01);与HUCB-PRP组比较,AG组裸鼠伤后4、8 d及4P-AG组裸鼠伤后4 d创面愈合率均明显降低(P<0.01),AG组裸鼠伤后14 d及4P-AG组裸鼠伤后8、14 d创面愈合率均明显升高(P<0.01);4P-AG组裸鼠伤后各时间点创面愈合率均明显高于AG组(P<0.01)。伤后8 d,常规对照组裸鼠创面组织可见大量炎症细胞浸润、少量新生微血管以及少量CD31阳性新生血管,HUCB-PRP组裸鼠创面组织可见大量炎症细胞浸润、丰富新生微血管以及较多CD31阳性新生血管,AG组裸鼠创面组织可见轻度炎症浸润、少量新生微血管以及少量CD31阳性新生血管,4P-AG组裸鼠创面组织可见轻度炎症浸润、大量新生微血管以及大量CD31阳性新生血管。结论HUCB-PRP-AG生物墨水具备良好的可打印性能和细胞相容性,其三维打印组织可促进裸鼠全层皮肤缺损创面血管化,加速创面愈合。